Identificación de proteínas.

PRÁCTICA NO. 6
IDENTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS
MATERIA
BIOQUÍMICA
INTEGRANTES
Isaías Ojeda Arlette Guadalupe
Muñoz Gutiérrez Abigail del Rosario
Silva Lerma Sanjuana Ivette
Vázquez Celio Andrea

1. CETIS 62
PRÁCTICA NO. 6
IDENTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS
MATERIA
BIOQUÍMICA
DOCENTE
IBQ Marta Gabriela Aceves Morales
ESPECIALIDAD
LABORATORIO CLÍNICO
GRADO: 6° SEMESTRE GRUPO: “E”
EQUIPO
NUM.7
INTEGRANTES
Isaías Ojeda Arlette Guadalupe
Muñoz Gutiérrez Abigail del Rosario
Silva Lerma Sanjuana Ivette
Vázquez Celio Andrea

2. IDENTIFICACION DE PROTEINAS
OBJETIVO: Realizar experimentos para identificar las proteínas, como la
configuración y la identificación por el reactivo BIURET.
FUNDAMENTO: Proteína, cualquiera de los numerosos compuestos orgánicos
constituidos por aminoácidos unidos por enlaces peptídicos que intervienen en
diversas funciones vitales esenciales, como el metabolismo, la contracción
muscular o la respuesta inmunológica. Se descubrieron en 1838 y hoy se sabe
que son los componentes principales de las células y que suponen más del 50%
del peso seco de los animales. El termino proteína deriva del griego proteico, que
significa primero.
El plasma sanguíneo normal contiene de 6.5 a 7.5gr de proteínas por 100al. Las
proteínas plasmáticas pueden dividirse en 3 grupos: a) fibrinógenos; b) globulinas;
c) albuminas. Cada una de estas variedades pueden ser precipitadas en bases a
su solubilidad en soluciones salinas, y se logra una separación simple o burda
mediante precipitación salina de dichas proteínas o fuerzas iónicas diferentes.
La precipitación salina con sulfato de amonio es una etapa preliminar útil en
muchas técnicas de aislamiento de proteínas en particular de enzimas. Existen 2
tipos de lograr esta etapa de purificación o bien sea añadiendo sulfato de amonio
sólido, o bien sea con una solución saturada (100 por 100) neutra del mismo. En el
primer caso, existe ventaja de mantener en un mínimo el aumento de volumen; en
cambio la solución saturada presenta la ventaja de una manipulación más
cómoda. Las moléculas proteicas van desde las largas fibras insolubles que
forman el tejido conectivo y el pelo, hasta los glóbulos compactos solubles,
capaces de atravesar la membrana celular y desencadenar reacciones
metabólicas. Tienen un peso molecular elevado y son específicas de cada especie
y de cada uno de sus órganos. Se estima que el ser humano tiene unas 30.000
proteínas distintas, de las que solo un 2% se ha descrito con detalle. Las proteínas
sirven sobre todo para construir y mantener las células, aunque su
descomposición química también proporciona energía, con un rendimiento de 4
kilocalorías por gramo, similar al de los hidratos de carbono. Las enzimas son
proteínas, al igual que la insulina y casi todas las demás hormonas, los
anticuerpos del sistema inmunológico y la hemoglobina.

3. REACCIONES COLOREADAS ESPECÍFICAS (BIURET)
Entre las reacciones coloreadas específicas de las proteínas, que sirven por tanto
para su identificación, destaca la reacción del Biuret. Esta reacción la producen los
péptidos y las proteínas, pero no los aminoácidos ya que se debe a la presencia
del enlace peptídico CO-NH que se destruye al liberarse los aminoácidos.
El reactivo del Biuret lleva sulfato de Cobre(II) y sosa, y el Cu, en un medio
fuertemente alcalino, se coordina con los enlaces peptídicos formando un
complejo de color violeta (Biuret) cuya intensidad de color depende de la
concentración de proteínas.

4. PROCEDIMIENTO
1. En cada tubo de ensaye colocar 2ml de solución de proteína (diluida al 1%).
2. Añadir a cada tubo 2ml de NaOH al 10% y agitar.
3. Agregar gota a gota solución de sulfato cúprico al 1% hasta la aparición de
un color rosa o violeta (máximo 10 gotas).
4. Reportar a que gota aparece el color.

