1. técnica de asepsia y otros

Técnica de asepsia y Uso de la campaña o cabina laminar

1. Nombre de la Materia: Introducción a la Biotecnología
Universidad
Dr. José Matías Delgado
Lic. Sonia Edith Solórzano
FACULTAD DE AGRICULTURA E INVESTIGACIÓN
AGRÍCOLA “ JULIA HILL DE O‘ SULLIVAN “

2. Unidad 5. La Biotecnología en la Industria Alimenticia
Contenido:
1. Técnica de asepsia
2. Uso de la campana o cabina de flujo laminar
3. Procesos fermentativos
3.1 Cultivo de células
3.2 Organismos organotróficos
3.3 Cepas bacterianas y fúngicas
3.4 Bioreactores
4. Fermentación
4.1 Lactosa
4.2 Embutidos
4.3 Levaduras
4.4 Hidrólisis del almidón
5. Uso como aditivos en alimentos
5.1 Producción de enzimas
5.2 Ácidos orgánicos
5.3 Aminoácidos
5.4 Vitaminas
5.5 Productos bajos en calorías
5.6 Sabores y pigmentos
5.7 Proteína celular

3. 1. Técnica de asepsia
En el laboratorio de microbiología es imprescindible trabajar con material y soluciones estériles con el
objeto de que los resultados que se obtengan correspondan a microorganismos que están presentes en la
muestra de estudio y no a contaminantes que procedan del medio
Asepsia se defina como la usencia de materia sética, es decir la falta absoluta de gérmenes, esto
comprende la presentación y uso correcto de ropa, instrumental, materiales y equipos estériles, sin
contaminarlos en todo procedimiento de trabajo
Técnicas para volver aséptico el instrumental:
A.Antisepsia o desinfección: Es el procedimiento por el que se destruyen los microorganismos patógenos
de superficies animadas o es el conjunto de procedimientos que tienen como objetivo destruir o eliminar
los agentes contaminantes de todo aquello que no pueda ser esterilizado, se dividen en:
 físicos: cepillado, fregado, etc.
 químicos: uso de antisépticos
B.La Esterilización: es el conjunto de procedimientos que destruyen los gérmenes, impiden su desarrollo
y evitan la contaminación o es la Técnica de saneamiento cuya finalidad es la desinfección de toda forma
de vida aniquilando todos los microorganismos, tanto patógenos como no patógenos incluidas sus formas
de resistencia (por ejemplo, las esporas, que son formas de resistencia de los gérmenes para sobrevivir en
el calor o frio excesivo, desecación, etc.) 
Existen diversos métodos para esterilizar, estos se dividen en
 Físicos: por calor o radiaciones
 químicos gases y líquidos

4. 1. Técnica de asepsia
A.Antisepsia o desinfección:
 Físicos: cepillado, fregado, etc.
El fregado, cepillado y lavado tienen como fin la disminución de la población bacteriana y
facilitar la acción de los antisépticos
Algunos detergentes, solventes y jabones utilizados en el laboratorio son: agua oxigenada,
alcohol etílico, Acido fénico, ácido cianhídrico, óxido de etileno, clorhexidina, derivados
mercuriales, derivados del yodo, ácido bórico e hipocloritos
Químicos: uso de antisépticos es una sustancia que impide el desarrollo de
microorganismos patógenos alejándolos o eliminándolos

5. B.La Esterilización: es el conjunto de procedimientos que destruyen los gérmenes,
impiden su desarrollo y evitan la contaminación.

Existen diversos métodos para esterilizar, estos se dividen en
1.Físicos: por calor o radiaciones
2.Químicos o mecánicos como la filtración, gases, líquidos entre otros
1.Físicos por calor es el método de elección para esterilizar el material de
laboratorio resistente a las altas temperaturas. La temperatura y el tiempo
requeridos para esterilizar un material dependen de que se esté utilizando calor seco
o calor húmedo.
El calor húmedo mata los microorganismos más rápidamente que el calor seco.
Cuando se utiliza calor húmedo, una temperatura de 121
0
C durante 20 minutos
proporciona condiciones fiables para esterilizar la mayor parte del material de
laboratorio. La esterilización por calor húmedo se realiza en cámaras presurizadas
o Autoclaves, a una presión de 1 atmósfera, se puede calentar el agua a 121
o
C, sin
que llegue a hervir.
Cuando la cámara alcanza esta temperatura y presión, su contenido puede ser
esterilizado en 20 minutos, a condición de que todo el aire de la misma haya sido
reemplazado por vapor de agua.

