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Recuento de bacterias coliformes

1. Recuento de bacterias coliformes

2. ¿De qué se trata el tema? El recuento de bacterias coliformes es un ensayo microbiológico usado para evaluar la calidad sanitaria de los alimentos y del agua. Estas bacterias indican una posible contaminación por microorganismos entéricos como Escherichia coli. La norma boliviana NB 32005 regula los métodos para su detección y recuento en productos alimenticios.

3. ¿Dónde se aplica? Se aplica en laboratorios de control de calidad alimentaria, industrias lácteas, cárnicas, bebidas, aguas potables y residuales. Permite verificar que los productos cumplen los límites microbiológicos y que las condiciones de procesamiento son higiénicas.

4. Objetivos del ensayo • Detectar y cuantificar coliformes totales, fecales y Escherichia coli. • Evaluar el nivel de contaminación microbiana de los alimentos. • Verificar el cumplimiento de normas sanitarias. • Identificar deficiencias en la manipulación o procesamiento del alimento.

5. Instrumental y material Autoclave, estufa de incubación, baño maría a 44.5°C, pipetas, tubos de ensayo, cajas Petri, gradillas, refrigerador, pHmetro, asas de siembra, mechero Bunsen y medios de cultivo como Lauril sulfato triptosa, Verde brillante bilis, Caldo E. coli EC y Agar VRBA.

6. Medios de cultivo y reactivos • Caldo Lauril sulfato triptosa: fase presuntiva. • Caldo Verde brillante bilis 2%: confirmación coliformes totales. • Caldo E. coli EC: confirmación coliformes fecales. • Agar VRBA o EMB: recuento en placa y observación de colonias típicas. • Reactivo de Kovacs y medio SIMMONS para pruebas IMViC.

7. Procedimiento según NB 32005 1. Preparar diluciones seriadas del alimento según NB 32002. 2. Inocular 1 mL de cada dilución en tubos con caldo Lauril sulfato y tubos Durham. 3. Incubar a 35°C por 24–48 h. 4. Observar formación de gas (fase presuntiva). 5. Realizar pruebas confirmativas en caldos Verde brillante y EC. 6. Para E. coli, hacer pruebas IMViC y confirmar la presencia del microorganismo.

8. Técnica de vertido en placa 1. Colocar 1 mL de la muestra y sus diluciones en cajas Petri estériles. 2. Añadir 10–15 mL de Agar VRBA fundido a 47°C. 3. Mezclar y dejar solidificar. 4. Incubar a 35°C ± 2°C por 24–48 h. 5. Contar colonias típicas (rojas con halo) y atípicas. 6. Calcular resultados en UFC/g o mediante tabla NMP.

9. Resultados e interpretación • Los resultados se expresan en UFC/g o en NMP/g según el método. • Coliformes totales: indican contaminación general. • Coliformes fecales o E. coli: contaminación fecal. • El límite permisible depende del tipo de alimento y las normas vigentes.

10. Conclusiones El recuento de coliformes es esencial para garantizar la inocuidad alimentaria. Permite identificar fallas de higiene en la producción y prevenir riesgos para la salud pública. El cumplimiento de la NB 32005 asegura confiabilidad y uniformidad en los resultados de laboratorio.