REACCION XANTOPROTEICA
La reacción xantoproteica es un método que se puede utilizar para determinar la
presencia de proteínas solubles en una solución, empleando ácido nítrico
concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con
aminoácidos portadores de grupos aromáticos, especialmente en presencia de
tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un álcali, se torna color
amarillo oscuro.

La reacción xantoproteica se puede considerar como una sustitución electrofílica
aromática de los residuos de tirosina de las proteínas por el ácido nítrico dando un
compuesto coloreado amarillo a pH ácido.


PROCEDIMIENTO
1. Colocar en cada tubo de ensaye 3ml de proteína.
2. Añadir con cuidado y lentamente 1ml de HNO3 concentrado.
3. Calentar en baño maría por 2min, y enfriar a chorro de agua.
4. Agregar gota a gota solución de NaOH concentrado (máximo 10 gotas) a él
vire de color. Observar y reportar resultados.

5. COAGULACION POR CALOR



PROCEDIMIENTO
1. Calentar a hervir 5ml de solución de proteína
2. Añadir 2 gotas de ácido acético al 1%
3. Colocar en 4 tubos, la solución repartida por igual y agregar de la siguiente
manera:
Tubo1= 1ml acetona
Tubo2= 1ml de éter
Tubo3= 1ml de butanol
Tubo4= 1ml tolueno
4. Agitar fuertemente para tratar de disolver el coagulo. Reportar en tabla.
5. Los tubos que no disolvieron el coagulo, agregar 3 gotas de NaOH
concentrado, y agitar.
6. Observar y anotar diferencias.



OBTENCION DE CASEINA DE LA LECHE

La caseína es un conjunto heterogéneo de proteínas por lo que es difícil fijar una
definición, sin embargo, todas las proteínas englobadas en lo que se denomina
caseína tienen una característica común que precipitan cuando se acidifica la
leche a pH 4.6 por ello a la caseína también se le suele denominar proteína
insoluble de la leche.
La caseína es una proteína de la leche del tipo fosfoproteína que se separa de la
leche por acidificación y forma una masa blanca. Las fosfoproteínas son un grupo
de proteínas que están químicamente unidas a una sustancia que contiene ácido
fosfórico, por lo tanto, su molécula contiene un elemento fósforo. La caseína
representa cerca del 77 al 82 por ciento de las proteínas presentes en la leche y el
2.7 por ciento en la composición de la leche líquida.

6. PROCEDIMIENTO
1. Colocar 100ml de leche en un vaso de precipitado
2. Agregar 100ml de agua destilada
3. Con una pipeta añadir HCl 0.2N hasta obtener un pH de 4.8
4. Dejar reposar hasta que el sedimento precipite.
5. Suspender el precipitado en 100ml de agua destilada y dejar reposar.
6. Repetir este lavado 4 veces.
7. Filtrar el precipitado final en un embudo Buchner, colectando en el papel la
proteína.
8. Suspender la caseína en 25ml de agua destilada, agitar para homogeneizar
y filtrar. Repetir 4 veces.
9. Después del último lavado, suspender la proteína en 5ml de éter y 5ml de
acetona, y filtrar.
10. Colocar el polvo obtenido en un desecador con cloruro de calcio y pesar el
polvo 24 horas después.

7. MATERIALES
REACCIONES COLOREADAS ESPECÍFICAS (BIURET)
MATERIAL
Pescado

Espinaca

Levadura

Tubos de ensaye

Grenetina

leche

8. REACTIVOS
NaOH al 10%

Sulfato cúprico al 1% en gotero



REACCION XANTOPROTEICA
MATERIAL

Tubos de ensaye

Gradilla

Baño maría

9. REACTIVOS
NaOH concentrado (gotero)

HNO3 concentrado



COAGULACION POR CALOR

MATERIAL

Tubos de ensaye

Gradilla

Baño maría

10. REACTIVOS
Acido acético al 1%

Acetona

Éter

Tetracloruro de carbono

Butanol

NaOH concentrado con
gotero


OBTENCION DE CASEINA DE LA LECHE
MATERIAL

2 vasos de precipitados de
250ml

1 probeta de 100ml

1 embudo

2 papel filtro

11. REACTIVOS
leche entera

HCl 0.2N

Acetona

Éter



RESULTADOS

 REACCIONES COLOREADAS ESPECÍFICAS (BIURET )

