SOLVED PREVIOUS YEAR (2023) DMLT (1st & 2nd year) BIOCHEMISTRY PAPERS, U. P. State Medical Faculty (IN ENGLISH AND HINGLISH)

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SOLVED PREVIOUS YEAR (2023) DMLT (1st & 2nd year) BIOCHEMISTRY PAPERS, U. P.
State Medical Faculty (IN ENGLISH AND HINGLISH)

Q. 1. Choose and write the correct option after writing the question number -
1.1. Used blood sample tubes/vials are discarded in this coloured bin? उपयोग की जा चुकी रक्त
vials इस रंग के डिब्बे में निष्कासित की जाती हैं I
(A)Red (B) blue (C ) yellow (D) black
Ans. 1.1. (A) red
1.2. Which of the following enzymes is present in heart muscles? इनमें से कौन enzyme ह्रदय की
मासपेशियों में उपस्थित होता है? (1) LDH (2) CPK (3) SGOT
(A)1 (B) 2 (C ) 1,2 (D) 1,2,3
Ans. 1.2. (D) 1,2,3
1.3. Normality is expressed as ____. सामान्यता को ______ के रूप में व्यक्त करते है I
(A)g/l (B) gram equivalent/l (C ) mg/l (D) moles/100g
Ans. 1.3. (B) gram equivalent/l

Q. 2. Choose right and wrong statements -
2.1. Fibrinogen determination is performed in plasma. (Yes/No) फिब्रिनोजेन निर्धारण प्लाज्मा में
किया जाता है I (हाँ /नहीं)
Ans. 2.1. Yes 2.1. हाँ
2.2. Normal pH of blood is 9.0. (Yes/No). रक्त का सामान्य pH 9.0 है (हाँ /नहीं)
Ans. 2.2. No 2.2. नहीं
2.3. IgM is warm antibody. (Yes/No). IgM गर्म एंटीबाडी है (हाँ /नहीं)
Ans. 2.3. No 2.3. नहीं
2.4. “O” blood group is a universal donar group. (Yes/No). “O” रक्त समूह एक सार्वभौमिक दाता समूह
है (हाँ /नहीं)
Ans. 2.4. Yes 2.4. हाँ
2.5. Disinfection kills spores. (Yes/No) Disinfection spores को मार देता है (हाँ /नहीं)
Ans. 2.5. No 2.5. नहीं
2.6. Acid spills can be neutralized by sodium bisulfite. (Yes/No). Acid spill का निशप्रभावन sodium
bisulfite से किया जा सकता है (हाँ /नहीं)
Ans. 2.6. No 2.6. नहीं
2.7. Fouchet's test is used for detection of ketone bodies in urine. (Yes/No) Fouchet's test से
ketone bodies की जाँच की जा सकती है (हाँ /नहीं)
Ans. 2.7. No 2.7. नहीं

Q. 3. Fill in the blanks -
3.1. Range of normal hemoglobin in adult male is _______ g/dl.
Ans. 3.1. 13.0 - 18.0
3.2. Full form of pH is _____.
Ans. 3.2. potential of hydrogen or Puissance de hydrogen or Power of hydrogen
3.3. SGOT and SGPT tests come under _____ function tests. SGOT और SGPT tests ______
function tests के अंतर्गत आते हैं I
Ans. 3.3. Liver

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3.4. Which technique is used to separate charged molecules using an electric field ________.
एक electric field के उपयोग द्वारा आवेशित मोलेक्यूल्स के पृथक्करण तकनीक को क्या कहते हैं _______.
Ans. 3.4. Electrophoresis

Q. 4. Write short notes on the following :

4.1. Physical examination of urine
Ans. Physical examination of urine includes mainly its appearance and specific gravity -
●Urine clear or turbid (normal urine is clear/transparent) - cloudiness in urine indicates
pyuria (urinary tract infection).
●Urine colour (normal urine is straw coloured) - dark coloured urine indicates dehydration
and red coloured urine may be due to hematuria or porphyria or could be due to dietary
intake of food like beets.
●Specific gravity of urine is checked by an urinometer or a urine strip. It is an indicator of
renal concentrating ability. The specific gravity of normal urine is 1.003 - 1.030 but
>1.030 indicates low water intake/diabetes mellitus/albuminuria/acute nephritis.
●In addition, the pH of urine is also checked by litmus paper or pH paper strip. The normal
pH of urine is 6.0-6.5 (acidic). A higher pH (alkaline) indicates kidney stones/UTIs/
kidney-related disorders but a low pH (more acidic) may be found in diabetic
ketoacidosis/diarrhea/ starvation.
In Hinglish

Ans. Physical examination of urine - इसमें हम मुख्यतः urine का appearance और specific gravity
देखते हैं -
●Urine clear है या turbid (normal urine clear/transparent होती है) - urine में cloudiness pyuria
(urinary tract infection) को दर्शाती है I
●Urine का colour (normal urine straw colour की होती है) - dark colour की urine dehydration
को दर्शाती है और red colour की urine hematuria, porphyria, या खाने में चुकंदर की अधिक मात्रा के
कारण हो सकती है I
●Urine की specific gravity urinometer या urine strip द्वारा देखते हैं - जो renal concentrating
ability का एक सूचक है I normal urine की sp. gravity 1.003 - 1.030 होती है किन्तु >1.030 low
water intake/diabetes mellitus/albuminuria/acute nephritis को दर्शाती है I
●साथ में urine का pH भी देखते हैं (litmus paper या pH paper strip द्वारा) I urine का सामान्य pH
6.0-6.5 (acidic) होता है I सामान्य से अधिक pH (alkaline) kidney stones/UTIs/ kidney-related
disorders को दर्शाता है और सामान्य से कम (अधिक acidic) diabetic ketoacidosis/diarrhea/
starvation में पाया जा सकता है I
4.2. Hand hygiene
Ans. Hand hygiene is a critical part of laboratory safety because it prevents the spread of
contamination from microbiological agents, chemicals, and radioactive materials. That's why
hand hygiene is an important part of universal precautions/standard precautions.
When to wash hands -
●Before wearing and after removal of gloves.

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●Before & after patient contact
●Upon contact or when there's visible contamination with blood or other potentially
infectious material.
●Upon completion of required tasks and before leaving the laboratory.
How to wash hands -
●Wet your hands and apply enough liquid soap to create a good lather.
●Rub your palms together clockwise and anticlockwise.
●Rub the back of your hands with your fingers linked through the other hand, use your
right palm to rub the back of your left hand and do the same for the back of your right
hand.
●Interlink your fingers together, facing each other, into clasped hands. Then rub your
palms and fingers together.
●Cup your fingers together, with your right hand over and your left hand under. With your
fingers interlocked, rub the backs of them against your palms. Then do it vice versa.
●Do rotational rubbing of your left thumb clasped in the right palm, then do it vice versa.
●Rub your fingers over your left palm in a circular motion, then do it vice versa.
●Thoroughly rinse your hands with warm running water and dry with a clean, disposable
paper towel or using an automatic hand dryer.
●Use a disposable paper towel to turn off the tap.
●Use an alcohol-based hand sanitizer that contains at least 60% (preferably 70%) alcohol
when soap and water are not available (hands rubbed until dry).

In Hinglish

Ans. नैदानिक प्रयोगशाला में हाँथों की स्वच्छता (hand hygiene) बहुत महत्वपूर्ण है क्योंकि यह संदूषण के
प्रसार और रसायनों, रेडियोधर्मी पदार्थों एवं सूक्ष्मजीवविज्ञानी एजेंटों के संपर्क में आने के जोखिम को रोकता है ।
इसीलिए hand hygiene universal precautions/standard precautions का एक महत्वपूर्ण हिस्सा है I
हाथ कब धोना चाहिए -
●Gloves पहनने के पहले और उतारने के बाद I
●मरीज़ के संपर्क /स्पर्श के पहले और बाद में I
●Blood या अन्य संभावित रोग़जनक पदार्थ के संपर्क में आने पर I
●लैब में काम समाप्त करने के बाद और लैब छोड़ने से पहले I
हाथ कैसे धोयें -
●हाथों को गीला कर liquid soap लेकर हाथों को मलकर झाग बनायें I
●दोनों हथेलियों को आपस में clockwise और anticlockwise मलें I
●दाहिने हाथ की हथेली को बाएं हथेली के पिछली तरफ रख कर उँगलियों को फसाँते हुए मलें I फिर
इसीतरह बाएं हाथ की हथेली से दायीं हथेली के पिछली तरफ को मलें I
●दोनों हाथों की उँगलियों को आपस में फसाँते हुए उँगलियों और हथेलियों को आपस में मलें I
●दाहिने हाथ की उँगलियों से cup जैसा बनाके उसे बाएं हाथ की उँगलियों के cup में फँसाकर उन्हें हथेलियों
पर मलें I इस प्रक्रिया को बाएं हाथ को दाएं में फँसा कर दोबारा करें I
●दाएं हाथ से बाएं हाथ के अंगूठे को मलें और इसीतरह दाएं अंगूठे को बाएं हाथ से मलें I
●दाएं हाथ की उँगलियों को बाएं हाथ की हथेली पर circular motion में मलें, फिर बाएं हाथ की उँगलियों
को दाएं हाथ की हथेली में मलें I

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●अब नल के गुनगुने पानी में अच्छी तरह हाथों को धो लें और paper towel या automatic hand dryer
से हाथों को सुखा लें I
●नल को disposable paper towel से बंद करें I
●साबुन और पानी उपलब्ध नहीं होने पर alcohol based sanitizer, जिसमें कम से कम 60% (बेहतर हो
यदि 70% हो) alcohol हो, का इस्तेमाल करें (हाथों को सूखने तक मलना चाहिए) I

4.3. Colorimetry
Ans. Colorimetry is a technique used to determine the concentration of colored compounds in
solution (which absorb visible light) by measuring the intensity of light in the visible region of the
spectrum with the help of a colorimeter.
principle :
When monochromatic light (light of one colour /wavelength ) passes through a solution the
intensity of light transmitted decreases exponentially - with increasing path length (Lambert's
law ) and with increasing concentration of the absorbing substance in solution (Beer's law). The
combination of these two is called Beer-Lambert law. Since in photometric instruments (such as
colorimeter and spectrophotometer) the measurements are usually made at constant path
length with varying concentration it is usual to refer to Beer's law. Therefore, the absorption of
light transmitted through the coloured solution is directly proportional to the solution
concentration. It means, higher the concentration of the absorbing (coloured) solution higher will
be the absorption of light (absorbance).
The ratio of intensity of the transmitted light (I) and intensity of incident light (Io) is called
Transmittance (T):
T = I/Io

T × 100 = % T
-log T or log (1/T) = extinction (E) or optical density (OD) or absorbance (A)
A Colorimeter consists of the following parts:
1. Light source (usually 6-12 V tungsten lamp)
2. Aperture (Slit) and Condenser lens to allow a parallel beam of light to fall on the filter.
3. Filters (for selective absorption of unwanted wavelengths) arranged on a wheel.
4. Cuvette chamber - the transmitted light passes through a compartment wherein the colored
solution is kept in a cuvette, made of glass or disposable plastic.
5. Detector (this is a photosensitive element that converts light into electrical signals)
6. Galvanometer (measures electrical signal quantitatively).

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Working of a colorimeter -
White light from a tungsten lamp passes through a slit, then a condenser lens, to give a parallel
beam which falls on the filter selected to allow maximum transmission of the desired wavelength
which passes through the solution under investigation contained in a cuvette. The transmitted
light then falls onto a photocell, which generates an electrical current in direct proportion to the
intensity of light falling on it. This small electrical signal is increased by the amplifier, which
passes to a galvanometer of analogue or digital readout to give absorbance reading directly.

