Western blot

1. Western Blot Wendy Espinel Morales Diego Fernando Cadena Enmanuel Ortiz Jiménez

2. Western Blot Es una técnica que se utiliza para identificar y localizar proteínas con base en su capacidad para unirse a anticuerpos específicos.

3. Western blot y HIV Básicamente se basa en la separación de las proteínas obtenidas de HIV-1 procedentes del lisado del cultivo del virus y purificadas por centrifugación.

4. Proteína Obtenida Se coloca Gel de poliacrilamida En forma Laminas delgadas Se efectúa ELECTROFORESIS Donde

5. Proteínas de menor peso (p17, p24) Proteínas de mayor peso Migran mas lejos Se mantienen cerca al lugar de deposito

6. Después de transferirlo a una tira de nitrocelulosa y haber pasado por unos procesos de incubación revelara una banda coloreada en las zonas correspondientes a los Ac específicos.

7. Esta prueba generalmente se considera una prueba sensible para las proteínas del core y algo menos para las de envoltura.

8. Localización Función VIH-2 Envoltura Unión Fusión gp 105 Core Proteína mayor Proteína terminal p24 p17 Polimerasa Transcriptasa inversa Integrasa Ribonucleasa Proteasa p 68/53 p 34 p 11 Proteínas del VIH2

9. Tipos de resultados Positivo Negativo Indeterminado

10. Positivo Requiere al menos de dos bandas de envoltura, que se considera la más específica.

11. Negativo Se obtiene por la ausencia de bandas.

12. Indeterminado Aparece algunas bandas pero no para considerarse como positivo.

13. Causas de WB indeterminado Reactividad inespecífica Infección por HIV-2 u otros retrovirus Seroconversión al vih-1 Hijo de madre seropositiva Divergencias genéticas de la cepa del HIV-1

14. Criterios de OMS para resultados Presencia aislada de p17 se suele considerar como negativa y no requiere seguimiento ulterior

15. Criterios de OMS para resultados 2. Presencia de una sola banda de la envoltura es un patrón infrecuente, que puede observarse en la seroconversión y en la infección por hiv-2

16. Criterios de OMS para resultados 3. Patrones gag/ pol sin env pueden deberse también a una seroconversión (resultado indeterminado)

17. Desventajas Principal desventaja es el elevado precio, que lo hace inviable como prueba de confirmación en algunos países. La variabilidad reaccional que existe en las bandas según el tipo de ensayo, el tipo de las muestras, las condiciones técnicas y la subjetividad de la interpretación de la intensidad de las bandas, que siempre depende del observador.

18. Otras aplicaciones Detección de mutaciones puntuales: como delecciones, inversiones cromosómicas, entre otras. Diagnostico Prenatal: como enfermedades genéticas de una forma temprana Diagnostico de infecciones por virus, bacterias y parásitos. Oncogenes

19. Bibliografía http://www.bio-rad.com/prd/en/US/CDG/PDP/527f0b18-e467-493a-b82a-874027ba390e/GS%20HIV-1%20Western%20Blot http://www.ctv.es/USERS/fpardo/vih4.htm