MODULO - METÓDO DE ESTUDO DA CÉLULA.pptx

Métodos de Estudo da Célula

1. ADILSON SOTTO MAYOR [email protected] Lic. Análises Clínicas e Saúde Pública AnoLectivo 2024/2025 III- MÓDULO MÉTODOS DE ESTUDO DA CÉLULA CURSO DE MEDICINA

2. PROGRAMA DA DISCIPLINA NO FINAL DA AULA O ESTUDANTE SERÁ CAPAZ DE: GERAL: conhecer os métodos usados e técnicas usadas na citologia. ESPECÍFICOS Analisar a célula como unidade estrutural, funcional e de origem dos seres vivos, destacando o plano unificado de organização molecular. Desenvolver habilidades de observação e descrição de fenómenos biológicos através de modelos teóricos e experimentais. Interpretar os resultados experimentais e da ciência com um censo crítico e compreender os princípios da hereditariedade.

3. MICROSCÓPIA DE LUZ Unidades de medida

4. Sistema Métrico m- Distância Kg- Massa S- Tempo UNIDADES DE MEDIDA 1. 1m / 1.000 mm 1mm / 1.000 µ m 1 µ m / 1.000 nm 1nm -- - A (Ganstro )

5. A história da microscopia é muito antiga, voltando até o início do século 17, quando a palavra “microscópio” foi usada pela primeira vez. Essa palavra tem origem do grego, da junção de mikros (pequeno) e skopein (examinar). De maneira simples, a principal função de qualquer microscópio é tornar visível ao olho nu o que for muito pequeno para tal. A microscopia, por sua vez, é o uso interpretativo do microscópio. A magnificação de um microscópio é o grau de aumento da imagem obtida em comparação com o objeto analisado, enquanto seu poder de resolução é definido como a menor distância entre dois pontos, os quais podem ser diferenciados na amostra em análise. INTRODUÇÃO

6. As células são as unidades morfológicas e fisiológicas de todos os organismos vivos; As propriedades de um dado organismo dependem daquelas de cada uma de suas células; As células originam- se somente de outras células, das quais herdam suas características; A menor unidade da vida é a célula. TEORIA CELULAR

7. OPERACIONALIZAÇÃO MICROSCÓPICA a) b)

8. Quando os raios de luz passam através da amostra, muitos sofrem refração , promovendo um espalhamento . A luz refratada de ponto próximos sofrerão interações positivas e negativas, gerando regiões de alta e baixa luminosidade. MAGNIFICAÇÃO DA IMAGEM

9. A capacidade que uma lente possui de distinhuir dos pontos (resolução) é dada por sua capacidade de captar raios refratados. Quando mais raios uma lente captar, maior será sua abertura numérica e consequentemente resolução. RESOLUÇÃO

10. A resolução é a capacidade de distinguir dois pontos próximos. A resolução máxima de nossos olhos fica em torno de 200 µm (0,2 mm). O que quer dizer que dois pontos separados por uma distância menor que são observados por um único ponto. A resolução é definida pela OBJECTIVA, sendo que cada uma apresenta resolução especifica. Os demais elementos ópticos do microscópio são importantes e podem até actuar corrigindo ou modificando o padrão de luz, mas, de facto, servem mesmo para ampliar e manter a qualidade da imagem gerada pelas objectivas. AUMENTO X RESOLUÇÃO

11. Entende- se por lente um dispositivo habitualmente feito de vidro, capaz de produzir convergência de raios luminosos que por ele passem. As objectivas modernas, na verdade, são compostas por vários desses elementos. Existem objectivas de diversas especificações e, portanto, destinadas a aplicações e aplicações mais gerais ou mais especificas. OBJECTIVAS

12. Microscópia de luz Utilização de iluminação composto por doi jogos de lentes potencial limitado até 1500 vezes Microscópia Eletrônica Utilização de feixes de elétrons Observação mais nítida. CLASSIFICAÇÃO DOS MÉTODOS DE ESTUDO DA CÉLULA Campo escuro e Claro Contraste de fases e interferencial Polarização confocal a lazer Fluorescência Transmissão alta voltagem Varredura

13. ETAPAS DA PREPARAÇÃO DA LÂMINA 1. Fixação O material é tratado com substâncias químicas, como formol, álcool ou ácido acético, para matar as células e conservar a estrutura. Inibir a degeneração dos tecidos. Fixadores: Formol, álcool absoluto. Inclusão Mergulho do material em solvente de parafina para im- pregná- lo com a mesma. Corte Corte do bloco de parafina com o material biológico no micrótomo Coloração Utilização de co- rantes seletivos , para evidênciar substâncias ou estruturas Lavagem Retirada do exces- so de corante. Banho com água e álcool.

14. MICROSCÓPIA DE CONTRASTE DE FASE 🞄 Para a observação de amostras muito finas que não podem ser coradas, deve- se utilizar técnicas microscópicas de alto contraste. A microscopia de contraste de fase e baseia no atraso que raios difratados apresentam em relação a raios não difratados.

15. MICROSCÓPIA DE CONTRASTE DIFERENCIAL 🞄 Em uma amostra, diferenças de composição e espessura entre regiões geram índices de refração ligeiramente diferentes. O contrate de Nomarski consiste na utilização de um analisador, semelhante ao da microscópia de polarização, que seleciona a luz em uma única direcção. 🞄 Em seguida, a luz é dividida em dois feixes ligeiramente afastados por um prisma. Depois de interagir com a amostra, esses feixes são reunidos por um segundo prisma e, em seguida, passam por um analisador que seleciona os feixes que sofreram mudança de angulação.

