Práctica de aglutinación

Aglutinación directa e indirecta. Determinaciones.

1. UNIVERSIDAD DE ORIENTE
NUCLEO BOLIVAR
DEPARTAMENTO DE BIOANALISIS
Prácticas de Inmunología I
(200-3152)
Prof. Gey Esmeralda Partidas
Práctica N°3 AGLUTINACION (directa e indirecta):
•AD: grupos sanguíneos ABO, sistema RH
•AD: antígenos febriles
•AI: proteína C reactiva (PCR)
•AI: antiestreptolosina O (ASO / ASTO)

2. Pruebas de laboratorio utilizadas para descubrir e
identificar antígenos o anticuerpos y complejos
inmunológicos circulantes.

Clasificación:

- Directas: determinantes antigénicos intrínsecos

- Indirectas: determinantes antigénicos extrínsecos
Pruebas de AGLUTINACION

3. Materiales:
∙Reactivos:
suspensión de eritrocitos,
suspensiones bacterianas.

Controles: positivo, negativo.
Antisueros (Ac monoclonales)
Solución de buffer glicina, ph 6,2.
Placas de vidrio de fondo claro.
Placa de fondo escavado
(microfloculación)
Pipetas Pasteur.
Goteros.
Palillos de madera.
Cronómetro.
Técnica de Aglutinación DIRECTA:
Equipos:
Agitador de Manzini.
Centrifuga
Microscopio
Procedimiento:
•En placa
•En tubo
Determinaciones:

-- Identificación de grupo sanguíneo
--Antígenos febriles

4. Realizar la lectura:

NEGATIVO= SUSPENSION HOMOGENEA.
POSITIVO= SUSPENSION HETEROGENEA.
hemaglutinación (agregado de eritrocitos)
agregados bacterianos


Reporte:
- Identificación de grupo sanguíneo: presencia del Antígeno en la
membrana del eritrocito.
- Antígeno Febril: POSITIVO + TITULO DE DILUCION
Técnica de Aglutinación directa:

5. A B AB
Técnica en
tubo:
Grupos sanguíneo: sistema ABO, sistema RH
Homogéneo - hemaglutinado
Antisueros (Ab monoclonales)

6. Técnica en
placa:
Sistema ABO / Rh
Grupos sanguíneo ABO, sistema RH

7. anti-A anti-B anti-Rh
(D)
anti-A anti-B anti-Rh
(D)
Grupos sanguíneo ABO, RH (en placa):

8. Antígenos Febriles
RESULTADOS

El reporte de resultados se hace
tomando en cuenta la dilución más alta en la
que se observe aglutinación.

Generalmente títulos de 1:40 ó 1:80
son sospechosos de enfermedad. Sólo títulos
mayores de 1:80 pueden considerarse
probatorios de diagnóstico de enfermedad
cuando estén acompañados de la
sintomatología clínica. Títulos mayores de
1:320, son concluyentes.

9. Problemas con la interpretación clínica de las
reacciones febriles:

•El principal problema de las reacciones febriles es que al interpretar los resultados, no ha
sido posible tener un criterio uniforme y estandarizado para determinar qué clase de
anticuerpos debe considerarse un punto de corte significativo que establezca los criterios
de diagnóstico de la enfermedad.

•La presencia de reacciones cruzadas con diferentes tipos de bacterias que ha descrito en
reacciones de Widal con enterobacterias, en Huddleson con tularemia, cólera y ciertos
tipos de Yersinia enterocolitica, así como la reacción de Weil Felix en pacientes con
infecciones urinarias previas, o que presenten leptospirosis o enfermedad de Lyme.

•También existe la posibilidad de reacciones falsas negativas en pacientes que usan
antibióticos o que están bajo tratamiento con esteroides u otros tipos de
inmunosupresores.

•La detección de anticuerpos en las reacciones febriles ocurre en una etapa tardía en la
evolución de la enfermedad. Por lo general, entre la segunda y cuarta semana del inicio del
cuadro clínico. No es posible identificar el tipo de inmunoglobulina en los resultados, puede
ser IgM, IgG o IgA.

10. Materiales:
∙Reactivo de látex: recubierto con
anticuerpos // con antígenos.

Controles: positivo, negativo.
Solución de buffer glicina, pH 6,2.
Placas de vidrio de fondo oscuro.
Pipetas Pasteur.
Goteros.
Palillos de madera.
Cronómetro.

Técnica de Aglutinación INDIRECTA:
Equipos:
∙Agitador de Manzini.
Procedimiento:
•En placa
•En tubo
Determinaciones:

•Proteína C reactiva: PCR
•Factor reumatoide
•Antiestreptolisina O (ASTO)
•Monotest
•Anti antinucleares

11. Realizar la lectura:

•NEGATIVO= SUSPENSION HOMOGENEA (1).
•POSITIVO= SUSPENSION HETEROGENEA (2).







Reporte:
POSITIVO: TITULO DE DILUCION
Técnica de Aglutinación Indirecta:

12. Técnica de Aglutinación Indirecta kits:
POSITIVO
AGLUTINACION
NEGATIVO

13. Técnica de Aglutinación Indirecta:

14. Técnica de Aglutinación Indirecta:

15. Técnica de Aglutinación Indirecta:

16. GRACIAS...