The colorimeter is first set to zero absorbance (100% T) with appropriate blank solution. Then
the absorbance of a suitable standard is read followed by reading the absorbance of the test
(unknown) solution.
Absorbance of unknown × Concentration of Standard
Concentration of analyte in unknown sample = --------------------------------------------------------------
Absorbance of Standard

In Hinglish

Ans. Colorimetry एक तकनीक है जिसका उपयोग compounds के coloured solutions (जो visible light
को अवशोषित करते हैं) का concentration मापने हेतु किया जाता है I इसमें एक कलरिमीटर (colorimeter) की
मदद से light spectrum के visible region में light की तीव्रता मापते हैं I
Principle of colorimeter - एक colorimeter का सिद्धांत Beer-Lambert law पर आधारित होता है और यह
इस प्रकार है :
जब कोई monochromatic light किसी solution से pass होती है तो transmitted light की तीव्रता (intensity)
exponentially (चरघातांकी रूप से) घटती है I Transmitted light की तीव्रता में यह कमी path length
(अवशोषक माध्यम की मोटाई) (Lambert's law) और अवशोषक पदार्थ के concentration (सांद्रता) (Beer's
Law) के समानुपाती होती है I इन दोनों नियमों को मिश्रित रूप से Beer-Lambert Law कहते हैं I चूंकि
photometric
instruments (जैसे - colorimeter और spectrophotometer) में path length constant होती है किन्तु
solution के विभिन्न concentrations का इस्तेमाल होता है इसलिये इसमें केवल Beer's Law का उपयोग होता
है I इसप्रकार, किसी रंगीन solution द्वारा अवशोषित light उस solution के अवशोषक पदार्थ के concentration
के समानुपाती होती है I इसका अर्थ है कि अवशोषक पदार्थ का concentration जितना अधिक होगा light का
अवशोषण (absorbance) उतना ही अधिक होगा I

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Transmitted या emergent light की तीव्रता या intensity (I) और incident light की तीव्रता या intensity (Io)
के ratio को Transmittance (T) कहते हैं :
I/Io = T
T × 100 = % T
-log T या log (1/T) = absorbance(A) या optical density (OD) या extinction (E)

एक colorimeter के निम्न भाग होते हैं :
1. Light source (usually 6-12 V tungsten lamp)
2. Aperture (Slit) and Condenser लेंस - to allow a parallel beam of light to fall on the filter.
3. Filters (for selective absorption of unwanted wavelengths ) - एक wheel में arranged रहते हैं I
4. Cuvette chamber - transmitted light एक compartment से pass होती है जिसमें एक glass या plastic
की गोल या चौकोर cuvette में coloured solution measurement के लिए रखते हैं I
5. Detector - यह एक photosensitive element होता है जो light को electrical signals में बदलता है I
6. Galvanometer - electrical signal को मात्रात्मक रूप से मापता है I

Working of a colorimeter -
Tungsten लैंप से निकली white light एक slit और एक lens से pass होती हुई एक समानांतर beam के रूप में
चुने हुए filter पर पड़ती है और filter से निकली वांछित wavelength की monochromatic light cuvette के
solution से pass होती है और उस solution के concentration के आधार पर absorb होने के बाद यह light एक
photocell पर पड़ती है जिससे light की तीव्रता के सीधे अनुपात में एक electric current पैदा होती है I यह
electric signal एक galvanometer द्वारा absorbance (OD) reading में पढ़ी जाती है I
सर्वप्रथम blank solution (plain reagent/distilled water) को cuvette में डाल कर colorimeter को zero
absorbance (100% T) पर set करते हैं I फिर उपयुक्त standard reaction tube की absorbance (OD)
read करते हैं और उसके बाद test (unknown) reaction tube की absorbance (OD) read करते हैं I

Absorbance of unknown × Concentration of Standard
Concentration of analyte in unknown sample = --------------------------------------------------------------
Absorbance of Standard

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4.4. Enumerate the tests performed for renal function test. वृक्कीय कार्य परीक्षण के लिए किये
जाने वाले परिक्षणों को एक एक करके बताएं I
Ans. Renal function test (RFT) is used in the management of patients with kidney disease or
pathologies affecting renal function, identifying the presence of renal disease, monitoring the
response of kidneys to treatment, and determining the progression of renal disease. The
following tests are done in urine and blood : ●Urine - routine and microscopic examination
●Glomerular Filtration Rate
●Serum creatinine
●Serum urea or blood urea nitrogen (BUN)
●Serum cystatin C
Urine routine examination -
Physical examination - This includes mainly the appearance and the specific gravity of urine -
whether urine is clear or turbid (normal urine is clear/transparent), colour is normal or dark
(normal urine is straw coloured). The specific gravity is checked by an urinometer or a urine strip
(sp. gravity is an indicator of renal concentrating ability). In addition, the pH of urine is also
checked using litmus paper or pH paper strip. The normal pH of urine is 6.0-6.5 (acidic). A
higher pH (alkaline) indicates kidney stones/UTI/ kidney-related disorders but a low pH (more
acidic) may be found in diabetic ketoacidosis/diarrhea/ starvation.
Chemical examination -
The analyte of interest in renal function tests is protein. Normal urine protein is up to 150 mg per
day (30% albumin) and its rising levels indicate a kidney problem. Albuminuria refers to the
abnormal presence of albumin in the urine. Urinary protein is tested by TCA, sulfosalicylic acid,
heat test or dip strips. Urinary albumin is estimated by immunoturbidimetric assay,
immunonephelometric assay or HPLC and then urinary albumin excretion (UAE), albumin
excretion rate (AER), urinary albumin concentration (UAC) or albumin : creatinine ratio (ACR) is
calculated to find normoalbuminuria, microalbuminuria and macroalbuminuria.
The microscopic examination of urine may also give indications about kidney function e.g. - the
presence of red blood cells, WBCs (pus cells), casts and crystals.
Glomerular filtration rate (GFR) - This is the best overall indicator of the glomerular function.
GFR is the rate in milliliters per minute at which substances in plasma are filtered through the
glomerulus. The normal GFR for an adult is 90 to 120 ml per minute. There are different
formulas for eGFR (estimated GFR) calculation - Cockcroft -Gault formula, MDRD formula,
CKD-EPI formula and IDMS traceable MDRD formula and these require serum creatinine value.
We can assess the renal disease, stage of chronic kidney disease (CKD), and response to
treatment by the level of eGFR (lower than normal).
Serum creatinine - Creatinine is the by-product of creatine phosphate in muscle, and it is
produced at a constant rate by the body. For the most part, creatinine is cleared from the blood
entirely by the kidney. Decreased clearance by the kidney results in increased blood creatinine
and increased level of creatinine may be a sign of poor kidney function. The amount of
creatinine produced per day depends on muscle mass and diet. Serum creatinine may increase
due to prerenal, renal or postrenal causes. Serum creatinine can be estimated by three methods
- 'endpoint assay' and 'reaction rate assay’ (based on Jaffe's reaction), enzymatic endpoint

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method and enzymatic kinetic method (based on use of enzymes and change in absorbance at
340 nm).
Biological reference interval of serum creatinine : Male - 0.9-1.3 mg/dl, Female - 0.6 - 1.1 mg/dl
Serum Urea/Blood Urea Nitrogen (BUN) - Urea is formed in the liver as the end product of
protein metabolism and the urea cycle. About 85% of urea is eliminated via kidneys.
The results of serum/plasma urea are expressed in two quite different ways viz. as whole urea
molecule (mmol/l or mg/dl) and as amount of urea nitrogen (commonly referred to as blood urea
nitrogen (BUN) concentration (mmol/L or mg/dl). Urea (mg/dl) is approximately twice that of
BUN. Serum/plasma urea concentration reflects GFR - as the GFR declines, plasma/serum urea
rises. However, there are some physiological and pathological non-renal causes of increased
plasma/serum urea as well. The ratio of BUN and Creatinine can be useful to differentiate
prerenal from renal causes when the BUN is increased. Urea can be estimated by three methods - Chemical endpoint method : Diacetyl monoxime
method, Enzymatic endpoint method: Urease Berthelot method and Enzymatic Kinetic method :
UV GLDH method. Serum urea reference interval : 14 - 50 mg/dl and BUN: 6.5 - 23 mg/dl
Cystatin C - Cystatin C is a low-molecular-weight protein produced by all nucleated cells in the
body. It is formed at a constant rate and freely filtered by the kidneys. Serum levels of cystatin C
are inversely correlated with the glomerular filtration rate (GFR). In other words, high values
indicate low GFRs, while lower values indicate higher GFRs, similar to creatinine. The
advantages of cystatin C over creatinine are that it is not affected by age, muscle bulk, or diet,
and various reports have indicated that it is a more reliable marker of GFR than creatinine,
particularly in early renal impairment. Cystatin C is measured by using immunoassays such as
nephelometry or particle-enhanced turbidimetry.
The reference interval of cystatin C is around 0.62 – 1.15 mg/l. Values can vary between
laboratories.
In addition to the above parameters, sometimes serum sodium, potassium calcium, phosphorus,
magnesium and uric acid are also investigated because their altered levels have been found to
be associated with altered kidney function.

In Hinglish

Ans. Renal Function Test (RFT) का उपयोग renal disease की पहचान करने, kidney disease के
treatment का kidneys द्वारा दिए गए response की monitoring करने और Renal disease की प्रगति को
जानने के लिए किया जाता है I इसके लिए urine और blood में निम्नलिखित tests किये जाते हैं -
●Urine - routine and microscopic examination
●Glomerular Filtration Rate
●Serum creatinine
●Serum urea or blood urea nitrogen (BUN)
●Serum cystatin चाहिए
Urine examination -
Physical examination - इसमें हम urine का appearance और specific gravity देखते हैं -
Urine clear है या turbid (normal urine clear/transparent होती है), colour normal है या dark है (normal
urine straw / भूसा कलर की होती है) और Urine की specific gravity urinometer या urine strip द्वारा देखते

