SEMINARIO 1 - ARTICULO Origen del CoV2.pptx

PRESENTACION

1. República Bolivariana de Venezuela Fundación Instituto de Estudios Avanzados Escuela Superior Internacional PNFA en Biotecnología Virología General ldentification of a novel coronavirus causing severe pneumonia in human: a descriptive study Li-Li Ren1, Ye-Ming Wang, Zhi-Qiang Wu, Zi -Chun Xiang1,LiGuo1, Teng Xu , Yong- Zhong Jiang , Yan Xiong , Yong-Jun Li, Xing -Wang Li, Hui Li, et al Chinase Medical Journal , 2020 Un Nuevo Coronavirus de Origen en Murciélagos Asociado con Neumonía Humana Fatal Prof.: Antonietta Porco Autores: Licdo. Gregory León Ser tenejas , julio 2025

2. Introducción a los Coronavirus Los coronavirus (CoV) son una familia de virus envueltos con un genoma de ARN monocatenario positivo, con una longitud de aproximadamente 26 a 32 kb. Pertenecen a la subfamilia Orthocoronavirinae de la familia Coronaviridae y se clasifican en cuatro géneros principales: Alphacoronavirus (α), Betacoronavirus (β), Gammacoronavirus (γ) y Deltacoronavirus (δ). El genoma viral de los CoV codifica típicamente cuatro proteínas estructurales esenciales: la proteína espiga (S), la proteína de envoltura (E), la proteína de membrana (M) y la proteína de nucleocápside (N). Además de estas, codifican varias proteínas no estructurales y proteínas accesorias únicas que desempeñan roles cruciales en el ciclo de vida viral y la interacción con el huésped. Genoma de ARN Monocatenario positivo, ~26–32 kb de longitud. Clasificación Cuatro géneros: α, β, γ, δ-coronavirus. Proteínas Estructurales Espiga (S), Envoltura (E), Membrana (M), Nucleocápside (N).

3. Coronavirus Zoonóticos Los CoV infectan a humanos y a una amplia variedad de especies aviares y mamíferas en todo el mundo . Se han identificado seis CoV que infectan a humanos, incluyendo dos α-CoV (229E y NL63) y cuatro β-CoV (OC43, HKU1, SARS-CoV y MERS- CoV ). Una característica distintiva de todos los CoV humanos es su naturaleza zoonótica, lo que significa que se transmiten de animales a humanos. Los murciélagos son considerados un reservorio clave de CoV, y se cree que muchos CoV humanos se originaron en ellos. Desde principios de este siglo, dos CoV zoonóticos, el SARS-CoV y el MERS-CoV, han causado enfermedades graves en humanos, generando una considerable preocupación en la salud pública. Brote de SARS-CoV (2003) 8096 casos a nivel mundial. 774 muertes. Brote de MERS-CoV (desde 2012) 2494 personas infectadas. Tasa de letalidad actual del 34.4%. Estos brotes han subrayado la necesidad de una vigilancia constante ante la posible aparición de nuevos CoV zoonóticos.

4. Descubrimiento de un Nuevo CoV en Wuhan, China Este estudio reporta la identificación de un CoV previamente desconocido, de origen en murciélagos, que causó neumonía grave y fatal en cinco pacientes en Wuhan, China. Los resultados de la secuenciación genómica revelaron que este virus, que contiene un marco abierto de lectura único en el gen 8 (ORF8), está filogenéticamente más cerca del CoV similar al SARS (SL-CoV) de murciélagos, pero pertenece a un linaje separado. Además, la secuencia de aminoácidos del dominio tentativo de unión al receptor (RBD) de este nuevo CoV se asemeja a la del SARS-CoV, lo que sugiere que podrían utilizar el mismo receptor para infectar células huésped. Estos hallazgos resaltan la necesidad urgente de realizar una vigilancia regular de la transmisión interespecie de CoV de origen en murciélagos a poblaciones humanas, dada la capacidad de estos virus para saltar entre especies y causar enfermedades graves. Origen Murciélagos, causando neumonía grave y fatal en Wuhan, China. Genoma Contiene un ORF8 único, cercano a SL-CoV de murciélagos pero en linaje separado. RBD Similar al SARS-CoV, sugiriendo el mismo receptor.

5. Métodos de Investigación: Aprobación Ética y Recolección de Muestras El estudio se llevó a cabo siguiendo la aprobación por la Comisión Nacional de Salud de la República Popular China y la Comisión de Ética del Hospital Jinyintan de Wuhan. Las muestras clínicas : Líquido de lavado broncoalveolar (BAL) Se recolectaron de cinco pacientes hospitalizados con neumonía Hospital Jinyintan de Wuhan, provincia de Hubei, China, diciembre de 2019. Datos Recopilados Datos clínicos. Características demográficas. Condiciones médicas subyacentes. Signos y síntomas clínicos. Hallazgos radiográficos de tórax. Resultados de pruebas de laboratorio clínico. Historial de viajes. Exposición reciente a animales. Resultados del paciente.

