<< FROTIS-CULTIVO Y PCR >>

Definición, función y para que esta indicado.
Espero y les sirva.
Gracias-Thanks-Mercy-Arigato

1. - FROTIS - CULTIVO DE LA SECRECIÓN VAGINAL - PCR U NIVERSIDAD I NTERCULTURAL DE C HIAPAS AUTOR: LEYVERS V. RAMÍREZ [ESTUDIANTE DE MEDICINA]

2. FROTIS Y CULTIVO DE LA SECRECIÓN VAGINAL Permite el Dx de infecciones vaginales o cervicales, determinar el microorganismo causante y la sensibilidad de éste a antibióticos concretos.

3. La secreción vaginal normal está compuesta por secreciones vulvares de las glándulas sebáceas, sudoríparas, de bartolino y de skene , transudado de la pared vaginal , células exfoliadas de la vagina y del cuello, moco cervical, líquido endometrial y de las trompas , y microorganismos de flora normal con sus productos metabólicos. Se utiliza para la identificación de patógenos: gardnerella , trichomonas y candida albicans .

4. 3 SITUACIONES IMPORTANTES Saber cuándo se altera el equilibrio de esta flora colonizante. Búsqueda de agentes exógenos, transmitidos normalmente por vía sexual. Detección de portadoras de determinados microorganismos.

5. TOMA DE MUESTRA Prepararse para el examen vaginal. Evitar relaciones sexuale ( 24-48 horas). No utilice ningún medicamento ni ducha vaginal antes del examen (las duchas siempre se deben evitar debido al riesgo de infecciones uterinas o tubáricas). Vacíe su vejiga (también es preferible un intestino vacío). Coloque los pies en los estribos de la mesa de exploración. Cubra la parte inferior del cuerpo con el ropaje o sábana suministrada. EXPLICAR TODO PROCEDIMIENTO QUE SE LE REALICE A LA PACIENTE.

6. Previa colocación del especulo: se toma una muestra del fondo del saco posterior con un aplicador estéril. La secreción se descarga en un tubo que contiene 1 o 2ml o 0.5 ml de solución salina, y se traslada al laboratorio y se centrifuga. Se deposita una gota en el cubre y porta objetos para observar el microscopio. Se puede preparar una gota con una gota de KOH 10 % ( o wiff ) y se cubre con un cubre objeto para la identificación de la levadura.

7. Anatomía

8. 90 °

9. RESULTADOS DEL CULTIVO Microscopio. Examen en medios de cultivo. Examinar todos los medios a las 18-24 horas. Si no crecimiento de patógenos , incubar hasta las 48 h.

10. IDENTIFICACIÓN Y PRUEBAS DE SENSIBILIDAD DE LOS MICROORGANISMOS

11. OTRAS AFECCIONES BAJO LAS CUALES SE PUEDE REALIZAR ESTE EXAMEN: URETRITIS CRÓNICA. EIP

12. TIPOS DE ESTUDIOS MICROBIOLÓGICOS: Cultivo bacteriano. Cultivo de levaduras. Cultivo de trichomonas . Despistaje de Streptococcus agalactiae . Cultivo de virus herpes simple (puesto que requiere toma de muestra y medio detransporte y cultivos especiales solo se hará por petición expresa del médico.

13. RIESGOS Y CONTRAINDICACIONES: A lo sumo puede  causarle una ligera molestia la introducción del espéculo  en la vagina, y puede experimentar un leve dolor en el momento en que el médico toca el cuello del útero con los instrumentos que utiliza para recoger la muestra. En mujeres embarazadas. En mujeres vírgenes que no acepten la colocación del espéculo vaginal o en niñas, se realizará a ciegas mediante la introducción de un escobillón por el orificio vaginal.

14. PCR REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA

15. Algunas veces llamada "fotocopiado molecular", la reacción en cadena de la polimerasa (RCP) es una técnica rápida y económica utilizada para "amplificar" - copiar - pequeños segmentos de ADN. Debido a que se necesitan considerables cantidades de una muestra de ADN para análisis moleculares y genéticos, los estudios de segmentos aislados de ADN son casi imposibles sin la amplificación por RCP. A menudo proclamada como uno de los avances científicos más importantes en la biología molecular , la RCP revolucionó el estudio del ADN. CREADOR , KARY B. MULLIS, FUE OTORGADO EL PREMIO NOBEL DE QUÍMICA EN 1993.

16. PCR Esta técnica ha tenido tanta influencia en el desarrollo de la biología y, por consiguiente, en la medicina, como el descubrimiento de la estructura de doble hélice del material genético (ADN). El hecho de poder amplificar mínimas cantidades de ADN de manera específica ha propiciado su aplicación en la detección de microorganismos difíciles de cultivar, infecciones virales recientes, polimorfismos que causan enfermedades y marcadores de cáncer , entre otras muchas aplicaciones.