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हैं (जो renal concentrating ability का एक सूचक है) l साथ में urine का pH भी देखते हैं (litmus paper या
pH paper strip द्वारा) I urine का normal pH 6.0-6.5 (acidic) होता है I Normal से अधिक pH (alkaline)
kidney stones/UTIs/ kidney-related disorders का संकेत देता है किन्तु सामान्य से कम pH (more acidic)
diabetic ketoacidosis/diarrhea/ starvation का संकेत देता है I Chemical examination -
Normal urine में कुल protein की प्रतिदिन की मात्रा लगभग 150 mg होती है (जिसमें 30% albumin होती है)
और इसकी बढ़ी हुई मात्रा kidney problem को दर्शाती है I Urine में protein TCA, sulfosalicylic acid, heat
test या dip strips द्वारा मापते हैं और urine sample में immunoturbidimetric assay,
immunonephelometric assay और HPLC द्वारा albumin estimate करके urinary albumin excretion
(UAE), albumin excretion rate (AER), urinary albumin concentration (UAC) या albumin :
creatinine ratio (ACR) calculate करके normoalbuminuria, microalbuminuria और
macroalbuminuria का पता लगा सकते हैं I
Urine के Microscopic examination द्वारा भी हमें kidney function के संकेत मिलते हैं, जैसे - Red blood
cells, WBCs (pus cells), casts और crystals की उपस्थिति I
Glomerular filtration rate (GFR) - यह glomerular function का सबसे अच्छा सूचक (indicator) होता है I
GFR मिलिलीटर प्रति मिनट में वो दर (rate) होती है जिससे plasma के पदार्थ glomerulus के माध्यम से filter
होते हैं I एक व्यस्क (adult) में normal GFR 90 से 120 ml per minute होता है I इसके लिए विभिन्न फॉर्मूले
हैं, जैसे - Cockcroft -Gault formula, MDRD formula, CKD-EPI formula और IDMS traceable MDRD
formula, जिनमें serum creatinine value की आवश्यकता होती है I eGFR के विभिन्न स्तर (सामान्य से कम)
द्वारा हम renal disease, stage of chronic kidney disease (CKD), और treatment.के response
monitor कर सकते हैं I
Serum creatinine - Creatinine, muscles में creatine phosphate का उप-उत्पाद (by-product) है और यह
शरीर में एक constant rate से बनता रहता है I जब kidneys द्वारा creatinine की निकासी (clearance) कम
होती है तो blood में creatinine की मात्रा बढ़ जाती है और यह kidney function के ख़राब होने का एक संकेत
होता है I शरीर में प्रति दिन उत्पादित creatinine की मात्रा शरीर के muscle mass और diet पर निर्भर करती है I
serum में creatinine बढ़ने के prerenal, renal या postrenal कारण हो सकते हैं I
Serum creatinine estimation के 3 methods हैं - Jaffe's reaction पर आधारित 'endpoint assay' या
'reaction rate assay', Enzymatic endpoint method और Enzymatic kinetic method (विभिन्न
enzymes के उपयोग द्वारा 340 nm पर absorbance में परिवर्तन के आधार पर kinetic method द्वारा) I
Biological reference interval of serum creatinine : Male - 0.9-1.3 mg/dl, Female - 0.6 - 1.1 mg/dl
है I
Serum Urea/Blood Urea Nitrogen (BUN) - Urea protein metabolism और urea cycle के end
product के रूप में liver में बनता है I urea का लगभग 85% kidneys द्वारा eliminate होता है I
Serum/plasma urea के परिणाम दो तरह से प्रकट किये जाते हैं : एक तो पूरे urea molecule के रूप में
(mmol/l या mg/dl), और दूसरे urea nitrogen के रूप में, जिसे blood urea nitrogen (BUN) भी कहते हैं
(mmol/l या mg/dl) I urea (mg/dl) BUN का लगभग दोगुना होता है I
Serum/plasma urea concentration GFR को दर्शाता है : जैसे - जैसे GFR कम होता है, वैसे - वैसे
plasma/serum urea concentration बढ़ता है I हालांकि, कुछ physiological और pathological non-renal
कारणों से भी plasma/serum urea बढ़ जाता है I BUN और Creatinine का अनुपात BUN के बढ़ने के
prerenal और renal कारण में भेद करने में उपयोगी हो सकता है I Urea estimation के 3 methods हैं - Chemical endpoint method : Diacetyl monoxime method,
Enzymatic endpoint method: Urease Berthelot method और Enzymatic Kinetic method : UV
GLDH method. Serum urea का reference interval : 14 - 50 mg/dl और BUN: 6.5 - 23 mg/dl है I

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Cystatin C - Cystatin C एक low-molecular-weight protein है जो शरीर की सभी nucleated cells द्वारा
produce होती है और यह एक constant rate से बनती है और kidneys द्वारा freely filter होती है I serum में
इसकी बढ़ी हुई मात्रा low GFRs दर्शाती है और इसका घटा हुआ स्तर higher GFRs दर्शाता है, जो कि
creatinine के समान है I Creatinine की अपेक्षा cystatin C के फायदे ये हैं कि यह age, muscle mass, या
diet से प्रभावित नहीं होता और इसीलिए इसे creatinine की अपेक्षा एक अधिक भरोसेमंद marker मानते हैं ,
खासतौर पर शुरुआती renal impairment में I
Cystatin C को immunoassays जैसे - nephelometry या particle-enhanced turbidimetric methods
द्वारा मापा जाता है I इसका reference interval 0.62 – 1.15 mg/L है जो विभिन्न लैब्स में अलग - अलग हो
सकता है I
इन parameters के अतिरिक्त कभी - कभी serum calcium, sodium, potassium, phosphorus,
magnesium और uric acid की भी जाँच की जाती है क्योंकि kidney function में बदलाव होने पर इनके स्तर में
भी परिवर्तन पाये जाते हैं I

4.5. Antigen-antibody reaction. एंटीजन - एंटीबाडी प्रतिक्रिया

Ans. When an antigen and the antibody against the antigen combine to each other an
antigen-antibody complex is formed and this is called antigen-antibody interaction or
antigen-antibody reaction. The main aim of this interaction is to destroy the foreign substance
(bacteria/virus/toxins) that has entered the body. antigen + antibody ⇄ antigen-antibody complex
This binding between antigen and antibody is reversible due to noncovalent interactions
involving forces and bonds such as electrostatic forces, hydrogen bonds, Van der Waals forces
and hydrophobic forces.
There are five main mechanisms of antigen - antibody interaction by which the antibody
destroys the bacterial/viral antigen :
1. Some antibodies called neutralising antibodies react with viral capsid and prevent the virus
from entering the host cell. These antibodies inhibit the infectivity by binding to the pathogen
and blocking the molecules needed for cell entry.
2. Some antibodies called antitoxins are produced in response to some specific biologic toxin
(e.g. - diphtheria, tetanus). These antitoxins combine with bacterial toxins and neutralize the
toxicity sites.
3. Some antibodies are called agglutinins. These agglutinins react with the surface antigens of
invading microorganisms and inactivate them by their clumping or agglutination.
4. Some antibodies called precipitins form specifically a visible precipitate by aggregating the
antigen and thereby inactivating the invading pathogen. These inactivated microorganisms are
easily phagocytosed.
5. Opsonins are also a kind of antibodies which make the bacteria and other invading cells
susceptible to phagocytosis. This is accomplished by attachment of opsonins to the invading
bacteria and forming a bridge between the parasite and receptor site on the phagocytes so that
the bacteria are engulfed and destroyed. Another type of antibodies used against influenza virus are Neuraminidase inhibiting antibodies.
These antibodies work by blocking the enzyme neuraminidase produced by the influenza virus.
The function of this enzyme is to help new viruses to get released from the infected cells and so,
its inhibition will disrupt their release and further infection of the host‘s cells.

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In Hinglish

एंटीजन - एंटीबाडी प्रतिक्रिया
Ans. जब एंटीजन और उस antigen के विरुद्ध बनी antibody आपस में combine होती हैं तो
antigen-antibody complex बनता है और इसे antigen-antibody interaction या antigen-antibody
reaction कहते हैं I इसका मुख्य उद्देश्य होता है शरीर में प्रवेश हुए foreign substance
(bacteria/virus/toxins) को नष्ट करना I antigen + antibody ⇄ antigen-antibody complex
Antigen और antibody के बीच यह binding noncovalent interactions जैसे - electrostatic forces,
hydrogen bonds, Van der Waals forces और hydrophobic forces के कारण reversible होती है I
Antigen - antibody interaction की 5 मुख्य mechanisms हैं जिनके द्वारा antibody bacterial/viral
antigen को destroy करती है : 1. कुछ antibodies जिन्हें neutralising antibodies कहते हैं, viral capsid से react करती हैं और virus को
host cell में प्रवेश करने से रोकती हैं I ये antibodies रोगाणु से bind करके रोगाणु की cells के अंदर प्रवेश करने
हेतु आवश्यक अणुओं को अवरुद्ध करके रोगणुओं को host cells में प्रवेश करने से रोककर रोगाणुओं की
संक्रामकता (infectivity) को नष्ट करती हैं I 2. कुछ antibodies जिन्हें antitoxins कहते हैं, वो कुछ specific biologic toxin (जैसे - diphtheria, tetanus)
के response में बनती हैं और ये antitoxins bacterial toxins से combine होकर toxins की toxicity sites को
neutralize कर देती हैं I
3. कुछ antibodies जिन्हें agglutinins कहते हैं, वे invading microorganisms के surface antigens से
react करके उन organisms की clumping या agglutination कर देती हैं और इस प्रकार उन्हें निष्क्रिय कर देती
हैं I
4. कुछ antibodies जिन्हें precipitins कहते हैं, विशिष्ट रूप से antigen को aggregate करके एक visible
precipitate बनाती हैं जिससे आक्रमणकारी जीवाणु निष्क्रिय हो जाते हैं और इनकी आसानी से phagocytosis
हो जाती है I
5. Opsonins एक और प्रकार की antibodies हैं जो bacteria और अन्य आक्रमणकारी cells को phagocytosis
हेतु अतिसंवेदनशील (susceptible) बनाती हैं I इस प्रक्रिया में opsonins के आक्रमणकारी bacteria से जुड़ने से
bacteria और phagocytes की receptor sites के मध्य एक bridge जैसा बन जाता है जिससे bacteria
आसानी से phagocytes द्वारा निगल (engulf) लिए जाते हैं और नष्ट हो जाते हैं I एक अन्य प्रकार की antibodies होती हैं जो influenza virus के विरुद्ध उपयोग की जाती हैं और इन्हें
Neuraminidase inhibiting antibodies कहते हैं I ये antibodies influenza virus द्वारा उत्पन्न enzyme
neuraminidase को block कर देती हैं I इस enzyme neuraminidase का काम host की infected cells में
उत्पन्न हुए नए viruses को cells से बाहर निकालने में मदद करना होता है और इस कारण इस enzyme के
block हो जाने पर उत्पन्न हुए नए viruses के cells से बाहर निकलने की प्रक्रिया अवरुद्ध हो जाती है जिससे
infection का शरीर में फैलना कम हो जाता है I

4.6. Use of Personal protective equipment in laboratory. प्रयोगशाला में व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरण
का उपयोग
Ans. PPE (personal protective equipment) is used as protective barriers under ‘Universal
precautions /standard precautions’. These protective barriers reduce the risk of exposure of the
health-care worker's skin or mucous membranes to potentially infectious materials. Personal
protective equipment (PPE) includes protective clothing, gloves, face shields, goggles,

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facemasks and/or respirators or other equipment designed to protect the wearer not only from
the spread of infection or illness but also from hazardous chemicals and radioactive substances.
How to put on PPE - PPE should be put on in this sequence -
Hand hygiene → shoe covers, if applicable → gown → face mask → face shield /goggles →
gloves
How do you remove PPE - PPE should be removed in this sequence -
Shoe covers → gloves → gown removed from shoulders → goggles/face shield → face mask
→ hand hygiene

In Hinglish

प्रयोगशाला में व्यक्तिगत सुरक्षा उपकरण का उपयोग -
Ans. Protective barriers से health-care workers की त्वचा या mucous membranes को संभावित
संक्रामक सामग्री के संसर्ग (exposure) के जोखिम को कम किया जा सकता है I इसके लिए PPE का इस्तेमाल
करते हैं I Personal protective equipment (PPE) में शामिल हैं - protective clothing, gloves, face
shields, goggles, face masks और/या respirators या अन्य equipment जिनके द्वारा injury, संक्रमण,
ख़तरनाक केमिकल्स और रेडियोएक्टिव पदार्थों से बचा जा सके I
PPE पहनने का क्रम - PPE को इस क्रम में पहनना चाहिए -
Hand hygiene → shoe covers, if applicable, → gown → face mask → face shield /goggles →
gloves
PPE उतारने का क्रम - PPE को इस क्रम में उतारना चाहिए -
Shoe covers → gloves → gown removed from shoulders → goggles/face shield → face mask
→ hand hygiene