6. Las autoclaves son grandes cámaras de acero inoxidable que funcionan automáticamente. Los objetos
deben ser colocados de manera que el vapor de agua entre en contacto con todas las partes de cada uno
de ellos.
En muchos aspectos una autoclave se parece a una olla de presión casera. Son recipientes de metal con
paredes suficientemente fuertes para resistir la presión de vapor.
AUTOCLAVES:
Que materiales se esterilizan en autoclaves:
Los medios de cultivo
Las placas
Los materiales textiles como toallas y batas de
laboratorio
Pipetas de vidrio, matraces vacíos o tubos de ensayo
Instrumental como Pinzas, pipetas, jeringas, papel ,
otros
Las sustancias líquidas o sólidas que se añadan como
nutrientes al cultivo
En calor seco, se pueden esterilizar el
cristal y los instrumentos de metal , se
colocan en hornos de aire caliente a
170
o
C durante 90 minutos. Las prendas
textiles no pueden esterilizarse mediante
esta técnica debido a que la elevada
temperatura las carbonizan.

7.  
Esterilización por calor: El mechero Bunsen 
No sólo permite crear una zona aséptica de trabajo, también nos permite esterilizar
diverso instrumental como el asa de siembra o el asa de vidrio, mediante la aplicación
directa de calor.
Cada vez que un matraz o un tubo de ensayo se abre para añadir o sacar material, se pasa
la boca del mismo a través de la llama de un mechero, a fin de destruir cualquier
microorganismo que pueda haberse depositado allí. Este procedimiento disminuye la
probabilidad de que las células microbianas caigan en el recipiente y contaminen su
contenido.
Las asas e hilos de siembra, que los
microbiólogos utilizan para tomar
microorganismos de un medio y llevarlos a
otro, también se esterilizan flameándolos
en la llama de un mechero Bunsen hasta la
incandescencia.
mechero Bunsen 

8. Esterilización del asa de siembra.
 El asa de siembra o asa bacteriológica es probablemente la herramienta más usada
por el microbiólogo.
El asa de siembra, consiste de:
Un filamento con un lazo en uno de sus extremos.
El otro extremo está unido a un mango.
El filamento suele ser de una aleación metálica que se calienta muy rápidamente.

Esta herramienta tan simple nos permite tomar un inóculo de un cultivo bacteriano y
transferirlo a otro recipiente con medio de cultivo, o a un portaobjetos para su
observación microscópica.
 
El asa de siembra debe de esterilizarse a la llama antes de usarla y después de haber
sido usada. Debe de esterilizarse antes para evitar la contaminación de los
microorganismos en estudio con otros microorganismos que estuvieran presentes en el
filamento metálico. Debe de esterilizarse después de su uso para evitar que los
microorganismos que hemos tomado contaminen el laboratorio o sean incluso un
riesgo biosanitario.
 

9. Esterilización del asa de siembra.
  
Para esterilizar el asa de siembra ponerla lo más
vertical posible y acercar el filamento a la llama
del mechero Bunsen. Cuando todo el filamento
se haya puesto al rojo vivo se habrá conseguido
la esterilización. En ese momento retirarla y
dejar enfriar antes de tomar la muestra, para
evitar que el calor destruya a los
microorganismos.

asa de siembra.

10. Esterilización del asa de vidrio por flameado con alcohol
 
El asa de vidrio es utilizada para la extensión de un inóculo por toda la superficie de una placa de agar.

El vidrio no puede ser esterilizado mediante la aplicación de calor directo en el mechero Bunsen pues
podría fundirse o quebrarse.
 
Para su esterilización, el asa debe de ser introducida en un bote conteniendo alcohol 96º. Después,
escurrirla sacarla y flamearla a la llama del mechero Bunsen.

Cuando el alcohol sea consumido el fuego se apagará por sí solo.
Esperar un poco para enfriar y proceder a usarla.

La esterilización por flameado del alcohol es usada también con otros materiales e instrumentos como
pinzas, portaobjetos y cubre objetos, etc.
 
Precaución: Se recomienda tener mucho cuidado con el
bote de alcohol. Conviene trabajar con el bote alejado de la
llama del mechero. En caso de que el alcohol se prenda,
mantener la calma. El fuego del alcohol se apaga
fácilmente si tapamos el bote y dejamos que no haya
oxígeno.
asa de vidrio  

11. 2. Químicos o mecánicos como la filtración
Las células microbianas pueden retirarse de los líquidos o gases por filtración.
La filtración es lenta y cara (debe usarse un filtro nuevo cada vez); por esta razón, se
utiliza sólo para los líquidos termolábiles, que no se pueden esterilizar en el autoclave.
Los sólidos termolábiles se pueden esterilizar por filtración, si previamente se disuelven
en un líquido
Técnicamente, la filtración no esteriliza porque los virus pueden pasar a través de los
filtros, pero el proceso es suficiente para la mayoría de los estudios de rutina que se
llevan a cabo en el laboratorio.
Los filtros utilizados se denominan filtros de membrana. Estas membranas están
compuestas de nitrocelulosa, con un poro de diámetro constante.

12. 2. Químicos o mecánicos como la filtración
La nitrocelulosa es un derivado químico de la celulosa, que también se utiliza como
explosivo.
El diámetro de poro es aproximadamente 0,45 µm; este tamaño es lo suficientemente
pequeño como para eliminar todos los microorganismos, con excepción de los virus y
algunas bacterias muy pequeñas.
Un líquido se filtra haciéndolo pasar a través de un filtro de membrana acoplado a un
matraz especial.
Para hacer pasar el líquido por el filtro se utiliza una bomba de vacío; los
microorganismos quedan en la superficie de la membrana.

