Conceitos Basicos de Microgiologia

Introdução a Microbiologia Aplicada

1. Principais conceitos e técnicas
utilizados na microbiologia
Aluno: Ivson Cassiano de O. Santos



2012
LAQB
Laboratório de Analises
Químicas e Biológicas

2. INTRODUÇÃO

A Microbiologia é o ramo da biologia que estuda os
microrganismos, incluindo eucariontes unicelulares e
procariontes, que incluem Bactérias, Fungos, Vírus,
Protozoários, Algas unicelulares, Viróides e Prions.




A Bacteriologia é uma ciência, ramo da Biologia, que
estuda as bactérias e suas propriedades.

3. ambiente apropriado
instrumentais estéreis
luvas, máscaras e óculos protetores
Flambar as alças e agulhas e boca dos tubos.
limpar e desinfetar periodicamente a bancada.



Todas as operações envolvendo manipulação de culturas e
meios de cultura deverão ser efetuadas na área de proteção
conferida pela chama do bico de Bunsen.

CONDUTAS, BARREIRAS, EQUIPAMENTOS E
INSTRUMENTAIS DE PROTEÇÃO INDIVIDUAL E AMBIENTAL

4. ÁLCOOL 70%
Sua atividade ocorre pela desnaturação de proteínas e remoção de
lipídios, inclusive dos envelopes de alguns vírus. Para apresentar
sua atividade germicida máxima, o álcool deve ser diluído em
água, que possibilita a desnaturação das proteínas. A concentração
recomendada para atingir maior rapidez microbicida com o álcool
etílico é de 70% em peso e com o isopropílico, entre 60 e 95%.


Possuir fácil aplicabilidade, baixo custo e reduzida toxicidade.


Diluição correta e tempo de exposição

5. CUIDADOS DE ASSEPSIA NA REMOÇÃO DE BACTÉRIAS

6. CUIDADOS DE ASSEPSIA NA REMOÇÃO DE BACTÉRIAS
Fig.: Procedimento para remover bactérias de um caldo com a
alça de platina

7. CUIDADOS DE ASSEPSIA NA REMOÇÃO DE BACTÉRIAS
Fig.: Procedimento para inocular um meio Agar inclinado a partir de
uma Placa de Petri

8. INOCULAÇÃO NA PLACA DE PETRI
Estrias múltiplas ou
esgotamento
Isolamento de colônias
bacterianas e obtenção
culturas puras.

9. DESCONTAMINAÇÃO
Um dos principais problemas nos laboratórios de microbiologia é a grande
quantidade de resíduos contendo microrganismos infecciosos.

Autoclaves





Desinfecção química
Os recipientes que acondicionam material com perigos microbiológicos
devem conter um desinfetante na diluição de uso apropriada.

Compostos à base de fenol 5% , hipocloritos (água sanitária a 2%) e
glutaraldeído 2%, formaldeído (solução alcoólica 8% e solução aquosa
10%).

10. BANCO DE DADOS

O nosso laboratório dispõe de uma tabela com as bactérias presentes
em estoque com suas devidas informações e observações.
Bactéria Cepa/numero Origem
Espécie
Condições de crescimento Incubação Condições de estoque
Ultima data de estoque
Observações

11. INTRODUÇÃO
Cepas bacterianas

Isto deriva dos fenômenos espontâneas ou
induzidos da natureza ou mesmo
artificialmente, chamado "Mutação Genética"

12. CEPAS PADRÃO
São cepas destinadas ao controle de qualidade
bacteriológico.

Apresentam resposta conhecida a uma série de
provas laboratoriais, entre as quais bioquimismo,
reação tintorial ao Gram, morfologia e resposta a
antibióticos.
ATCC AYE SDF
ACICU AB

13. CEPAS LAQB
Cepas ATCC - American Type Culture
Collection.
Escherichia coli ATCC 10536

14. ESCHERICHIA COLI ATCC 10536

Referencia para esta cepa :
Di Modugno E et al. 1994
Misiek et al. 1973.