4.7. Quality Control. गुणवत्ता नियंत्रण
Ans. The Quality Control (QC) in Biochemistry is used to identify the errors in the analytical
phase of the testing system and to correct them before the release of the patients’ test reports.
This way we can assess the reliability of the test results of any analyte by means of testing its
accuracy and precision. Thus the purpose of QC is as follows:
●To maintain the precision and accuracy of the analytical processes and to identify the
error, if any, in the analytical processes so that the error could be rectified before the
release of patients’ tests reports.
●To monitor the analytical process and find which method is more accurate by comparing
the different methods for the same analyte in terms of their accuracy.
●This also helps to evaluate the technologist’s skills.
Quality control includes the implementation of Internal Quality Control (IQC) and External
Quality Control (EQC or Proficiency Testing, PT). IQC (normal and abnormal) is used daily and it
is a patient-like material prepared from human serum, urine or spinal fluid. The concentration
range of different analytes present in it is known. For using the EQC the laboratory participates
in any external quality assessment scheme (EQAS) (e.g. - Bio-rad, Randox and CMC Vellore
EQAS) and It is used to check the laboratory's performance and improvement. The objective of
EQC assessment is to achieve between lab and between method compatibility and to assure
that the results supplied by the laboratory are correct/reliable and can be used for decisions by

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the doctor ordering the tests. Some graphical and statistical tools are used for interpretation of
the quality control data. The assessment of the IQC data is usually done with the help of Quality
Control charts [Levey-Jennings (LJ) Charts] and Westgard Rules. QC samples are tested along
with every set of patients’ test samples and with the results of QC we can assess whether our
test results are under control (“in control”) or not ("out of control") based on some criteria
depending upon the number of QC (1,2 or 3) used. If the value of the QC is above or below the
desired limit then first we try to find the root cause of the error (root cause analysis, RCA) and
on the basis of the RCA we take corrective and preventive action (CAPA). The statistical
assessment of EQC is done on the basis of Z-score, standard deviation index (SDI), coefficient
of variation ratio (CVR) and variance index score (VIS)..

In Hinglish

गुणवत्ता नियंत्रण -
Ans. Biochemistry में Quality Control (QC) का इस्तेमाल मरीज़ की test report को release करने से पूर्व
testing system की analytical phase में होने वाली त्रुटियों को पहचानने और उन त्रुटियों को ठीक करने हेतु
किया जाता है I यानि quality control द्वारा हम किसी भी analyte के जाँच परिणाम की reliability का
मूल्यांकन accuracy और precision के माध्यम से कर सकते हैं I QC के निम्न उद्देश्य हैं -
●QC लैब में analytical process की accuracy और precision को maintain रखने और analytical
process में होने वाली error को तुरन्त जानने में मुख्य भूमिका निभाता है, ताकि patient की test
report में कोई गल्ती न होने पाये I
●QC द्वारा हम किसी analyte के दो estimation methods को compare करके यह जान सकते हैं कि
कौन सा method अधिक accurate है I
●QC द्वारा लैब तकनीशियन के कौशल (skills) का मूल्यांकन भी कर सकते हैं I
Quality control के अंतर्गत शामिल है - Internal Quality Control (IQC) और External Quality Control
(EQC या Proficiency Testing, PT) का कार्यान्वयन I IQC (normal और abnormal) का उपयोग प्रतिदिन
किया जाता है जो एक patient-like material होता है जिसे human serum, urine या spinal fluid से बनाते हैं
और इनमें उपस्थित विभिन्न analytes के results और उनकी range हमें ज्ञात होते हैं I जबकि EQC के उपयोग
हेतु laboratory को किसी external quality assessment scheme (EQAS) (जैसे - Bio-rad, Randox and
CMC Vellore EQAS) में भाग लेना होता है जिसके द्वारा लैब की योग्यता और क्षमता की परख होती है I EQC
के मूल्यांकन का उद्देश्य होता है - विभिन्न लैब और विभिन्न test methods के बीच सुसंगति (compatibility)
बनाए रखना और यह सुनिश्चित करना कि लैब द्वारा प्राप्त जाँच परिणाम सही/भरोसेमंद हैं और उनका उपयोग
डॉक्टर द्वारा मरीज के उपचार हेतु निर्णय लेने में किया जा सकता है I Quality control data की व्याख्या हेतु
graphical और statistical tools का इस्तेमाल किया जाता है I IQC data का मूल्यांकन आमतौर पर Quality
Control charts [Levey-Jennings (LJ) Charts] और Westgard Rules की सहायता से किया जाता है I QC
sample मरीज़ के tests के प्रत्येक set के साथ test किया जाता है और उसके परिणाम द्वारा यह पता लगा
सकते हैं कि रोज़ किये गये tests नियंत्रण में (“in control”) हैं या नहीं ("out of control") और यह तय करने के
कुछ criteria हैं जो इसपर आधारित हैं कि एक, दो या तीन QC का इस्तेमाल हुआ है I यदि QC की value
desired limit के ऊपर या नीचे होती है तो सर्वप्रथम हम इस error के मूल कारण का विश्लेषण करते हैं (root
cause analysis, RCA) और फिर उसके आधार पर corrective और preventive action (CAPA) लेते हैं i
EQC का सांख्यिकीय मूल्यांकन (statistical assessment) Z-score, standard deviation index (SDI),
coefficient of variation ratio (CVR) और variance index score (VIS) के आधार पर किया जाता है I

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4.8. Explain moist heat sterilization. नम ताप विसंक्रमण को समझाइये I
Ans. Moist heat sterilization is a physical method of sterilization and it is used in three ways in
a diagnostic laboratory -
1.At a temperature of >100 °C (steam sterilization) - This is the most commonly used and
reliable method for sterilization. It is a procedure in which heated, high-pressure steam is used
to sterilize an object. The equipment used in this method is called autoclave. The two basic
types of steam sterilizers (autoclaves) are the gravity displacement autoclave (class N) and the
high-speed prevacuum sterilizer (class B). These may be large, medium or small (table-top)
steam sterilizers. In this process the moist heat denatures the structural proteins and enzymes
of the microbes resulting in their complete destruction or elimination. Four parameters used in
steam sterilization are - steam (dryness fraction ≥97%), pressure (106 kPa or 795 mmHg),
temperature (121/132 °C) and time (30 min/4 min). However, the duration of sterilization
depends also on the item to be sterilized. When the items kept in the autoclave come in direct
contact with steam at a certain temperature and pressure the vegetative cells and spores
present on the items are completely destroyed. The items covered with paper (e.g. glasswares)
are kept in a hot air oven for some time after autoclave to prevent the steam condensation and
finally these sterilized items are kept in a clean, safe and closed environment to maintain their
sterility.
2.At a temperature of 100°C - This is also a moist heat sterilization method of sterilization in
which the items to be sterilized are dipped in boiling distilled water for 30-40 minutes. This
method is used for sterilization of contaminated dishes, beddings, pipettes, other instruments
and temperature sensitive items. This method is less reliable than autoclave. 3.Steaming at 100 °C (Tyndallization) - This is used to sterilize substances /media containing
ingredients sensitive to pressurized heating at temperature above 100 °C. The process involves
steaming on three successive days. On the first day the substance (medium) is steamed for 30
minutes to kill the vegetative cells. Then it is left overnight at room temperature to encourage
the germination of endospores. The steaming for a further 30 minutes on the second and third
day ensures the destruction of the germinated spores.

In Hinglish

नम ताप विसंक्रमण -
Ans. नम ताप विसंक्रमण (moist heat sterilization) sterilization का एक physical method है और
डायग्नोस्टिक लैब में इसका उपयोग तीन प्रकार से होता है -
1.At a temperature of >100 °C (steam sterilization) - यह sterilization की सभी उपलब्ध विधियों में
सबसे अधिक उपयोग होने वाली और सबसे अधिक भरोसेमंद विधि है I
इस विधि में किसी वस्तु को high
pressure पर steam द्वारा sterilize किया जाता है और
इसमें इस्तेमाल होने वाले यन्त्र को autoclave
कहते हैं I Steam sterilizers (autoclaves) मुख्यरूप से दो प्रकार के होते हैं - gravity displacement
autoclave (class N) और high-speed prevacuum sterilizer (class B). ये large, medium या small
(table-top) size के steam sterilizers होते हैं I इस प्रक्रिया में moist heat के कारण रोगाणुओं की structural proteins और enzymes के denaturation के
कारण रोगाणु पूरी तरह नष्ट हो जाते हैं I Steam sterilization में चार parameters का इस्तेमाल होता है, जो हैं -
steam (dryness fraction ≥97%), pressure (106 kPa,795 mmHg), temperature (121/132 °C) और
time (30 min/4 min) I हालांकि, sterilization के समय का निर्धारण sterilize किये जाने वाले item पर भी

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निर्भर करता है I Steam sterilization हेतु इस्तेमाल होने वाले एक autoclave में रखे सभी items एक आवश्यक
temperature और pressure पर एक निश्चित समय के लिए steam के सीधे सम्पर्क में आने पर रोगाणुओं के
vegetative cells और spores दोनों ही पूर्णतया नष्ट हो जाते हैं I autoclave करने के बाद autoclave किये गये
paper से cover किये गये items (जैसे - glasswares) को hot air oven में थोड़ी देर के लिए रखते हैं ताकि
paper पर steam condensation नहीं होने पाये और अन्त में autoclave किये गये items को स्वच्छ, सुरक्षित
और बंद वातावरण में रखना चाहिए ताकि items की sterility बनी रहे I
2.At a temperature of 100°C - यह भी एक moist heat sterilization की विधि है जिसमें sterilize किए जाने
वाले items को उबलते हुए distilled water में 30-40 मिनट तक डुबो कर रखते हैं I इसका इस्तेमाल दूषित
dishes, beddings, pipettes, एवं अन्य instruments और temperature sensitive items को sterilize
करने के लिए करते हैं I यह autoclave के मुकाबले कम भरोसेमंद है I 3.Steaming at 100 °C (Tyndallization) - यह विधि उन substances /media को sterilize करने हेतु
उपयोग की जाती है जो 100 °C से अधिक तापमान पर pressurized heating के प्रति संवेदनशील होते हैं I इसमें
लगातार तीन दिनों तक sterilization किया जाता है, जिसमें पहले दिन 30 मिनट तक steaming करने पर
vegetative cells नष्ट हो जाते हैं I फिर इसे room temperature पर रात भर छोड़ देते हैं ताकि बचे हुए
endospores अंकुरित हो जाएं I अब दूसरे और तीसरे दिन पुनः 30 - 30 मिनट steaming करने पर अंकुरित
spores भी नष्ट हो जाते हैं I