13. La filtración es el método de elección para esterilizar soluciones de vitaminas,
antibióticos v otros compuestos termolábiles, que son añadidos a los medios.

14. 3.LOS COMPUESTOS QUÍMICOS
La mayoría de los compuestos químicos no se pueden utilizar para esterilizar medios de
cultivo, pues permanecen en ellos y son tóxicos para los microorganismos que luego se han
de cultivar.
Los compuestos químicos también se usan para desinfectar los laboratorios. Por ejemplo, las
sales de amonio cuaternario se utilizan en la desinfección de mesas, bancos, etc.
El gas tóxico óxido de etileno se utiliza para esterilizar materiales termolábiles, tales como
ropas y contenedores de plástico. Este gas se aplica en cámaras presurizadas especiales,
parecidas a la autoclave.
Una vez que el experimento ha finalizado, se utiliza el hipoclorito sódico al 5% (lejía
doméstica) para destruir los cultivos de la mayoría de los microorganismos patógenos, para
no contaminar el medio ambiente

Hipoclorito de Sodio o lejía al 5%

15. Higiene del laboratorio y el personal
1.Mantener el laboratorio escrupulosamente limpio, retirando del mismo material que no
tenga relación con el trabajo.
2.Las superficies de las mesetas se descontaminaran al menos una vez al día y en caso de
derramamiento de sustancia potencialmente peligrosas de inmediato.
3.Velar por el cumplimiento del programa de lucha contra insectos y roedores.
4.En las zonas de trabajo del laboratorio, no comer, beber, fumar, guardar alimentos ni
aplicar cosméticos, realizando estas actividades solamente en las áreas autorizadas.
5.No humedecer las etiquetas de los frascos con la lengua.
6.Lavarse las manos después de haber manipulado material contaminado u otros y al
retirarse del laboratorio.
7.Uso de equipo de protección personal.

16.  
2. Uso de la campana o cabina de flujo laminar
En un laboratorio es indispensable que toda actividad sea realizada con pulcritud,
limpieza y precisión, pues de esto depende que los resultados sean cien por ciento
confiables.
Para que estas tareas puedan llevarse a cabo es indispensable contar con espacios
exclusivos que eviten la contaminación de partículas minúsculas.
Existen útiles herramientas que poseen la particularidad de ser construidas en acero
inoxidable, sin espacios ni uniones donde las esporas puedan acumularse
imperfecciones como es la  campana  o  cabina  de  flujo  laminar que es parte
imprescindible de un Laboratorio de microbiología, para la eliminación de partículas
en el aire, especialmente de posibles contaminantes como Bacterias, levaduras, entre
otros.
Una cámara de flujo laminar es una cabina en la que se emplea un extractor para forzar
el paso del aire y todas las partículas que este contiene a través de un filtro HEPA y
proporcionar aire limpio o estéril a la zona de trabajo,  son utilizadas para estudios que
requiera un ambiente limpio, o que necesiten un grado tal de pureza en el que no exista
ningún agente contaminante, igualmente que ninguna partícula de la muestra afecte el
medio ambiente del laboratorio. 

17.  
Elementos de una campana de flujo laminar :
El flujo de aire procedente de un ventilador, pasa a través de un filtro de alta eficiencia
HEPA, capaz de no dejar pasar partículas mayores de 0,3 micrómetros, y clasificado
metrológicamente hasta una eficiencia mínima del 99,97% según la norma europea
Funcionamiento de la campana o cabina de flujo laminar:
Se inicia la puesta en marcha arrancando el ventilador durante un periodo de quince
minutos, para purgar los filtros, y eliminar las posibles partículas adheridas a las
paredes.
Se debe desinfectar la zona del área de trabajo, teniendo la precaución de no utilizar
elementos clorados para su limpieza, ya que pueden producir la oxidación del acero
inoxidable, se recomienda la desinfección con Alcohol al 70%.
Al estabilizar la presión en el valor esperado, el flujo de aire ya es laminar.
Se inicia el proceso de trabajo previamente preestablecido
Se deben cumplir normas de seguridad de obligado cumplimiento relativas a la
indumentaria esterilizada
Se deben mantener siempre despejadas las rejillas de aireación.
Una vez terminado el proceso, se elimina del área de trabajo cualquier objeto
existente, dejándola vacía. A continuación se desinfecta con Alcohol al 70%.
Se mantiene en funcionamiento el ventilador durante quince minutos y a
continuación se apaga.

18. Su función es mantener el área de trabajo libre
de partículas, (estado aséptico) especialmente
de posibles contaminantes (bacterias u
hongos), que puedan acceder al cultivo.
Tipos: dos diferentes, que dependen del uso y
espacio que se tenga:
Campanas de flujo laminar horizontal
Campanas de flujo laminar vertical

19. Atentamente:
Sonia Solórzano
[email protected]