PROTEÍNAS:
 LEVADURA
 ESPINACAS
 GRENETINA
 LECHE
 PESCADO
 HUEVO

12. PROTEÍNA NO. DE GOTAS AL
CAMBIO DE COLOR
COLOR DE LA
REACCIÓN

LEVADURA 5 gotas

Lila
ESPINACAS 7 gotas

Verde fuerte
GRENETINA 3 gotas

Azul
LECHE 2 gotas

Azul
PESCADO 3 gotas

Morado-azulado
HUEVO 6 gotas

morado

El resultado obtenido en esta reacción fueron los colores en tonalidades desde
morado hasta lila, así como el azul también estuvo presente solo en algunas
proteínas.
Imágenes anexadas:

13.  REACCION XANTOPROTEICA
PROTEÍNAS:
 LEVADURA
 ESPINACAS
 GRENETINA
 PESCADO
 HUEVO
 LECHE

14. PROTEÍNA NO. DE GOTAS AL
CAMBIO DE REACCIÓN
OBSERVACIONES
PRESENTADAS
LEVADURA 4 gotas Sin precipitado
Formación de cuajo con
grumos de color amarillo

ESPINACA 6 gotas Formación de precipitado
color café oscuro
Presente de forma líquida
pero espesa

GRENETINA 9 gotas Reacción líquida
Formación de cuajo con
grumos en la parte de
arriba del líquido de color
amarillo huevo

PESCADO 8 gotas Formación de precipitado
color amarillo en forma de
sólido

HUEVO 3 gotas Formación de cuajo o
grumos en la parte
superior color anaranjado
rojizo
Seguida por una segunda
reacción blanquisa en
forma de cuajo con algo
de espuma
Precipitado de color
amarillo
Espeso

LECHE 6 gotas Reacción espesa
Formación de grumos en
la parte superior de color
café-amarillo

15. En la realización de esta técnica se notó el cambio de consistencia de cada
proteína al reaccionar con el reactivo, cambiando totalmente su consistencia tanto
física como química, pues principalmente en la mayoría de las proteínas se formó
un precipitado y un grumo generalmente de color amarillo.
Imágenes anexadas










 COAGULACION POR CALOR

PROTEÍNAS:
 LEVADURA
 LECHE
 PESCADO
 GRENETINA
 ESPINACAS
 HUEVO

16. PRETEÍNAS REACTIVOS
ACETONA ÉTER
ETÍLICO
BUTANOL TOLUENO
LEVADURA Soluble Soluble Soluble Insoluble

LECHE Soluble Soluble Soluble Insoluble

PESCADO Soluble Soluble Insoluble Insoluble

GRENETINA Soluble Soluble Insoluble Insoluble

ESPINACAS Soluble Insoluble Insoluble Insoluble

HUEVO Insoluble Insoluble Insoluble Insoluble


En la realización de esta técnica generalmente la mayoría de las proteínas fueron
insolubles al tolueno; una de las mayores observaciones fue que el huevo fue la
única proteína que es insoluble a estos reactivos de esta técnica.
Es muy importante que al momento de realizar esta técnica debemos ser muy
precisos en cuento a las cantidades a utilizar ya que un exceso de este o una falta
puede alterar por completo el resultado de la técnica.
Imágenes anexadas:

19.  OBTENCION DE CASEINA DE LA LECHE


PROTEÍNAS:
 LECHE

Generalmente en la primera parte de precipitar, observamos que la leche
principalmente el contenido de caseína debido a su diferencia de densidades se
fue hasta el fondo, formando el precipitado de caseína.
El resultado final de caseína tuvo una consistencia sólida-líquida, con formación
de pequeños grumos, en color blanco y que a su vez tuvo una consistencia algo
espesa.