Q. 5. Answer in detail -

5.1. Write the various lab safety and universal precautions. विभिन्न प्रयोगशाला सुरक्षा तथा
सार्वभौमिक सावधानियों को लिखिए I
Ans. The laboratory safety and precautions begin right from the entry in the laboratory and are
to be followed till the exit from the laboratory.
Important lab safety rules and precautions :
1. Laboratory safety dress codes should be followed such as (a) Lab coats must be worn while
working in the lab and should be removed before leaving the lab and also if going for lunch, rest
room or meeting in a conference room, (b) Sandals and open toed shoes should not be worn.
The feet should be fully covered by the footwears (shoes). 2. It is important to know the emergency exit of the laboratory, aid emergency response
personnel and where the items like fire extinguishers, emergency showers, eyewash faucets,
first aid kits, and fire blankets are stored and how to operate or use them. The emergency
phone numbers (fire station, police etc.) should be known to call for help in case of an
emergency.
3. Eating, drinking and smoking is strictly prohibited in the laboratory (not even chewing
gum/paan masala). The edibles or drinking water etc. should not be kept in the laboratory
refrigerator. Laboratory glasswares should never be utilized as food or beverage containers.
4. The laboratory workers should be aware of the Laboratory Safety Symbols and Hazard Signs.
The symbols include hazard warning symbols, safety (mandatory) symbols and prohibitory
symbols.
5. Every laboratory specimen should be considered potentially infectious and should be handled
carefully using protective gloves. In case of any spillage, the SOP for its proper disposal should
be followed. The accident /incident of spillage should be recorded in the prescribed register.
Universal precautions were first designed (by Centers for Disease Control and Prevention
(CDC) in 1985 for workers who work in an environment where they are exposed to blood and

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other bodily fluids visibly contaminated with blood such as semen, vaginal secretions, synovial
fluid, amniotic fluid, cerebrospinal fluid, pleural fluid, peritoneal fluid, feces and urine. In 1996,
the CDC expanded the concept and changed the term to "standard precautions", which
integrated and expanded the elements of universal precautions to include contact with all body
fluids (except sweat), regardless of whether blood is present or not. The purpose of these
precautions is to prevent health workers from any possible infection from such body fluids of the
patients.
Infection can occur when these agents (infected body fluids) come into contact with broken skin
or contact with mucous membranes of the eyes, nose and mouth. It is important to consider all
biological wastes as infectious. Therefore, these universal precautions/standard precautions
should be followed by all the laboratory workers at all times in the laboratory. These precautions
are as under:
Hand Hygiene -
The hands should be washed -
●Before wearing and after removal of gloves.
●Before & after patient contact
●Upon contact or when there's visible contamination with blood or other potentially
infectious material.
●Upon completion of required tasks and before leaving the laboratory.
The hands should be washed thoroughly using soap and water and dried with a clean,
disposable paper towel or using an automatic hand dryer.
When soap and water are not available then an alcohol-based hand sanitizer that contains at
least 60% (preferably 70%) alcohol is used (hands rubbed until dry).
Use of protective barriers - Protective barriers reduce the risk of exposure of the health-care
worker's skin or mucous membranes to potentially infectious materials. Personal protective
equipment (PPE) includes protective clothing, gloves, face shields, goggles, facemasks and/or
respirators or other equipment designed to protect the wearer from injury, spread of infection or
illness, hazardous chemicals and radioactive substances.
How to put on PPE -
Hand hygiene → shoe covers, if applicable → gown → face mask → face shield /goggles →
gloves
How do you remove PPE -
Shoe covers → gloves → gown removed from shoulders → goggles/face shield → face mask
→ hand hygiene
Cleaning of contaminated surfaces/fluid spills -
●Gloves should be worn before decontaminating the spill and disposable towels or other
means of cleaning that will ensure against direct contact with blood, body fluids or feces
should be used.
●The contaminated area is decontaminated by first covering it with paper towels or any
absorbing papers then an approved germicide or 1:10 solution of concentrated bleach
solution is poured over it and left for at least 30 minutes.
●The soaked papers are removed with gloved hands and discarded.
●The contaminated surface of any equipment must also be thoroughly washed and
disinfected.

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Safe handling/disposal of contaminated material -
●Recapping of syringe with the used needle should be avoided, but if necessary,
"one-hand scoop technique" should be used.
●All used 'sharps' should be discarded in the appropriate puncture-resistant containers.
●The puncture-resistant gloves should be worn for handling all the contaminated wastes
to prevent body contact.
●All biological waste should be disposed off in a puncture-resistant container lined with a
leak-proof plastic bag. A biological waste symbol should be pasted on the container.
●Waste containers should not be overfilled or forcefully stuffed as it may increase the
contamination.

In Hinglish

विभिन्न प्रयोगशाला सुरक्षा तथा सार्वभौमिक सावधानियाँ
लैब में सुरक्षा नियम और सावधानियाँ लैब में प्रवेश के साथ ही शुरू हो जाती हैं और लैब से निकलने तक उनका
पालन किया जाता हैं I
महत्वपूर्ण lab safety rules और precautions :
1. Laboratory safety dress codes का पालन करना चाहिए, जैसे - (a) लैब में काम करते समय lab coat
पहनना चाहिए और लैब से बाहर जाते समय, लंच, शौचालय या conference room में जाने से पहले उसे उतार
देना चाहिए I (b) चप्पल या खुले मुँह वाले जूते लैब में नहीं पहनने चाहिए I
2. लैब में उपलब्ध सुरक्षा सम्बंधित जानकारी जैसे - आपातकालीन स्थिति में किसे सूचना देनी है तथा
आपातकालीन द्वार, अग्निशामक यन्त्र, eyewash नल, इमरजेंसी shower, fire blanket, first aid kit के
स्थान और प्रयोग विधि का पता होना चाहिए I आपातकालीन स्थिति में मदद हेतु emergency phone
numbers (fire station, police आदि) की जानकारी होनी चाहिए I 3. लैब में खाना, पीना और धूम्रपान सख्त मना होता है (chewing gum और पान मसाला भी ) I लैब के फ्रिज में
खाने -पीने की वस्तु नहीं रखें I लैब के glasswares (beaker आदि) को खाने-पीने के सामान के लिए इस्तेमाल
नहीं करें I
4. लैब सुरक्षा और खतरों (hazards) के signs और symbols की जानकारी होनी चाहिए, जिनमें कुछ warning
और सुरक्षा के लिए होते हैं तो कुछ mandatory और prohibitory होते हैं I
5. लैब में प्रत्येक sample को रोग़जनक (infectious) समझना चाहिए और उसे protective gloves पहनकर ही
छूना चाहिए I sample container को टूटने से बचाना चाहिए और यदि किसी वजह से sample का बिखराव
(spillage ) हो जाये तो उसे तुरंत लैब के नियमानुसार (SOP) साफ करना चाहिए तथा इस दुर्घटना के बारे में
निर्धारित रजिस्टर में विवरण लिखना चाहिए I Universal precautions, Center for Disease Control and Prevention (CDC), USA द्वारा 1985 में
एड्स के मद्देनज़र introduce की गई guidelines का एक set हैं I इनकी रचना उन workers के लिए की गई है
जो ऐसे वातावरण में काम करते हैं जहाँ उनका लोगों के शरीर के blood और अन्य body fluids जो blood से
contaminated हों, जैसे - blood, semen, vaginal secretions, synovial fluid, amniotic fluid,
cerebrospinal fluid, pleural fluid, peritoneal fluid, feces और urine से exposure होता है I किन्तु 1996
में CDC ने इस संकल्पना (concept) का विस्तार करते हुए इसे एक नया नाम दिया 'Standard Precautions'
जिसमें सभी body fluids के contact से बचने को कहा गया चाहे उसमें blood present हो या न हो I इन body
fluids का संपर्क workers की कटी - छिली त्वचा या आँख, नाक और मुँह की mucous membrane से होने पर
उन्हें संक्रमण हो सकता है I सभी प्रकार के बायोलॉजिकल waste को भी रोग़जनक समझना चाहिए I इन
precautions का उद्देश्य स्वास्थ्य कर्मियों को मरीज़ के body fluids से होने वाले संभावित संक्रमण से बचाना है

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I इसलिए सभी लैब workers को universal precautions/standard precautions का सदैव पालन करना
चाहिए और ये निम्न हैं :
1.हाथों की सफाई (Hand hygiene )
हाथ कब धोना चाहिए -
●Gloves पहनने के पहले और उतारने के बाद I
●मरीज़ के संपर्क /स्पर्श के पहले और बाद में I
●Blood या अन्य संभावित रोग़जनक पदार्थ के संपर्क में आने पर I
●लैब में काम समाप्त करने के बाद और लैब छोड़ने से पहले I
हाथों को साबुन और पानी से अच्छी तरह धोकर एक साफ़ disposable paper towel या एक automatic hand
dryer से सुखा लेना चाहिए I यदि साबुन और पानी उपलब्ध नहीं हो तो एक alcohol-based hand sanitizer,
जिसमें कम से कम 60% (बेहतर हो यदि 70% हो) alcohol हो, का इस्तेमाल करें (हाथों को सूखने तक मलना
चाहिए) I 2.Protective barriers का इस्तेमाल
Protective barriers से health-care workers की त्वचा या mucous membranes को संभावित संक्रामक
सामग्री के संसर्ग (exposure) के जोखिम को कम किया जा सकता है I इसके लिए PPE का इस्तेमाल करते हैं I
Personal protective equipment (PPE) में शामिल हैं - protective clothing, gloves, face shields,
goggles, face masks और/या respirators या अन्य equipment जिनके द्वारा injury, संक्रमण, ख़तरनाक
केमिकल्स और रेडियोएक्टिव पदार्थों से बचा जा सके I
PPE पहनने का क्रम - Hand hygiene → shoe covers, if applicable, → gown → face mask → face
shield /goggles → gloves
PPE उतारने का क्रम - Shoe covers → gloves → gown removed from shoulders → goggles/face
shield → face mask → hand hygiene
3.Contaminated surfaces/fluid spills को साफ करना
●Blood या body fluid के spill को decontaminate करने के लिए पहले gloves पहन कर उसे paper
towel या कोई absorbent paper से cover करते हैं जिससे blood उसमेँ absorb हो जाए , फिर
water और किसी detergent से उतने area को साफ करते हैं I फिर कोई germicide या 1:10 diluted
bleach solution (5.25 % sodium hypochlorite) डाल कर कम से कम 30 मिनट छोड़ देते हैं I इसके
बाद soaked papers/paper towel को gloves पहन कर हटा कर उचित रूप से निस्तारित करते है I
●किसी equipment की contaminated surfaces को भी इसी प्रकार अच्छी तरह साफ कर disinfect
करना चाहिए I
4.दूषित पदार्थों को सुरक्षापूर्वक संभालना और निस्तारण करना (safe handling/disposal of contaminated
material)
●इस्तेमाल की गई needle को तोड़ना, मोड़ना या कोई हेर-फेर नहीं करना चाहिए I needle पर उसके cap
को पुनः नहीं लगाना चाहिए I यदि recap करना पड़े तो 'one hand scoop तकनीक' का इस्तेमाल
करना चाहिए I इस्तेमाल किये हुए sharps को निर्धारित sharp resistant container में रखना चाहिए I
sharps को सामान्य कूड़े में कभी नहीं डालना चाहिए I ●Biological waste और अन्य दूषित पदार्थों का निस्तारण करते समय विशेष सावधानी रखनी चाहिए I
●सभी biological waste को रोग़जनक समझना चाहिए और इसलिए इनको handle करते समय
puncture resistant gloves पहनने चाहिए तथा ये ध्यान रखना चाहिए कि इनका संपर्क शरीर से नहीं
हो I
●Biological waste को leak proof प्लास्टिक बैग वाले puncture resistant container में डालना
चाहिए और container पर biological waste का symbol लगा होना चाहिए I
●Waste container को उसकी क्षमता से अधिक नहीं भरना चाहिए और न ही उसमें ज़बरदस्ती ठूसना
चाहिए क्योंकि इससे संदूषण बढ़ सकता है I

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Q. 5.2. Describe polymerase chain reaction. Polymerase chain reaction का वर्णन करें I
Ans. PCR is a very sensitive technique, used by clinicians and researchers to diagnose
diseases, clone and sequence genes, and carry out sophisticated quantitative and genomic
studies in a rapid and very sensitive manner and even in forensic medicine to identify criminals.
Basically, PCR is used in molecular biology to make thousands to millions of copies of DNA
(amplify) and only trace amounts of DNA are needed (from blood, skin, hair, saliva, and
microbes) for PCR to generate enough copies of DNA to be analyzed using conventional
laboratory methods.
Principle of PCR
In PCR a short segment of DNA is amplified (many copies of DNA are made) using a primer
mediated enzyme DNA polymerase. The primer is a short DNA fragment with a defined
sequence complementary to the target DNA that is to be detected and amplified. This primer
serves as a starting point for DNA synthesis by DNA polymerase. In PCR the primer used is
synthesized in the laboratory. This synthetic primer is annealed to a single-stranded template of
DNA (which is to be amplified) that contains a region complementary to the primer. Then DNA
polymerase elongates the 3' primer end by adding nucleotides to generate an extended region
of double stranded DNA.