15. STAPHYLOCOCCUS AUREUS ATCC 8096

16. PSEUDOMONAS AERUGINOSA ATCC 9027

17. MICROCOCCUS LUTEUS ATCC 10240
ATCC 14452

18. MEIO DE CULTURA

Conjunto de substâncias, formuladas de maneira adequada,
capazes de promover o crescimento bacteriano, em condições
laboratoriais. Para isso um meio de cultura necessita conter
características básicas, que incluem:

- Fonte de carbono e nitrogênio

- Fonte de energia

- Sais minerais

- Fatores de crescimento

- Condições físicas

- Esterilização

19. TIPOS DE MEIOS DE CULTURA
Meios de enriquecimentos
Caldo Brain Heart Infusion (BHI)
Caldo Tetrationato

Meios de transporte
Meio de Stuart
Meio de Cary-Blair
Caldo Tioglicolato

oMeio seletivo
Agar Manitol Salgado
Agar SS

20. TIPOS DE MEIOS DE CULTURA
Meio diferencial
Agar Eosin Meteiolene Blue (EMB)
Agar McConkey
 Agar Hektoen.

Meio indicador
Agar Triple Sugar Iron (TSI)
Agar Citrato de simimons.

21. PROCEDIMENTOS E CUIDADOS NA PREPARAÇÃO
DE MEIOS DE CULTURA

 Na preparação de um meio, deve-se adicionar uma pequena
quantidade de água até que o meio fique úmido e então completar
com o resto de água homogeneizando a solução.






 O tempo de esterilização em autoclave é de 15 minutos á
temperatura de 121°C.

Os meios devem ser autoclavados com as tampas semi-abertas,
para que a esterilização seja por igual em todo o conteúdo dos
tubos - tampas fechadas não permitem a entrada do vapor.

22. Todos os meios confeccionados
devem ser devidamente
identificados com o nome do
meio e do responsável, data de
fabricação, data de validade e
tipo de armazenamento.

23. MANUTENÇÃO DE CULTURAS
 A manutenção de culturas é realizada para que
se possa manter viável as cepas em estoque.


 De acordo com a cepa a concentração de glicerol
pode variar.
Ex.: E. coli 50% glicerol e 50% Ágar Nutriente.


Prazo de validade: 3 meses á -20°C.

24. PLANO DE TRABALHO LAQB - 2012
Objetivo: Fazer o levantamento de cepas atualmente encontradas no
LAQB e preparar o mesmo para aquisição de outras.

Método:

1°- Inoculado as amostras em meio enriquecido para proporcionar o
crescimento das amostras. O meio de enriquecimento escolhido foi o
caldo BHI, após a semeadura , incubar por 24h á 37ºC.

Resultados: POSITIVO para turvação no meio.
NEGATIVO para coloração intacta do meio.

2° - De acordo com os resultados obtidos na etapa 1, será semeado as
amostras de acordo com o meio seletivo de cada espécie.

Staphylococcus aureus = manitol
E. coli = EMB
Pseudomonas areuginosa = agar Pseudomonas
Micrococcus luteus = MH

25. Análise do crescimento bacteriano (morfologia e coloração)

Método:
O Manitol é fermentado pelo Staphylococcus Aureus,
mas não pela maioria dos Staphylococcus; o Sal inibe o
crescimento da maioria dos microrganismos, mas o
Staphylococcus Aureus.
Meio Manitol salgado para
Staphylococcus Aureus.
Meio EMB (Eosine Methylene
Blye) para E. coli
O meio EMB, o azul de Eosina e Metileno
inibem o crescimento de Gram positivas. E. coli
apresentam colônias escuras ou verde metalico,
fermentação da lactose e sacarose.

26. Análise do crescimento bacteriano (morfologia e coloração)
Meio Agar Pseudomonas.
Permite a diferenciação de P. aeroginosa de outras
Pseudomonas. As P. aeroginosa apresentam
pigmento azul-verde escuro que se funde ao meio.
Micrococcus luteus em meio MH
M. luteus apresentam pigmentação amarela
tanto em meio AN, quanto em MH.
Método:

27. 3° - Ressemear, por esgotamento, todas as amostras crescidas
e isoladas em meio agar nutriente 24h 37°C
Método:
Meio Agar Nutriente
4° - Teste bioquímico

A investigação das atividades metabólicas das bactérias “in vitro” é chamada de
Provas Bioquímicas e servem para auxiliar o microbiologista a identificar grupos ou
espécies de bactérias

28. 4° - Teste bioquímico

Meio TSI, meio SIM, meio citrato de Simons, Meio úreia.

5° - Preparo para estoque

Semear em placa, com swab, as amostras cultivadas no caldo

6° - Estoque





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Método:

29. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
APOSTILA DE AULAS PRÁTICAS – DISCIPLINA:
BACTERIOLOGIA. PROFESSOR ALOYSIO
CERQUEIRA, UFF.

Descrição dos Meios de Cultura Empregados nos
Exames Microbiológicos – ANVISA.

Protocolos para Preparo de Meios de Cultura da
Embrapa Agrobiologia, 1999.

Biossegurança em Laboratórios Biomédicos de
Microbiologia - 3.a edicao, 2006.