Imágenes anexadas:

20.  REACCION XANTOPROTEICA
PROTEÍNAS:
 LEVADURA
 ESPINACAS
 GRENETINA
 PESCADO
 HUEVO
 LECHE

21. PROTEÍNA NO. DE GOTAS AL
CAMBIO DE REACCIÓN
OBSERVACIONES
PRESENTADAS

LEVADURA 4 gotas Sin precipitado
Formación de cuajo con
grumos de color amarillo

ESPINACA 6 gotas Formación de precipitado
color café oscuro
Presente de forma líquida
pero espesa

GRENETINA 9 gotas Reacción líquida
Formación de cuajo con
grumos en la parte de
arriba del líquido de color
amarillo huevo

PESCADO 8 gotas Formación de precipitado
color amarillo en forma de
sólido

HUEVO 3 gotas Formación de cuajo o
grumos en la parte
superior color anaranjado
rojizo
Seguida por una segunda
reacción blanquisa en
forma de cuajo con algo
de espuma
Precipitado de color
amarillo
Espeso

LECHE 6 gotas Reacción espesa
Formación de grumos en
la parte superior de color
café-amarillo

22. En la realización de esta técnica se notó el cambio de consistencia de cada
proteína al reaccionar con el reactivo, cambiando totalmente su consistencia tanto
física como química, pues principalmente en la mayoría de las proteínas se formó
un precipitado y un grumo generalmente de color amarillo.
Imágenes anexadas

23. OBSERVACIONES
La caseína luego de que la leche se cortó no fue soluble en agua, debido a este
motivo se le pudo filtrar.
Al realizar las diferentes pruebas con la albúmina se pudo comprobar
experimentalmente efectivamente que se trata de una proteína.
Se pudo observar que mediante varias reacciones que la clara de huevo tiene
proteínas que la conforman esta proteína es la ovoalbúmina.
Luego de realizada la reacción de Biuret la muestra de leche se tornó violeta, por
lo que podemos decir que existen enlaces pepiticos y por lo tanto proteínas en la
muestra y dicha proteína es la caseína.
En el ensayo de Xantoproteico podemos percibir un color amarillento, por lo que
nos muestra que la existen proteínas en la muestra ya que el color amarillo es
representativo de los restos aromáticos como la Tirosina y la Fenilalanina.
Observamos que es muy importante saber identificar las proteínas en los
alimentos que consumimos diariamente esto se pudo observar a través de las
diferentes reacciones que se presentaron en los alimento llevados.

24. CONCLUSIONES
Las proteínas constituyen una de las moléculas más importantes en el organismo
ya que cumplen muchas funciones.
Las proteínas están constituidas por aminoácidos por los cuales los métodos se
basan en el reconocimiento de los aminoácidos
En esta práctica pudimos observar el contenido de proteína en los diferentes
alimentos que utilizamos, y como se pudo observar pues los alimentos que tienen
más proteína son la clara de huevo, el pescado y la leche.
Por lo tanto pudimos ver que este no es muy recomendado para la nutrición en las
personas y que lo que si podemos consumir para tener un buen balance de
proteínas en nuestro cuerpo es el huevo aunque solo se pueden consumir de uno
a dos máximo, el pescado, la leche que ayuda a tener un hermoso cabello y
huesos resistentes en los niños.
En las reacciones donde se obtuvo precipitación se debió a un cambio en el
estado físico de la proteína, mientras que en la coagulación se ha producido un
cambio en el estado físico y en la estructura química por eso es irreversible.
Las proteínas son sensibles con las sales metálicas pesadas (mercurio, cobre,
plomo) formando precipitados

25. CUESTIONARIO
1. ¿Cómo se manifiesta la desnaturalización de las PROTEINAS?
La desnaturalización de proteínas se da en la clara de los huevos, que son en
gran parte albúminas en agua. En los huevos frescos, la clara es transparente
y líquida; pero al cocinarse se torna opaca y blanca, formando una masa
sólidainter comunicada. Esa misma desnaturalización puede producirse a
través de una desnaturalización química, por ejemplo volcándola en un
recipiente con acetona. Desnaturalización
Irreversible de la proteína de la clara de huevo y pérdida de solubilidad,
causadas por la alta temperatura (mientras se la fríe).

2. Cuál de los tres agentes utilizados tiene mayor poder de desnaturalización?
El efecto de la temperatura, cuando la temperatura es elevada aumenta la
energía cinética de las moléculas con lo que se desorganiza la envoltura
acuosa de las proteínas y, se desnaturalizan.

3. ¿Cómo podríamos saber que una sustancia desconocida es una proteína?
Para saber si una sustancia desconocida, es una proteína se utiliza el reactivo
de Biuret es aquel que detecta la presencia de proteínas, péptidos cortos y
otros compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de
composición desconocida.Está hecho de hidróxido potásico (KOH) y sulfato
cúprico (CuSO4), junto con(KNaC4O6·4H2O). El reactivo, de color azul,
cambia a violeta en presencia de proteínas, y a rosa cuando se combina con
polipéptidos de cadena corta. El Hidróxido de Potasio no participa en la
reacción, pero proporciona el medio alcalino necesario para que tenga lugar.