Things required -
Sample - A DNA sample which may be from saliva, blood, hair, skin scraping, etc.
DNA primers - a defined sequence of nucleotides complementary to the target DNA and it is
synthesized in the laboratory.
Taq DNA polymerase - a heat resistant enzyme that aids in the synthesis of a complementary
strand of DNA obtained from the thermophilic bacterium, Thermus aquaticus (Taq).
Nucleotide (dNTPs) solution - containing dATP, dCTP, dGTP, and dTTP that is used to build
duplicate DNA strands.
PCR buffer - The major components of PCR buffers include magnesium chloride (MgCl2),
tris-HCl and potassium chloride (KCl).
PCR Steps
The PCR process begins with a segment of a DNA sample placed in a suitable tube along with
the reagents and chemicals listed above. The tube is placed into the PCR machine or thermal
cycler. The thermal cycler takes the solution through a 3-step process: denaturation, annealing,
and extension. Step 1 - Denaturation
In this step the two strands of DNA are separated by a process of heating the solution
containing DNA at 94-96 °C by using a thermal cycler. The heating breaks the two hydrogen
bonded DNA strands into a pair of single-stranded polynucleotide molecules.

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Step 2 - Annealing (primer binding)
The sample mixture is then cooled to between 50 to 60°C allowing the DNA primers and the
DNA polymerase enzyme to bind to the individual strands of DNA that were separated by the
heat (this is termed annealing of the primers). At this point, the nucleotides (A, T, C, G) from the
added mixture solution will pair with the individual separated strands of DNA that resulted from
the heating process.
Step 3 - Extension
The temperature is then raised slightly to Taq polymerase’s ideal temperature (70-75 °C). At this
temperature Taq polymerase attaches to one end of each primer and synthesizes and elongates
the target DNA complementary to the template DNA. Thus, a new duplicate double-stranded
DNA molecule has been formed from each of the single strands of the original sample molecule. The cycle is then repeated about 35 to 40 times using the thermal cycler which automatically
repeats the heating and cooling cycles of the process. Resulting DNA sequence is doubled
each time the heating/cooling cycle is conducted by the cycler. Thus, a single short segment of
DNA from one sample can be amplified to form millions of copies after 35 doubling cycles. Analysis of PCR amplified DNA segments
1.By electrophoresis- The amplified (replicated) DNA segments so obtained after the completion
of the PCR process, are separated by electrophoresis along with the nucleotide segments from
a known source. Then the amplified segments are identified by comparison with the nucleotide
segments of the known source. 2. Quantitative PCR (qPCR) -
qPCR is a variation of conventional PCR and allows analysis of the amplified/replicated DNA in
real-time during the usual 40 cycles of the procedure using fluorescent dyes. The fluorescent
dyes attach to some of the nucleotide strands allowing users to measure specific products and
their amounts during the amplification/replication cycles. Special thermal cyclers, known as
real-time thermal cyclers, are used for qPCR. In addition to heating and cooling the tubes
containing the PCR reagents, they can measure the fluorescence inside the tube at every cycle.
This allows users to skip the gel electrophoresis or other secondary procedures needed for final
analysis of the PCR products, thus producing more rapid results. Thus, in the 'real time'
technique we can collect data throughout the PCR process as it occurs, i.e. combining
amplification and detection into a single step while in conventional PCR the results are only
visible at the end of the reaction.
Reverse transcription PCR (RT PCR) and reverse transcription quantitative real-time PCR
(RT-qPCR)
RT–PCR is a variation of PCR. The two techniques use the same process except that RT–PCR
has an added step of reverse transcription (RT) of RNA to DNA to allow for amplification. This
means PCR is used for pathogens, such as viruses and bacteria, that already contain DNA for
amplification, while RT–PCR is used for those containing RNA (such as COVID-19 virus) as a
genetic material instead of DNA, that needs to be transcribed to DNA for amplification.
Reverse transcription PCR allows the use of RNA as a template to generate complementary
DNA (cDNA). A single-stranded copy of cDNA is generated using the reverse transcriptase
enzyme (reverse transcription). This cDNA can then be amplified by a DNA polymerase,
generating double-stranded cDNA which can further be amplified by the standard PCR-based
amplification process. This is done because only DNA can be copied or amplified.

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When this RT-PCR is combined with quantitative PCR it becomes RT-qPCR or real time
RT-PCR.

In Hinglish

Polymerase chain reaction -
Ans. PCR एक बहुत ही sensitive तकनीक है जिसका इस्तेमाल clinicians और researchers द्वारा
diseases की diagnosis, gene cloning/sequencing/genome studies और forensic medicine में
criminals की पहचान आदि में एक rapid और sensitive तकनीक के रूप में इस्तेमाल होता है I मूलरूप से PCR
का उपयोग molecular biology में DNA की हज़ारों - लाखों copies बनाने (amplify) के लिए होता है और इसके
लिए DNA की केवल अल्प मात्रा (trace amount) की आवश्यकता होती है, जो हमें blood, skin, hair, saliva,
और microbes से प्राप्त हो सकती है I PCR द्वारा प्राप्त इन DNA copies को फिर conventional laboratory
methods द्वारा analyse करा जा सकता है I

Principle of PCR
PCR में DNA के एक short segment को एक primer की मध्यस्थता के साथ enzyme DNA polymerase
की मदद से amplify (DNA की कई copies बनाना) किया जाता है I यह primer, DNA का एक short fragment
होता है जिसमें एक defined sequence होता है जो target DNA (जिसे detect और amplify किया जाना है) के
sequence का complementary होता है I यह primer laboratory में synthesize किया जाता है और यह
DNA polymerase द्वारा synthesis के लिए starting point का काम करता है I इस synthetic primer को
DNA (जिसे amplify करना है) के single-stranded template, जिसमें primer का complementary
sequence region होता है, के साथ anneal (एनील) कर दिया जाता है I इसके बाद DNA polymerase द्वारा
3' primer end को nucleotides add करके बढ़ाया (elongate) जाता है जिससे एक double stranded DNA
का एक extended region बन जाता है I

Things required -
Sample - DNA सैंपल जो saliva, blood, hair, skin scraping, आदि से प्राप्त किया जा सकता है I
DNA primers - a defined sequence of nucleotides complementary to the target DNA जिसे
प्रयोगशाला में संश्लेषित किया जाता है I
Taq DNA polymerase - यह enzyme DNA के एक complementary strand की synthesis के लिए
आवश्यक होता है I यह heat resistant Taq DNA polymerase thermophilic bacterium, Thermus
aquaticus (Taq) से प्राप्त होता है I
Nucleotide (dNTPs) solution - इसमें dATP, dCTP, dGTP, और dTTP होते हैं जो duplicate DNA
strands बनाने में उपयोग होते हैं I
PCR buffer - इसके मुख्य अवयव magnesium chloride (MgCl2), tris-HCl और potassium chloride
(KCl) होते हैं I

22
PCR Steps
PCR process की शुरुआत होती है DNA के एक segment से जिसे एक उचित tube में reagents और
chemicals (DNA primer, DNA polymerase, Nucleotide solution - containing dATP, dCTP, dGTP,
और dTTP, PCR buffer) के साथ रखने से I यह tube फिर एक PCR machine या thermal cycler में रखी
जाती है I इस thermal cycler में 3-step प्रक्रिया होती है जो हैं - denaturation, annealing और extension I Step 1 - Denaturation
इस step में thermal cycler में DNA वाले solution को 94-96 °C पर गर्म करते हैं जिससे DNA के दोनों
strands अलग हो जाते हैं I इस तरह एक जोड़ी single-stranded polynucleotide molecules प्राप्त होते हैं I
Step 2 - Annealing (primer binding)
इस step में sample mixture को 50 - 60°C तक ठंडा किया जाता है ताकि DNA primers और DNA
polymerase enzyme DNA के individual strands (जो heat द्वारा अलग - अलग हो गए थे) से bind हो जाएं
(इसे primers की annealing प्रक्रिया कहते हैं) I इस समय, mixture solution के nucleotides (A, T, C, G)
DNA के individual separated strands से pair बनाते हैं I Step 3 - Extension
अब temperature को 70-75 °C तक बढ़ा देते हैं जो कि Taq polymerase के लिए ideal temperature होता है
I इस temperature पर Taq polymerase प्रत्येक primer के एक सिरे पर attach हो जाता है और template
DNA के complementary target DNA की synthesis और उसका elongation करता है I इस प्रकार, original
sample DNA molecule के प्रत्येक single strand से एक नया duplicate double-stranded DNA
molecule बन जाता है I यह cycle thermal cycler द्वारा फिर 35 - 40 बार repeat की जाती है और इस तरह
resulting DNA sequence प्रत्येक heating/cooling cycle में दोगुना हो जाता है I इस प्रकार, एक sample
DNA के single short segment को इन doubling cycles द्वारा amplify करके उसकी millions of copies
बनाई जा सकती हैं I
Analysis of PCR amplified DNA segments-
1.By electrophoresis- PCR process complete होने के बाद प्राप्त हुए amplified (replicated) segments
को known source से प्राप्त nucleotide segments से, electrophoresis द्वारा separation के बाद,
compare करके amplified segment की पहचान करते हैं I
2.Quantitative PCR (qPCR) -
qPCR conventional PCR का ही एक रूपांतर (variant) है और इसके द्वारा amplified/replicated DNA की
analysis fluorescent dye की मदद से PCR की सामान्य 40 cycles के वास्तविक समय (real time) में ही
कर सकते हैं I यह fluorescent dye कुछ nucleotide strands से attach हो जाती है जिससे
amplification/replication cycles के दौरान बने specific products के amount को measure कर सकते हैं I
इसके लिए special thermal cyclers (real-time thermal cyclers) का इस्तेमाल करते हैं जो PCR reagent
tubes की heating और cooling करने के साथ - साथ प्रत्येक cycle में tubes की fluorescence भी measure
कर सकते हैं I इस तरह PCR products की analysis PCR procedure के दौरान ही हो जाती है और gel
electrophoresis या कोई अन्य method का इस्तेमाल नहीं करना पड़ता और results कम समय में प्राप्त हो
जाते हैं I इस प्रकार, qPCR में amplification और detection को combine कर दिया जाता है, जबकि
conventional PCR में amplification और detection को अलग - अलग करना पड़ता है I
Reverse transcription PCR (RT PCR) -
RT–PCR भी PCR का एक variation है किन्तु अंतर केवल यह है कि RT–PCR में एक अतिरिक्त step होता है
जिसमें RNA का DNA में reverse transcription (RT) होता है और फिर इस DNA का amplification होता है I
RT–PCR का इस्तेमाल उन pathogens के लिए होता जिनमें DNA की बजाए RNA genetic material होता है
(जैसे - COVID-19 virus) और जिसे amplification हेतु पहले DNA में transcribe करना पड़ता है I RT-PCR
में RNA को एक template की तरह इस्तेमाल करते हुए enzyme reverse transcriptase की मदद से
single-stranded complementary DNA (cDNA) की एक single copy generate करते हैं (इस प्रक्रिया को