6. Secuenciación del Genoma y Análisis Filogenético Los ácidos nucleicos se extrajeron de las muestras de BAL y se construyeron bibliotecas de secuenciación para su análisis en una plataforma Illumina ( recorte de adaptadores, y eliminación de secuencias del huésped y ribosomales ). El alineamiento múltiple de secuencias se realizó con ClustalW y los árboles filogenéticos se construyeron mediante el método de máxima verosimilitud. Las secuencias virales completas del genoma se depositaron en GISAID y en el Genome Warehouse del Centro Nacional de Datos Genómicos. Extracción y Secuenciación Ácidos nucleicos de BAL, plataforma Illumina. Control de Calidad Eliminación de lecturas de baja calidad, recorte de adaptadores. Análisis Filogenético Alineamiento con ClustalW, árboles de máxima verosimilitud. Depósito de Datos Secuencias en GISAID y Genome Warehouse. 1 2 3 4

7. Aislamiento Viral y Ensayo de Inmunofluorescencia Las muestras de BAL se inocularon en células Vero y se observaron diariamente para detectar efectos citopáticos (CPE). El medio de mantenimiento se repuso al día 4, y los cultivos se terminaron 7 días después de la inoculación. Las partículas virales se tiñeron negativamente y su morfología se caracterizó mediante microscopía electrónica. Los ácidos nucleicos virales se confirmaron mediante RT-PCR. Se prepararon portaobjetos con células infectadas y no infectadas para ensayos de inmunofluorescencia. Las células se fijaron, lavaron, bloquearon y tiñeron con suero de un paciente convaleciente o suero de una persona sana. Se utilizó anti-inmunoglobulina G humana conjugada con isotiocianato de fluoresceína como anticuerpo secundario. Los núcleos y el citoplasma se contratiñeron con DAPI y azul de Evans. Las imágenes fluorescentes se obtuvieron y analizaron utilizando microscopía confocal de barrido láser. Cultivo Viral Se observó CPE en el 30% de las células Vero inoculadas después de dos pases, mostrando una apariencia redonda, refractiva y de sincitio. La microscopía electrónica reveló partículas características de CoV con proyecciones superficiales. Ensayo de Inmunofluorescencia Las células Vero con CPE mostraron señales verdes en el citoplasma al ser teñidas con suero convaleciente de pacientes, confirmando la presencia de partículas virales. No se detectaron señales en los controles.

8. Características Clínicas y Resultados de los Pacientes Se analizaron las características demográficas y clínicas de los cinco pacientes. Los síntomas más comunes fueron fiebre, tos y disnea. Los recuentos de glóbulos blancos variaron, pero los recuentos de linfocitos fueron generalmente bajos. Los niveles de alanina aminotransferasa y creatina sérica fueron normales o ligeramente elevados. Se observaron opacidades en vidrio esmerilado bilaterales y consolidación en las radiografías de tórax de dos pacientes representativos. Cuatro de los cinco pacientes desarrollaron síndrome de dificultad respiratoria aguda (SDRA) que requirió terapia de oxígeno, y dos recibieron oxigenación por membrana extracorpórea (ECMO). Dos pacientes experimentaron infecciones secundarias, y uno de ellos falleció por fallo multiorgánico. PACIENTE 1 65/M Sí Fiebre, tos, disnea grave Hospitalizado PACIENTE 2 49/F Sí Fiebre, tos seca, disnea Hospitalizada PACIENTE 3 52/F No Fiebre, tos, opacidad en TC Dado de alta PACIENTE 4 41/M No Fiebre, tos seca, SDRA Hospitalizado PACIENTE 5 61/M Sí Fiebre, tos, disnea, shock séptico Fallecido

9. Discusión: Un Nuevo Linaje y Origen Zoonótico El análisis de homología de secuencias del genoma viral mostró que el CoV identificado es distinto de cualquier CoV humano conocido, incluyendo SARS-CoV y MERS-CoV. Los virus más estrechamente relacionados son dos CoV SL-CoV de murciélagos (MG772933, 772934) identificados en 2005 en Zhoushan, Zhejiang, China, aunque la identidad nucleotídica es solo del 87.6% al 87.7%. El análisis filogenético confirmó que este virus forma un clado único, lo que sugiere que debe considerarse una nueva especie. Varias características indican su origen en murciélagos: alta similitud con CoV SL-CoV ZC45 de murciélagos, cercanía evolutiva con CoV SL-CoV ZXC21 y ZC45 de murciélagos, y la presencia de regiones ORF3 y ORF8 intactas, típicas de CoV de murciélagos. La secuenciación de los dominios N-terminales (NTD) fue muy similar a ZC45 y ZXC21, mientras que el RBD mostró mayor identidad con SARS-CoV, sugiriendo un posible evento de recombinación en el gen S que facilitó la transmisión interespecie. Nueva Especie Distinto de CoV humanos conocidos; forma un clado único. Origen en Murciélagos Alta similitud y cercanía evolutiva con CoV SL-CoV de murciélagos; presencia de ORF3 y ORF8 intactos. Posible Recombinación RBD similar a SARS-CoV, sugiriendo un evento de recombinación en el gen S.

10. Conclusiones Indicarón que la aparición de este nuevo CoV representa una amenaza potencial para la salud pública . Para ese momento faltaba información epidemiológica sobre los modos de transmisión . Tres de los cinco pacientes tenían historial de exposición en el mercado de mariscos en Wuhan. La posibilidad de que el CoV zoonótico haya saltado a humanos a través de un huésped intermedio, como se ha visto con MERS-CoV (camellos) y SARS-CoV (civetas), es una hipótesis clave. Capacidad para causar síndrome respiratorio grave, con rápida progresión y patología respiratoria inferior dominante, sin síntomas obvios del tracto respiratorio superior.