4. Que coloración da la reacción del Biuret?
La coloración que presenta es el color violeta, indicando la presencia de
proteínas.

5. ¿Una proteína coagulada podría dar la reacción del Biuret?
Las proteínas, debido al gran tamaño de sus moléculas, forman con el agua
soluciones coloidales. Estas soluciones pueden precipitar con formación de
coágulos al ser calentadas a temperaturas superiores a los 70 ªC o al ser
tratadas con soluciones salinas, ácidos, alcohol, etc.Si una proteína coagulada
podría dar la reacción de Biuret, porque el reactivo reacciona con cualquier
proteína, liquida o sólida, por ejemplo cuando haces una cuantificación de
proteínas en suero (liquida) o cuando haces una prueba cualitativa en huevos,
carne, papas, etc.

26. 6. Si se realiza la reacción del Biuret sobre un aminoácido como la Glicina ¿es
positiva o negativa? ¿Por qué?
Por qué detecta la presencia de compuestos con dos o más enlaces peptídicos
y, por tanto, sirve para todas las proteínas y péptidos cortos.
El reactivo del biuret (sulfato de cobre en una base fuerte) reacciona con los
enlaces del péptido y cambia el color cuando entra en contacto con otra
sustancia, tornándose VIOLETA. Mientras más cantidad de proteína esté
presente en la solución, más oscuro es el color.
Por ejemplo cuando se calienta la urea a 180 celsius, se descompone
transformándose en un compuesto llamado "biuret", el cual en presencia de
Cu2+ en solución alcalina forma un complejo color violáceo ya que reconoce
los enlaces peptídicos de las proteínas, no es específico para identificación de
proteínas con dos o más enlaces peptídicos.

7. Explica la reacción Xantoproteíca.
La reacción xantoproteica es un método que se puede utilizar para determinar la
presencia de proteínas solubles en una solución, empleando ácido nítrico
concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con
aminoácidos portadores de grupos aromáticos, especialmente en presencia de
tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un álcali, se torna color
amarillo oscuro.

La reacción xantoproteica se puede considerar como una sustitución electrofílica
aromática de los residuos de tirosina de las proteínas por el ácido nítrico dando un
compuesto coloreado amarillo a pH ácido.

Según las guías químicas es una reacción cualitativa, más no cuantitativa. Por
ende determina la presencia o no de proteínas. Para cuantificar se usa otra
reacción, como la de Biuret, y se hace un análisis espectro fotométrico.

27. BIBLIOGRAFÍAS:
 DMedicina; Proteínas; revista médica; http://www.dmedicina.com/vida-
sana/alimentacion/diccionario-de-alimentacion/proteinas.html; consultada el
31 de mayo de 2016.

 Licenciatura en ciencia y tecnología de los alimentos; análisis de contenido
de las proteínas; archivo pdf;
http://www.fbioyf.unr.edu.ar/evirtual/pluginfile.php/124179/mod_resource/co
ntent/1/QA-2015-PROTEINAS-METODOS.pdf; consultada el 31de mayo de
2016.

 Angelfire; reconocimiento de proteínas; revista de bioquímica;
http://www.angelfire.com/scifi/anarkimia/Reconocimiento%20de%20Protena
s.htm; consultada el 31de mayo de 2016.

 Monografías; caracterización de proteínas; revista de bioquímica abierta;
http://www.monografias.com/trabajos98/caracterizacion-
proteinas/caracterizacion-proteinas.shtml; consultada el 31 de mayo de
2016.

 Proteínas; practica 1: reconocimiento de proteínas; blog;
http://santiynicoquimica.blogspot.mx/; consultada el 31 de mayo de 2016.

 Geocities; aminoácidos y proteínas; archivo pdf de bioquímica;
http://www.geocities.ws/todolostrabajossallo/orgaII_4.pdf; consultada el 31
de mayo de 2016.

 Química bilógica I; proteínas generalidades; archivo pdf;
http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/quimicabiologica1/wp-
content/uploads/2010/08/TP-Proteinas-generalidades.pdf; consultada el 31
de mayo de 2016.