23
reverse transcription कहते हैं और ऐसा इसलिए किया जाता है क्योंकि हम PCR द्वारा केवल DNA को
amplify कर सकते हैं RNA को नहीं) I इस cDNA को फिर DNA polymerase की मदद से amplify किया जाता
है I जब इस RT-PCR को quantitative PCR के साथ combine कर देते हैं तो इसे RT-qPCR or real time
RT-PCR कहते हैं I
Q. 5.3. Anticoagulant vials, preparation and uses. Anticoagulant vials, उनके बनाने का तरीका
और उपयोग लिखिए I
Ans. - Three types of blood samples are used in a diagnostic laboratory - whole blood, plasma
and serum. Anticoagulants are used for whole blood and plasma sample collection.
Anticoagulants are used to prevent blood clotting and to maintain the integrity of blood cells. In a
diagnostic laboratory different kinds of anticoagulant vials/tubes are used for blood collection: 1.EDTA (Ethylenediaminetetraacetic acid) - is used for blood sample collection for hematological
parameters such as cell count, hematocrit, hemoglobin estimation, and the cell differential
count. It is used as disodium, dipotassium, or tripotassium salt.
Mechanism of action - EDTA is a chelating agent that binds the calcium ions, which are needed
for coagulation. Thus the coagulation of blood is prevented.
●The disodium, dipotassium or tripotassium salts of EDTA are used.
●Potassium EDTA (K2 or K3 ) is preferred to sodium EDTA because sodium EDTA is less
soluble in water.
●EDTA (anhydrous salt) is used at a concentration of 1.2 to 2.0 mg/ml blood (4.1 to 6.8
mmol/l blood). The blood cells may shrink at EDTA concentration of >2 mg/ml blood and
less concentration of EDTA may result in incomplete clotting of the blood.
●Thus EDTA in the correct proportion keeps the morphology of the blood cells intact and it
doesn't affect the different tests of the blood.
●But EDTA inhibits the activities of some enzymes like alkaline phosphatase, creatine
kinase, and leucine aminopeptidase enzymes and EDTA blood can not be used for
calcium and iron estimation because it binds them.
2.Citrate (Trisodium citrate) - is used for collection of blood samples for coagulation parameters
such as PT, aPTT, INR and ESR by Westergren method.
Mechanism of action - It prevents coagulation by binding ionized calcium, which is required in
clot formation. However, unlike EDTA, the binding of calcium is reversible—so calcium can be
added back to study coagulation under controlled conditions.
●3.2 - 3.8 g/dl trisodium citrate solution is used for blood collection in a ratio of 9 parts of
blood to 1 part of citrate solution for PT, aPTT and INR tests but for ESR (Westergren) 1
part of citrate solution is used for 4 parts of blood.
●It is very important that the ratio of blood to citrate solution should be accurate to get the
correct test results.
3.Heparin - It is a natural anticoagulant because it is found in our body naturally. It is used as an
anticoagulant for collecting blood samples for the estimation of pH, blood gases, electrolytes,
ionized calcium etc. It is used as lithium salt or sodium salt.
Mechanism of action - Heparin inhibits the formation of thrombin from prothrombin and thereby
inhibits blood coagulation.
●Heparinized blood can be used for several biochemical tests but it is not suitable for
peripheral blood smear, coagulation, hematological and some biochemical parameters.

24
●The lithium salt or sodium salt of heparin are used.
●Lithium salt of heparin is used for blood collection for electrolytes testing and sodium salt
is used for lithium test.
●Heparin is used at a concentration of 2 mg or 20 - 50 U per ml of blood. More than the
required amount of heparin may result in underestimation of ionized calcium because the
excess amount of heparin may bind calcium and it may also affect the blood pH and gas
parameters. Likewise, the less than the required amount of heparin may result in the
clotting of the blood sample.
4.Oxalate - The potassium and ammonium salts of oxalic acid are the most commonly used
oxalates as anticoagulants.
Mechanism of action - It forms an insoluble complex with calcium ions (precipitating the
calcium).
Normally a mixture of 2 mg potassium oxalate and 3 mg ammonium oxalate is used at a
concentration of 2 mg per ml blood.
●Potassium oxalate being the most soluble is the most commonly used oxalate at a
concentration of 2-3 mg per ml blood.
●The combination of ammonium oxalate and potassium oxalate prevents the shrinkage of
RBCs after blood collection.
●Higher concentration of oxalate may cause hemolysis and reduction of hematocrit.

5.Sodium Fluoride - is a weak anticoagulant but being an antiglycolytic, used for collection of
blood for glucose estimation. It is mixed with potassium oxalate or EDTA to make it a better
anticoagulant.
Mechanism of action - It inhibits red cell metabolism and bacterial action by inhibiting the
enzyme enolase of glycolytic pathway thereby preventing the deterioration of blood glucose.
●It is mixed with potassium oxalate (3 parts to 1 part of sodium fluoride) or with EDTA (1
part of disodium EDTA to 2 parts of sodium fluoride) to make it a better anticoagulant
and 3 mg of this mixture per ml blood is used.
●It is not good for other clinical chemistry tests.

In Hinglish

Anticoagulant vials, उनके बनाने का तरीका और उपयोग -
Diagnostic laboratories में तीन प्रकार के blood samples इस्तेमाल होते हैं - whole blood, plasma and
serum. Anticoagulants का इस्तेमाल whole blood और plasma sample collection में होता है I
Anticoagulants का इस्तेमाल blood को clot होने से रोकने और blood cells की अखंडता (integrity) को बनाए
रखने के लिए किया जाता है I विभिन्न प्रकार के प्रयुक्त anticoagulants निम्न हैं : 1.EDTA (Ethylenediaminetetraacetic acid) - का इस्तेमाल hematological parameters जैसे - cell
count, hematocrit, hemoglobin estimation और cell differential count आदि के लिए blood sample
collection में होता है I
Mechanism of action - EDTA एक chelating agent है जो calcium ions (जो blood clotting के लिए
आवश्यक होता है) को bind कर लेता है I इस प्रकार calcium ions के अभाव में blood coagulation (clotting)
रुक जाता है I
●EDTA के disodium या dipotassium या tripotassium salts का इस्तेमाल किया जाता है I

25
●Potassium EDTA (K2 or K3 ) को Sodium EDTA की अपेक्षा प्राथमिकता दी जाती है क्योंकि
Sodium EDTA पानी में कम घुलनशील है I
●Blood collection के लिए EDTA (anhydrous salt) को 1.2 to 2.0 mg/ml blood (4.1 to 6.8
mmol/l blood) के हिसाब से इस्तेमाल किया जाता है I 2 mg/ml blood concentration से अधिक
EDTA इस्तेमाल करने से blood cells सिकुड़ (shrink) सकती हैं और इससे कम EDTA होने पर blood
clotting पूरी तरह नहीं रुक पाती I ●EDTA blood का फायदा यह होता है कि यह blood cells की morphology को सुरक्षित रखता है (यदि
सही अनुपात में लिया जाए) और blood के विभिन्न जाँचों पर इसका बहुत कम प्रभाव पड़ता है I
●EDTA का नुकसान यह होता है कि यह alkaline phosphatase, creatine kinase, और leucine
aminopeptidase enzymes की activities को inhibit करता है और EDTA blood को calcium और
iron estimation के लिए इस्तेमाल नहीं कर सकते I
2.Citrate (Trisodium citrate) - का इस्तेमाल coagulation parameters जैसे - PT, aPTT, INR और ESR
(Westergren method) के लिए blood sample collection में होता है I
Mechanism of action - Citrate calcium को bind कर लेता है जिससे blood clot नहीं होता क्योंकि clotting
के लिए calcium की आवश्यकता होती है I हालांकि, EDTA के विपरीत calcium की citrate से binding
reversible होती है, इसलिये calcium को नियंत्रित स्थितियों (controlled conditions) में डाल कर
coagulation का अध्ययन कर सकते हैं I ●Blood collection के लिए 3.2 - 3.8 g/dl trisodium citrate solution के 1 भाग में 9 भाग blood mix
किया जाता है (PT, aPTT and INR के लिए) लेकिन ESR (Westergren ) के लिए citrate solution
के 1 भाग में 4 भाग blood mix करते हैं I
●Citrate और blood का अनुपात बिलकुल accurate होना चाहिए, तभी test के सही परिणाम आते हैं I
3.Heparin - यह एक natural anticoagulant है क्योंकि यह हमारे शरीर में स्वाभाविक रूप से पाया जाता है I
Heparin का anticoagulant के रूप में इस्तेमाल blood में pH, blood gases, electrolytes, and ionized
calcium आदि की जाँच के लिए होता है I
Mechanism of action - Heparin blood coagulation के लिए आवश्यक prothrombin से thrombin बनने
की प्रक्रिया को रोक देता है जिससे blood clotting नहीं होती I
●यद्यपि heparinized blood को कई biochemical tests के लिए इस्तेमाल कर सकते हैं किन्तु यह
peripheral blood smear, coagulation, hematological और कुछ biochemical parameters के
लिए उपयुक्त नहीं होता है I
●Heparin के lithium salt or sodium salt का इस्तेमाल करते हैं I
●Heparin के lithium salt का इस्तेमाल electrolytes testing में और sodium salt का इस्तेमाल
lithium test के blood collection के लिए करते हैं I
●Heparin को 2 mg or 20 - 50 U per ml of blood के हिसाब से इस्तेमाल करते हैं I ज़रुरत से अधिक
heparin होने पर ionized calcium का underestimation हो सकता है क्योंकि अधिक heparin
calcium को bind कर सकता है I अधिक heparin blood के pH और gas parameters को भी
प्रभावित कर सकता है I इसीतरह आवश्यकता से कम heparin होने पर blood clot कर सकता है I 4.Oxalate - Oxalic acid के potassium and ammonium salts को anticoagulant के रूप में इस्तेमाल
किया जाता है I
Mechanism of action - यह calcium ions के साथ एक अघुलनशील complex बनाता है और इस तरह
calcium को precipitate करके blood clotting को रोकता है I
सामान्य तौर पर 2 mg potassium oxalate और 3 mg ammonium oxalate के मिश्रण को 2 mg per ml
blood के हिसाब से इस्तेमाल करते हैं I
●Potassium oxalate के अत्यधिक घुलनशील होने के कारण इसका इस्तेमाल अधिक होता है और इसे
2-3 mg per ml blood के हिसाब से इस्तेमाल करते हैं I

