ANTIBIOGRAMA, PRUEBA DE DIFUSION BAVER KIRBY

PRUEBA DE SUCEPTIBILIDAD POR DIFUSION BAVER KIRBY

1. Prueba de susceptibilidad por difusión baver kirby

2. Principio del   antibiograma   El método se basa en el uso de una cantidad constante del antimicrobiana impregnado en un reservorio de papel filtro , el cual al ser aplicado sobre la superficie del agar en el que se ha sembrado el microorganismo en cuestión. Formara por difusión un gradiente de concentración del antimicrobiano, cuya sensibilidad se indicara por el tamaño del halo de inhibicion de crecimiento alrededor del disco .

3. Aplicaciones : Util para bacterias de rápido desarrollo como enterobacterias . Algunas Pseudomonas , Acinetobacter spp . Staphylococcus spp . Enterococcus , Vibrio cholerae . Puede usarse también para bacterias de crecimiento fastidioso como los Streptococcus spp , Haemophylus spp , y Neisseria spp . La lectura e interpretación sebe realizarse bajo normas de Clsi Todo prodecimiento se realizara seguiiendo normas de garantía de calidad.

4. REGLAS DE ORO PARA REALIZAR LAS PRUEBAS DE SENSIBLIDAD´POR DIFUSION Trabajar con aislados bacteriológicamente identificados Operar con microorganismos aerobicos y anaerobios facultativos que exhiben desarrollo rápido en Agar Mueller Hinton . En casos especiales como Hemophylus spp . Neisseria gonorrhoeae, Streptococcus pneumoniae , estreptococcus grupo viridans y betahemolityccus se procede mediante norma de la ClSI . El antibiograma se debe realizarse a microorganismo que se encuentran en la fase logarítmica de crecimiento.

5. PRUEBA DE DIFUSION EN AGAR BAVER -KIRBY PREPARACION DEL INOCULO ESTANDARIZACION DEL INOCULO INOCULACION EN PLACAS DE AGAR APLICACIÓN DE DISCOS DE ANTIBIOTICOS INCUBACION DE LAS PLACAS DE AGAR MEDICION DE HALOS DE INHIBICION INTERPRETACION DE RESULTADOS SEGÚN LAS NORMAS DE CLSI

6. PASOS PARA REALIZAR UN ANTIBIOGRAMA SELECCIONAR LAS COLONIAS Suspensión del inóculo Lectura del inóculo

7. PLACAS Y DISCOS A TEMPERATURA AMBIENTE Retire el contenedor de discos del congelador o refrigerador. Antes de abrir el contenedor, permita que los discos se equilibren a la temperatura ambiente durante una a dos horas para minimizar la condensación y reducir la posibilidad de que la humedad afecte la concentración de los agentes antimicrobianos Permita que la placa de Agar Mueller-Hinton (MHA) se caliente a la temperatura ambiente para que cualquier exceso de humedad se absorba dentro del medio .

8. INOCULACIÓN DE PLACA Empezando en la parte superior de la placa MHA inocule la superficie con el hisopo. Cubra toda la placa frotando de ida y vuelta de un borde al otro. Rote la placa.Removiendo el exceso de líquido del hisopo aproximadamente 60º y repita el procedimiento de frotado. Rote otra vez la placa 60º y frote toda la placa por tercera vez. Esto garantizará que el inóculo sea distribuido homogéneamente. Sugerencia técnica: Incube la placa dentro de los 15 minutos siguientes después de haber estandarizado el inóculo .

9. Colocación de discos en el antibiograma Coloque los discos con los agentes antimicrobianos dentro de los 15 minutos siguientes a la inoculación de la placa MHA (Ver figura 9). Los discos pueden ser colocados uno a uno o con un dispensador de discos multi -canal Presione cada disco firmemente para asegurar el contacto completo con la superficie de agar. No se olvide de este paso o los discos pueden terminar en la tapa de la placa después de la incubación .