16. MICROSCÓPIA DE POLARIZAÇÃO 🞄 O microscópio de polarização possui um funcionamento semelhante ao campo claro. São adicionados apenas um plano cristal polariador, que selecionará apenas um plano incidente, e um cristal analisador, que irá bloquear a passagem da luz incidente que não sofreu desvios e selecionar apenas a luz que foi desviada por uma substância aniotrópica.

17. MICROSCÓPIA DE POLARIZAÇÃO 🞄 Aplicações A microscopia de polarização é muito utilizada em geologia e petrografia para estudar minerais e rochas. Também é usada em biologia, medicina, química, metalografia e ciência dos materiais. 🞄 Informações obtidas A microscopia de polarização permite obter informações sobre a composição, estrutura, absorção de cor, refração da luz e outras propriedades dos materiais. 🞄 Amostras analisadas Podem ser analisadas amostras de minerais

18. FLUORESCÈNCIA 🞄 A amostra marcada recebe um feixe de luz de excitação, e a amotra é dectada. Trazem informação biologicas que só seriam possiveis com radiação.

19. FLUORESCÈNCIA A fluorescência tem várias aplicações, como: 🞄 Sinalização de trânsito: placas que se iluminam quando os faróis do carro se aproximam Análise de composição de produtos: a luz fluorescente emitida por um produto ao ser iluminado com raios X ou radiação ultravioleta é caracterizada por um espectro de comprimento de onda específico para cada molécula 🞄 🞄 🞄 Fluorescência de raios X: técnica não destrutiva que permite identificar a composição e concentração de elementos em uma amostra

20. MICROSCOPIA CONFOCAL 🞄 Na microscópia confocal, o microscópio gera “planos ópticos” ao longo da espessura da amostra, gerando uma imagem tri- dimensional de maior resolução.

21. MICROSCOPIA CONFOCAL A microscopia confocal funciona da seguinte forma: 🞄 O microscópio utiliza um sistema óptico complexo para focar em um plano específico da amostra 🞄 Um sistema de pinhole rejeita a luz fora de foco, resultando em imagens mais nítidas 🞄 A amostra emite fluorescência após ser excitada pelo laser 🞄 Os detectores leem a fluorescência emitida 🞄 As imagens são combinadas para formar uma reconstrução tridimensional 🞄 A microscopia confocal foi inventada nos anos 1950 e é uma ferramenta essencial em diversas áreas de pesquisa.

22. MICROSCÓPIA ELETRÔNICA 🞄 Em princípio similar ao microscópio de luz. Mais utiliza feixes de elétrons no lugar do feixe de luz. A amostra é analisada no vácuo. O contraste é dado por tratamento da amostra com metais pesados eletrondensos. 🞄 Ambo utilizam feixes de elétrons por bobinas eletromagnéticas no lugar da luz/lentes. DE TRANSMISSÃO DE VARREDURA 🞄 A amotra após ser recoberta com metal pesado, é varrida por um feixe de elétrons. Um detector recebe os elétrons após interação com a amotra e gera imagens tridimensionais de amostras com tamanhos manométricos.

23. MICROSCÓPIA ELETRÔNICA DE TRANSMISSÃO 🞄 Os feixes de elétron podem ser controlados por campos magnéticos gerados por bobinas elétrica 🞄 assim como os raios da luz o são pelas lentes de vidro. Os elétrons são liberados por um filamento metálico e submetidos a voltagem, acelarados, criando um feixe. 🞄 A microscopia eletrônica de transmissão (MET) é uma técnica que permite a formação de imagens de alta resolução de uma amostra, através da interação de um feixe de elétrons de alta voltagem com a amostra: 🞄 A amostra deve ser uma camada fina e transparente ao feixe de elétrons 🞄 O feixe de elétrons é gerado por um gerador de alta tensão, que o converte em um feixe fino através de uma lente eletromagnética 🞄 O feixe de elétrons atravessa a amostra e atinge uma tela fluorescente na parte inferior do equipamento A imagem da amostra é formada na tela em diferentes tons, de acordo com a densidade, espessura e difração da amostra

24. MICROSCÓPIA ELETRÔNICA DE VARREDURA 🞄 Na MEV os elétrons não passam através da amostra. O feixe de elétrons é movido ao longo (varredura) da amotra. E reflete ou emite elétrons. Estes elétrons são capturados por um detector e amplificados para projeção em um monitor. 🞄 A microscopia de varredura, também conhecida como Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV), é uma técnica que permite obter imagens de alta resolução da superfície de amostras. 🞄 O MEV funciona da seguinte forma: 🞄 A amostra é colocada numa câmara de vácuo; 🞄 Um feixe de elétrons é direcionado para a amostra; 🞄 Os elétrons interagem com a amostra, gerando sinais que são detectados por um detector; Os sinais gerados são utilizados para produzir uma imagem em 3D da amostra.

25. CONCLUSÃO A microscopia óptica e eletrônica são ferramentas essenciais para a biologia, pois permitem a obtenção de imagens detalhadas de amostras biológicas , o que possibilita o estudo de células e microrganismos. A microscopia revolucionou o conhecimento científico, permitindo a exploração de áreas até então desconhecidas. A sua influência na biologia é evidente, pois: Possibilitou o estudo dos microrganismos, refutando a teoria da abiogênese Permitiu a identificação de estruturas celulares Contribuiu para o desenvolvimento da Biologia Celular É utilizada na medicina para diagnosticar doenças, permitindo a visualização de células cancerígenas, bactérias e vírus

26. 1. faça o resumo detalha do artigo sobre microscópia de luz e eletrônica. Resumo TAREFA