26
●ammonium oxalate और potassium oxalate के mixture को इस्तेमाल करने से blood collection
के बाद RBCs में shrinkage नहीं होता I
●आवश्यकता से अधिक oxalate concentration इस्तेमाल करने से hemolysis होने और hematocrit
के कम होने का खतरा रहता है I
5.Sodium Fluoride - एक weak anticoagulant है लेकिन antiglycolytic होने के कारण इसका इस्तेमाल
blood glucose estimation के लिए blood sample लेने में किया जाता है I
Mechanism of action - यह RBCs की metabolism और bacterial action को रोकता है I ऐसा इसलिए होता
है क्योंकि fluoride glycolytic pathway के enzyme Enolase को inhibit करता है जिससे glucose का ह्रास
(deterioration) रुक जाता है I
●इसे एक बेहतर anticoagulant बनाने हेतु potassium oxalate के 3 भाग को sodium fluoride के 1
भाग या disodium EDTA के 1 भाग को sodium fluoride के 2 भाग के साथ मिश्रित करते हैं और इस
मिश्रण के 3 mg per ml blood के हिसाब से इस्तेमाल करते हैं
●Fluoride blood sample, glucose estimation के अतिरिक्त किसी और clinical chemistry test के
लिए उपयोगी नहीं होता है

5.4. QC in a biochemistry laboratory. बायोकेमिस्ट्री प्रयोगशाला में गुणवत्ता नियंत्रण I
Ans. The Quality Control (QC) is used in Biochemistry laboratories to identify the errors in the
analytical phase of the testing system and to rectify those errors before the release of patients
test reports. In other words, we can assess the reliability of the test results of any analyte by
means of checking their accuracy and precision. Thus the purpose of QC is as follows:
●To maintain the precision and accuracy of the analytical processes and to identify the
error, if any, in the analytical processes so that the error could be rectified before the
release of patients’ tests reports.
●To monitor the analytical process and find which method is more accurate by comparing
the different methods for the same analyte in terms of their accuracy.
●This also helps to evaluate the technologist’s skills.
QC material - A quality control product is a patient-like material ideally made from human
serum, urine or spinal fluid. A control product can be a liquid or freeze-dried (lyophilized)
material and is composed of one or more constituents (analytes) of known concentration.
Control products should be tested in the same manner as patient samples. The QC material
usually contains many different analytes and may be 'normal' QC (containing normal levels of
analytes) or 'abnormal' QC (containing the analytes at a concentration above or below the
normal range for the analytes). There are two types of QC materials viz. Internal QC and
External QC.
Internal QC (IQC) - is used to validate the reliability of the test system and is run daily as well as
after calibration of analytical equipment. The values and the range of different analytes present
in the IQC are already known. Good laboratory practice (GLP) requires testing normal and
abnormal controls for each test at least daily to monitor the analytical process. According to
NABL new guidelines (2019) two levels of QC shall be included at least once on the day of
performing the test irrespective of the size of the laboratory and 24 x 7 operating labs shall run
(i) Two levels of QCs once in the peak hour daily and (ii) One level every 8 hrs. (Total 3 times in
a day).

27
The assessment of the IQC data is usually done with the help of Quality Control (QC) charts
[Levey-Jennings (LJ) Charts] और Westgard Rules (Rule 1
2s, Rule 1
3s, Rule 2
2s, Rule R4s, Rule 41s,
Rule 10x̄). IQC sample is run with every batch of patients’ tests. From the results of IQC we can
find whether the daily test runs are “in control” or "out of control" and this is decided on the basis
of some criteria based on the number of QC used i.e. one, two or three QCs are used. If the QC
value is above or below the desired limit then first, we do the analysis for the root cause of this
error in QC value (root cause analysis, RCA) and on the basis of this RCA we take the
corrective and preventive action (CAPA) so that the accurate test results of patients samples
could be obtained.
External quality control (EQC) - also called Proficiency Testing (PT) and External Quality
Assessment (EQA), is supplied by an external agency or facility (such as Bio-rad, Randox and
CMC Vellore EQAS). It is used to check the laboratory's performance and improvement. The
objective of EQC assessment is to achieve between lab and between method compatibility and
to assure that the results supplied by the laboratory are correct and can be used for decisions
by the doctor ordering the tests. Specially prepared specimens are obtained periodically by
multiple laboratories participating in the proficiency testing program. These "unknown
specimens" are then tested by the participating laboratories and results are returned to the
proficiency testing program. Then, the test results reported by each laboratory are compared to
the consensus values and the laboratory is graded for accuracy on the basis of the score
obtained in the statistical assessment such as Z-score, standard deviation index (SDI),
coefficient of variation ratio (CVR) and variance index score (VIS).
Likewise, if a patient's test report looks doubtful we try to find the root cause (as we do for QC)
and then take corrective and preventive actions. For example - there are some preanalytical
factors* responsible for errors in laboratory test results and if we know the % contribution of
these factors then we can find the factor mostly responsible for the test error and we can control
it.
*Preanalytical factors - The most commonly reported types of pre-analytical error are:
●missing sample and/or test request,
●wrong or missing identification,
●contamination from infusion route,
●Tourniquet application for more than 1 minute
●haemolysed, clotted, and insufficient samples,
●inappropriate containers,
●inappropriate blood to anticoagulant ratio (collecting less or more than the required
amount of blood in vacutainer),
●Improper mixing of blood (vigorous /less number of inversions)
●inappropriate transport and storage conditions for specimens

In Hinglish

बायोकेमिस्ट्री प्रयोगशाला में गुणवत्ता नियंत्रण -
Biochemistry प्रयोगशाला में Quality Control (QC) का इस्तेमाल मरीज़ की test report को release करने से
पूर्व testing system की analytical phase में होने वाली त्रुटियों को पहचानने और उन त्रुटियों को ठीक करने हेतु

28
किया जाता है I यानि quality control द्वारा हम किसी भी analyte के जाँच परिणाम की reliability का
मूल्यांकन accuracy और precision के माध्यम से कर सकते हैं I
QC के निम्न उद्देश्य हैं -
●QC लैब में analytical process की accuracy और precision को maintain रखने और analytical
process में होने वाली error को तुरन्त जानने में मुख्य भूमिका निभाता है, ताकि patient की test
report में कोई गल्ती न होने पाये I
●QC द्वारा हम किसी analyte के दो estimation methods को compare करके यह जान सकते हैं कि
कौन सा method अधिक accurate है I
●QC द्वारा लैब तकनीशियन के कौशल (skills) का मूल्यांकन भी कर सकते हैं I
QC material - quality control product एक patient-like material होता है जो human serum, urine या
spinal fluid से बनाते हैं I एक QC product liquid या freeze-dried (lyophilized) material होता है और
इसमें एक या अधिक known concentration के constituents (analytes) हो सकते हैं I Quality control
product को वैसे ही test करना चाहिए जैसे एक patient sample को test करते हैं I QC material में
सामान्यतः कई विभिन्न analytes होते हैं और यह 'normal' QC (containing normal levels of analytes) या
'abnormal' QC (containing the analytes at a concentration above or below the normal range for
the analytes) हो सकता है I
Quality control के अंतर्गत शामिल है, Internal Quality Control (IQC) और External Quality Control
(EQC या Proficiency Testing, PT) का कार्यान्वयन I
Internal quality control (IQC) - का इस्तेमाल test system की reliability को validate करने के लिए होता है
और यह प्रतिदिन test किया जाता है और analytical equipment के calibration के बाद भी I इनमें उपस्थित
विभिन्न analytes के results और उनकी range हमें ज्ञात होते हैं I Good laboratory practice (GLP) के
अंतर्गत analytical process की निगरानी हेतु प्रत्येक test के साथ प्रतिदिन एक normal और एक abnormal
control की आवश्यकता होती है I NABL की नई guidelines (2019) के अनुसार Two levels of QC shall be
included at least once on the day of performing the test irrespective of the size of the laboratory
and 24 x 7 operating labs shall run (i) Two levels of QCs once in the peak hour daily and (ii) One
level every 8 hrs. (Total 3 times in a day).
IQC data का मूल्यांकन आमतौर पर Quality Control (QC) charts [Levey-Jennings (LJ) Charts] और
Westgard Rules (Rule 1
2s, Rule 1
3s, Rule 2
2s, Rule R4s, Rule 41s, Rule 10x̄) की सहायता से किया जाता
है I IQC sample मरीज़ के tests के प्रत्येक set के साथ test किया जाता है और उसके परिणाम द्वारा यह पता
लगा सकते हैं कि रोज़ किये गये tests नियंत्रण में (“in control”) हैं या नहीं ("out of control") और यह तय
करने के कुछ criteria हैं जो इसपर आधारित हैं कि एक, दो या तीन QC का इस्तेमाल हुआ है I यदि QC की
value desired limit के ऊपर या नीचे होती है तो सर्वप्रथम हम इस error के मूल कारण का विश्लेषण करते हैं
(root cause analysis, RCA) और फिर उसके आधार पर corrective और preventive action (CAPA) लेते हैं
l
External quality control (EQC) - इसे Proficiency Testing (PT) और External Quality Assessment
(EQA) के नाम से भी जाना जाता है I इसके उपयोग हेतु laboratory को किसी external quality assessment
scheme (EQAS) (जैसे - Bio-rad, Randox and CMC Vellore EQAS) में भाग लेना होता है जिसके द्वारा
लैब की योग्यता या क्षमता की परख होती है I इसका इस्तेमाल लैब की performance और improvement को
check करने हेतु किया जाता है I EQC मूल्यांकन (assessment) का ध्येय (objective) विभिन्न labs के बीच
और विभिन्न methods के बीच अनुकूलता (compatibility) प्राप्त करने और यह भरोसा दिलाने हेतु कि लैब
द्वारा दी गई reports सही हैं और जाँच करवाने वाले डॉक्टर द्वारा मरीज़ की बीमारी सम्बंधित निर्णय लेने हेतु
इस्तेमाल की जा सकती हैं I विशेषतौर पर बनाए गए ये specimens proficiency testing programme में भाग
लेने वाली कई labs द्वारा समय - समय पर प्राप्त किये जाते हैं I ये "unknown specimens" participating
laboratories द्वारा test किये जाते हैं और उनके results proficiency testing program को भेज दिए जाते हैं I

29
फिर प्रत्येक लैब द्वारा भेजे गए results consensus value से compare किये जाते हैं और इनका सांख्यिकीय
मूल्यांकन (statistical assessment) Z-score, standard deviation index (SDI), coefficient of variation
ratio (CVR) और variance index score (VIS) के आधार पर किया जाता है और इस score के आधार पर लैब
को उसकी accuracy के लिए grade किया जाता है I इसी प्रकार यदि किसी patient की report संदिग्ध या गलत हो जाती है तो हम इसके मूल कारण (root cause)
को ढूंढ़ते हैं, और उसको सुधारते हैं (corrective action) और फिर उस कारण की संभावित वजहों का मूल्यांकन
करके preventive action लेते हैं ताकि भविष्य में वो गलती न हो I जैसे - बहुत से preanalytical factors* होते
हैं और यदि हमें प्रत्येक factor का % contribution मालूम हो तो यह पता लग जायेगा कि सबसे अधिक कौन
factor test errors के लिए ज़िम्मेदार है और तब हम उस फैक्टर को control कर सकते हैं I

*Preanalytical factors - Preanalytical errors के मुख्य कारक निम्न हैं :
●missing sample and/or test request,
●wrong or missing identification,
●contamination from infusion route,
●Tourniquet application for more than 1 minute
●haemolysed, clotted, and insufficient samples,
●inappropriate containers,
●inappropriate blood to anticoagulant ratio (collecting less or more than the required
amount of blood in vacutainer),
●Improper mixing of blood (vigorous /less number of inversions)
●inappropriate transport and storage conditions for specimens

Disclaimer : The pictures given in the text have been downloaded from Google images and I
am thankful to the persons who have uploaded these pictures.
Dr. P. K. Nigam
Ph. D.
Retired Biochemist

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