17. NOCIONES BÁSICAS SOBRE EL ADN La PCR aprovecha ciertas propiedades fundamentales del ADN. El ADN (lo mismo que el ARN) es un ácido nucleico, y los ácidos nucleicos se componen de «bloques constituyentes» llamados nucleótidos. El ADN existe como dos hebras complementarias en forma de doble hélice (dos espirales entrelazadas). Cada una de estas hebras está hecha de muchos nucleótidos conectados uno al siguiente para formar una larga cadena de ADN. La molécula de nucleótido tiene tres partes diferentes: el fosfato y el azúcar, que forman la columna vertebral o estructura en forma de cinta o hebra en la imagen, y la base.

18. Las bases de una hebra se unen a las bases de la otra hebra, y esto da al ADN su estructura estable de doble hélice. (Véanse las dos hebras como las dos cintas de unas zapatillas nórdicas que se enroscan a lo largo de la pierna). La naturaleza diferente del código del ADN de un organismo depende del orden o secuencia de las bases a lo largo de la cadena de ADN. Hay cuatro tipos diferentes de bases: A, T, C y G (Adenina, Timina, Citosina y Guanina). Estas bases están enganchadas a las columnas respectivas, cada una enrollada generándose la conocida forma de doble hélice.

19. FUNCIÓN DE LA PCR El VIH, como otros retrovirus, contiene ARN pero no contiene ADN. Cuando el VIH está infectando una célula, el enzima transcriptasa inversa de este VIH transforma su ARN en ADN-complementario , el cual es entonces insertado en el ADN del huésped. Si se usa la PCR para analizar tejido humano en busca del VIH, se estaría buscando un corto segmento de toda la hebra de ADN celular. Este corto segmento representa el material genético del VIH que ha sido incorporado al ADN de la célula. La PCR sólo busca una parte de todo el paquete genético, o genoma, del VIH, y no todo el virus).

20. PRIMER PASO:  DESNATURALIZACIÓN: este tiempo puede variar entre ½  minuto y 2 minutos).

21. SEGUNDO PASO:   ALINEAMIENTO. dependiendo de diversos parámetros como la secuencia de los  primers , su especificidad,...). La duración de este paso puede oscilar entre ½ minuto y 2 minutos.

22. TERCER PASO:   EXTENSIÓN. Se vuelve a aumentar la temperatura hasta los 72 °C y se deja actuar a la Taq polimerasa durante 1 ó 2 minutos. La repetición de este ciclo unas 40 veces, por ejemplo, permite obtener, como resultado de un experimento de amplificación, millones de copias del fragmento de interés. - Se realiza de forma automatizada. Los tubos de reacción se introducen en un termociclador que de forma automática. 

23. NUEVAS INDICACIONES Tiene un amplio espectro de aplicación en el diagnóstico . En el campo de la microbiología, la PCR está llamada a sustituir completamente a gran cantidad de los métodos actuales de detección de agentes patógenos. También facilita tener resultados fiables en un intervalo de tiempo corto -horas-.

24. DETECTA: Cabe destacar que la sensibilidad de esta técnica es mil veces mayor que la que tiene un cultivo. Otras aplicaciones interesantes , y cada vez más extendidas, son la determinación de la resistencia a antibióticos de bacterias aisladas de pacientes y la detección de parásitos tales como  Toxoplasma, Trypanosoma y Cryptosporidium .

25. En el diagnóstico del cáncer la aplicación de la PCR ha sido esencial para determinar la presencia de marcadores específicos del desarrollo de esta enfermedad, así como la aparición de polimorfismos que inducen eventos oncológicos. Un ejemplo claro lo constituyen los niveles de expresión de factores como HER-2 y la topo IIa , genes importantes en el desarrollo del cáncer de mama , fácilmente detectables por PCR en tiempo real.

26. DESVENTAJAS 1. La precisión de la PCR nunca ha sido verificada con un patrón-oro apropiado. 2. La especificidad de la PCR jamás ha sido determinada . 3. Los iniciadores de la PCR no son específicos . 4. La PCR sólo detecta un pequeño fragmento del virus entero . 5. Hallar «ARN del VIH» con la PCR no significa que esté presente el VIH . 6. Un virus fuera de la célula no es un virus infeccioso . 7. La PCR no está estandarizada ni es reproducible . 10. La PCR es usada de forma indebida para «detectar» y cuantificar virus imaginarios .

27. ¿ PREGUNTAS ?

28. BIBLIOGRAFÍA GUÍA PARA LA PCR 1 .  (POLIMERASA CHAIN REACTION: REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA) .  CÓMO ACTÚA LA PCR Y PORQUÉ NO PUEDE SER UTILIZADA COMO PRUEBA DE INFECCIÓN POR VIH NI PARA MEDIR CARGA VIRAL ALGUNA .  POR CHRISTINE JOHNSON 2 . HTTP://WWW.UGR.ES/~MGARRIDO/PCR.HTM HTTP://WWW.EMPIREO.ES/PCR/