Agar hierro kligler

Información general acerca del Agar Hierro Kligler utilizado en la identificación de enterobacterias

1. Agar Hierro Kligler Equipo 7. Martínez de León Víctor Romero Monroy Luis Angel

2. Fundamento Es un medio de cultivo utilizado para la diferenciación de enterobacterias en base a la fermentación de lactosa y glucosa, además de la formación de ácido sulfhídrico. El medio se solidifica en forma inclinada permitiendo tener dos cámaras de crecimiento: una aeróbica, el pico de flauta y la otra anaeróbica, el fondo del tubo. La fermentación de azúcares acidifica el medio lo cual se observa con el vire del rojo de fenol a amarillo que es el indicador ácido-base incorporado. En caso de no haber fermentación, el medio vira a rojo.

3. Fermentación de carbohidratos La fermentación de glucosa cambia el medio a amarillo, pero debido a su baja concentración (0.1%) esto sólo se observa en el fondo del tubo, mientras que la superficie cambia a rojo. Una vez consumida la glucosa, el microorganismo comienza a metabolizar aminoácidos liberando amoníaco, lo cual alcaliniza el medio, esto ocurre en la superficie. La fermentación de lactosa cambia el medio a amarillo y dado que su concentración es mayor (1%), la formación de ácido es suficiente para mantener el color amarillo tanto en el fondo como en la superficie del tubo.

4. Tipos de reacciones producidas por bacterias que crecen en agar hierro de kligler : Sin fermentación de carbohidratos. Fermentación de glucosa Fermentación de lactosa Koneman , E. [Et al].2008. Koneman diagnógstico microbiológico . 6° edición. Buenos Aires; Médica Panaméricana . Página 209

5. Formación de gas La formación de gas se observa por la presencia de burbujas, fracturas o desplazamiento del agar. La producción de sulfuro de hidrógeno se debe a la utilización del tiosulfato de sodio. El sulfuro de hidrógeno reacciona con el citrato férrico de amonio formando sulfuro de hierro que se observan como un precipitado negro.

6. Modo de empleo La siembra se realiza por picadura en el agar y estría en la superficie inclinada. Se incuban de 18 a 24 horas a 37 °C en condiciones aerobias

7. Composición Mezcla de Peptonas……………………………….20.0 g Cloruro de Sodio…………………………………….5.0 g Lactosa……………………………………………...10.0 g Glucosa..……………………………………………..1.0 g Tiosulfato de Sodio …………………………………0.5 g Citrato férrico de amonio...…..……………………..0.5 g Rojo de Fenol………………………………………..0.025 g Agar Bacteriológico……………………………..….15.0 g pH 7.4 ± 0.2

8. Resultados Superficie roja (alcalina), fondo rojo (alcalino): El microorganismo no fermenta ningún carbohidrato; glucosa (-), lactosa (-) Superficie roja (alcalina), fondo amarillo (ácido): El microorganismo solamente fermenta glucosa; g lucosa (+), lactosa (-) Superficie amarilla (ácida), fondo amarillo (ácido) El microorganismo fermenta glucosa y lactosa; Glucosa (+), lactosa (+)

9. La presencia de burbujas o ruptura del agar indica que el microorganismo produce gas; gas (+) La aparición de un precipitado negro indica que el microorganismo produce sulfuro de hidrógeno; (+)  

10. Resultados con cepas control Manual Básico de Microbiología cultimed . Panreac Química S.A. España 2002 página 110

11. http://eltecnicodelaboratorio.blogspot.mx/2010/05/agar-hierro-kliger.html

12. Consideraciones Los tubos deben interpretarse en un periodo de 18-24 horas de incubación. Hacerlo antes provocaría tener un falso positivo en la fermentación de glucosa y confundirla con lactosa por ejemplo. Observarlo después también arrojaría falsos resultados para la fermentación de lactosa, en este caso podría asumirse que no fermenta carbohidratos. La formación de se realiza en condiciones ácidas, por lo tanto si hay un oscurecimiento por la presencia de FeS de forma que la acidez del fondo queda enmascarada, debe registrarse como ácido, es decir, hubo fermentación.  

13. Referencias Koneman , E. [Et al].2008. Koneman diagnógstico microbiológico . 6° edición. Buenos Aires; Médica Panaméricana MacFaddin . 2003. Pruebas bioquímicas para la identifiación de bacterias de importancia clínica . 3° edición. Buenos Aires; Médica Panaméricana Manual Básico de Microbiología C ultimed . Panreac Química S.A. España 2002 http :// www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/kliglerhierroagar.htm

14. http:// eltecnicodelaboratorio.blogspot.mx/2010/05/agar-hierro-kliger.html http :// www.bd.com/europe/regulatory/Assets/IFU/US/L007458%2807%29%280207%29_ES.pdf http://perso.wanadoo.es/microdominguez/a.htm http://www.mcd.com.mx/pdfs/agar_hierro_kliger.pdf