Prueba de la catalasa

Prueba bioquímica de la catalasa

1. Prueba de la catalasa Laboratorio de Técnicas Microbiológicas

2. Fundamento La  catalasa   cumple  un  papel   vital     en el  metabolismo ,  eliminando    espe-cies   altamente   reactivas   del oxígeno que  pueden ser perjudiciales para     las  proteínas , los  ácidos   nucleicos  y   los  lípidos  de las  células ,  causando  el  estrés    oxidativo  de las  células El peróxido de hidrógeno se forma de la descomposición de los azúcares por la vía aeróbica .  

3. Fundamento L a catalasa se encuentra en unos orgánulos llamados peroxisomas (80%) y en el citoplasma (20%).  El peróxido se origina durante la reducción de  dioxígeno (O 2 ) en agua (H 2 O), por la dismutación del radical superóxido y por acción de otra s enzimas , las oxidasas .

4. Fundamento La catalasa es una ezima peroxidasa que contiene un grupo prostérico con cuatro átomos de hierro trivalentes (Fe +++ ), por tanto es una homoproteína. El ión férrico se mantiene oxidado durante la reacción. Esta enzima es capaz de descomponer el peróxido de hidrógeno ( agua oxigenada ) en agua y oxígeno , con la consiguiente aparición de burbujas ( desprendimiento de oxígeno gaseoso). Estructura de la enzima catalasa Dismutación del peróxido de hidrógeno

5. Técnica en portaobjetos Materiales (lista detallada) Microorganismo problema procedente de un cultivo puro  de 24 h  Pipeta Pasteur  Asa de nicrón o palillo de madera Portaobjetos Peróxido de hidrógeno de 100 volúmenes al 30%  Mechero bunsen 

6. Procedimiento recomendado Prueba de catalasa rutinaria , temperatura ambiente (22-25oC)

7. Resultados Positiva:  Staphylococcus aureus Negativa:  Streptococcus pyogenes

8. Técnica en tubo de ensaye Materiales (lista detallada) Tubos con Agar Nutritivo en pico de plauta y cultivo  puro de 24 h Pipeta Pasteur  Peróxido de hidrógeno de 100 volúmenes al 30%  Mechero bunsen

9. Procedimiento en tubo Dejar gotear 1 ml de  H 2 O 2  al 30% directamente sobre el cultivo denso en agar pico de flauta  Resultados Streptococcus sp.                  Staphylococcus sp.

10. Técnica en caja de Petri Materiales (lista detallada) Placas de Agar Nutritivo con cultivo de puro de 24 h Pipeta Pasteur  Peróxido de hidrógeno de 100 volúmenes al 30%  Mechero bunsen

11. Procedimiento en caja de Petri

12. Resultados  Micrococcus luteus :  catalasa positivo Prueba positiva : presencia abundante de burbujas En caso de ser negativa: no hay presencia de burbujas o hay muy poca presencia de burbujas

13. Medio de cultivo: Agar Nutritivo Formulación Química Pluripeptona y Extracto de carne: Fuentes de C y N. NaCl: mantiene el balance osmótico. Agar: agente solidificante.

14. No utilizar agar angre, si se hace tener cuidado de no  tocar  el agar Consideraciones No invertir el orden del procedimineto ya que puede dar falso positivo No es necesario mezclar el H 2 O 2  con el cultivo No utilizar el reactivo de peróxido de hidrógeno si es muy viejo

15. Identificación Los estafilococos son catalasa positivos mientras que los estreptococos y enterococos son negativos. Esta prueba diferencia Listeria monoytogenes y cianobacterias (catalasa positivas) de otras bacterias grampositivas no formadoras de esporas. Staphylococcus aureus Sreptococcus  pyogenes

16. Conclusión La  prueba de la catalasa  es una metodología usada en los laboratorios de bacteriología para poner en evidencia la presencia de la enzima catalasa en aquellas bacterias que la poseen. Junto a la coloración de Gram son las principales pruebas que se le deben realizar a los microorganismos recién aislados. El reactivo utilizado en la prueba es el peróxido de hidrógeno y la prueba positiva es la prescencia abundante de burbujas.

17. Referencias MacFaddin. Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias de importancia clínica (2003). Tercera Edición. Buenos Aires.  Médica Panamericana. Forbes B. Baily & Scott: diagnóstico microbiológico (2009). Segunda Edición. Buenos Aires. Médica Panamericana. Gil, M. . (2019). Prueba de la catalasa: fundamento, técnica y usos. Mayo de 2020, de Lifeder Sitio web: https://www.lifeder.com/prueba-catalasa/ Laboratorios Britania. Agar Nutritivo, tomado de:  https://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_5a28446b169d8.pdf

18. Gracias por su atención