GENE EXPERT.pptx

FUNDAMENTOS DE TECNICA GENE EXPERT

1. PRESENTA: K. GEOVANNA ZEVALLOS QUISPE MR1 PATOLOGÍA CLÍNICA Equipo Automatizado de Amplificación de Ácido Nucleico ( PCR)

2. Generalidades

3. Ácidos nucleicos

4. La retrotranscripción es una reacción para la conversión del ARN en ADNc y en general se lleva a cabo antes de una PCR, cuando se pretende analizar secuencias de ARN. Transcripción reversa (RT- qPCR )

5. REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA Es una prueba molecular de diagnóstico que permite detectar un fragmento del material genético de un patógeno

6. Metodología que se basa en la amplificación e hibridación simultánea del producto amplificado con sondas complementarias marcadas con fluorescencia. Ello permite visualizar el resultado a tiempo real, a través de un grafico donde se observa el grado de fluorescencia emitida, en función de la ausencia/presencia y cantidad de ADN de M. tuberculosis complex existente en la reacción. PCR EN TIEMPO REAL

7. PRINCIPIO DE DISEÑO

8. FLUOROCROMOS

9. Tecnología de sondas con señales luminosas Secuencia diana Espaciador Fluoróforo Supresor

10. GÉNERO MYCOBACTERIUM 165 Especies Crecimeinto lento, aerobios 0.2-0.6 um , bacilar recta, no esporulado M. tuberculosis complex M. leprae Se tiñe con método Zielh Neelsen Cepa susceptible a todos los medicamentos de primera línea contra la TB Genoma circular que contiene 3924 genes con alto contenido de guanina y citosina (65.6 %)

11. G ENOTYPE G ENEXPERT

12. Resistencia a la rifampicina Mutación relacionada con la R es de 1 x 1.000,000-10,000,000 La diana ( 95-98% ) de los casos de resistencia es el gen ropB Sustituciones concentradas en la región core o RRDR ( rifampin resistance determining región), constituida por 81 pb (codón 507-533) La mayoría de cepas resistentes a la R, lo son también a la H “Marcador de tuberculosis MDR”

13. Las mutaciones en el aminoácido H526P/D/Y y S531L afectan al 60-86 % de las cepas resistentes a rifampicina

14. Especificaciones técnicas

15. PLATAFORMA Xpert MTB/RIF El ensayo Xpert MTB/RIF, es una plataforma de PCR en tiempo real automatizada, integrada y semicuantitativa , que utiliza la plataforma GeneXpert ( Cepheid ). Esta prueba identifica el Complejo Mycobacterium tuberculosis y detecta mutaciones más frecuentes en el gen rpo β asociadas a resistencia a rifampicina (RIF), directo de muestras de pacientes.

16. GeneXpert – Xpert MBT/RIF

17. Evaluación de desempeño

18. FICHA DE DATOS

19. MUESTRA DE ESPUTO ADECUADA MUCO-PURULENTO MUCOIDE SALIVA HEMOPTOÍCA Frasco estéril, transparente, descartable, boca ancha y tapa rosca Datos de correspondientes a solicitud Cantidad minima de muestra: 1 ml Las muestras deben refrigerarse a 2-8°C durante un máximo de 10 días. – Si es necesario, las muestras pueden almacenarse como máximo a 35°C hasta 3 días y después pueden refrigerarse a 2-8°C por una duración combinada de hasta 10 días

20. PROCESAMIENTO DE MUESTRA

21. Procedimiento

22. RESULTADOS

23. LECTURA DE CURVAS DETECTADO NO DETECTADO

24. MTB no detectado Resultado negativo Cada cartucho incluye un Control de procesamiento de la muestra (SPC) que contiene esporas no infecciosas en la forma de una torta de esporas secas, para verificar el procesamiento adecuado de MTB. Verifica que ocurrió la lisis de MTB Verifica si el procesamiento de la muestra fue adecuado Detecta inhibidores, asociados a la muestra, en la prueba de PCR en tiempo real SPC debe ser positivo en una muestra en que el resultado es MTB No detectado

25. MTB detectado Resistencia a RIF no detectada

26. MTB detectado Resistencia a RIF detectada

27. MTB detectado Resistencia a RIF indeterminado

28. INFORME DE RESULTADOS No descarta diagnostico, se debe esperar resultado de cultivo “Iniciar tratamiento” Repetir el examen

29. Gestión del Mantenimiento

30. Retire y deseche los cartuchos de forma adecuada Limpiar y desinfectar el área de trabajo Garantizar un espacio libre de 10 cm alrededor del equipo Colocar una capa protectora cuando no se esté utilizando el equipo MANTENIMIENTO DIARIO

31. MANTENIMIENTO SEMANAL Desinfectar el interior del compartimiento de cartuchos Reiniciar el instrumento GeneXpert y el computador

32. MANTENIMIENTO MENSUAL Desinfectar los émbolos

33. Aflojar los 4 tornillos de la parte gris trasera del equipo GeneXpert

34. MANTENIMIENTO ANUAL Calibración cada año o cada 2000 pruebas de cada módulo del equipo

35. CONTROL DE CALIDAD La prueba de Xpert MTB/RIF es un sistema de microfluidos integrado compuesto por el equipo GeneXpert , cartuchos de prueba Xpert MTB / RIF, un protocolo automatizado (amplificación de ADN y la detección simultánea de la fluorescencia) con los controles internos (CPC y SPC)

36. GRACIAS