10. INCUBACIÓN DE PLACA Para la incubación de la placa se tiene que invertir las placas. Para las bacterias no fastidiosas, incube (en aire ambiente) a 35°C por 16 a 18 horas. Para la prueba de difusión por disco de bacterias fastidiosas, use las condiciones de incubación recomendadas por el NCCLS, como se muestra en el cuadro : Bacteria Medio Tiempo (h) Atmósfera Haemophilus spp. Neisseria gonorrhoeae Streptococcus pneumoniae Otros Streptococcus spp Medio de Prueba para Haemophilus Agar base GC _ 1% suspensión MHA-5% sangre de cordero MHA-5% sangre de cordero 16–18 20-24 20–24 20–24 CO 2 (5%) CO 2 (5%) CO 2 (5%) CO 2 (5%)

11. MEDIDA DE ZONAS DE INHIBICION Antes de realizar las lecturas de zonas de inhibición debemos verificar: Que el crecimiento sea confluente(uniforme) de no ser asi repetir la prueba. Medir el área que muestre inhibición a ojo desnudo. Las zonas de inhibición deber ser uniformes y circulares. Medir con regla o calibro sosteniendo la caja pretri en forma invertida, sobre un fondo oscuro y con luz reflejada. cualquier deformación producidas por los halos, deberá estudiarse, para detectar mecanismo de resistencia que estuviera exhibiéndose, para inferir la Resistencia o Sensibilidad a determinados antimicrobianos.. Para la lectura de Mueller Hinton con sangre de cordero, quitar la tapa. Medir la zona de inhibicion ;, no la hemolisis. Usar la luz trasmitida para ver ligero crecimiento dentro del halo de oxacilina y vancomicina en cepas de staaphylococcus y Enterococus . Colonias mayores en área de de inhibicion deberán ser subcultivadas y reidentificadas . Algunos microorganismo muestran un leve crecimiento dentro de la zona de inhibicion de cotrimozaxol,trimetropina y otras sulfoaminas (doble hablo),leer el halo externo no el interno. El proteus mirabilis ignorar el “ swarming ” o invasión de la zona de inhibicion .

12. Interpretación de Resultados Utilizar las tablas de la CLSI , cada grupo de microorganismo . Tiene una tabla especifica . Que va desde la tabla 2A a 21. ESTAS TABLAS SE ACTUALIZAN UNA VEZ´POR AÑO. PARA LA INTERPRETACION EXISTEN TRES CATEGORIAS: Sensible Intermedio Resistente

13. Staphylococcus aureus Primera placa: Erytromicina Clindamicina Cefoxitin Penicilina Linezolid Rifanpicina Segunda placa: Ciprofloxacina Levofloxacina Tetraciclina Cloranfenicol Gentamicina trimetropinsulfa PENICILINASA MRSA MLSB COSNTITUTIVO INDUCIVO EFLUJO

14. ENTEROBACTERIAS tercera placa: Ciprofloxacina Tetraciclinas Cloranfenicol Trimetropin sulfa levofloxacina Orina Norfloxacina Ac, nalidixico Nitrofurantoina Streptomicina fosfomicina Primera placa: . Cefotaxima . Amoxilina + ac , clavulanico . ceftazidima Ampililina Cefazolina Gentamicina Amikacina Segunda placa: Imipenem Meropenem Amp+sulbantam Cefoxitin Piper+tazobactam BLEA bajo nivel y alto nivel Bacteria productora de BLEE AMP-C PLASMIDICA KPC

15. Pseudomonas aeruginosa Primera placa: Ceftazidima Amox+Ac , clavulanico Cefepime Amikacina Gentamicina Piperacilina Piper+tazobactam Segunda placa: Imipenem Meropenem Tobramicina Aztreonan Ciprofloxacina Levofloxacina

16. ACINETOBACTER SPP Primera placa: Ceftazidima Amox+Ac , clavulanico Cefepime Amikacina Gentamicina Piperacilina Piper+tazobactam Segunda placa: Imipenem Meropenem Tobramicina Ciprofloxacina Levofloxacina Segunda placa: Minociclina Trimetropin sulfa Amp+sulbactam

17. CIM COLISTIN TEST DE HODGE Modificado prueba fenotípica para la de detección de Carbapenemasa

18. Pseudomonas aeruginosa Resistente a Carbapenem

19. BACT/ALERT®   El equipo  automatizado  para procesar  hemocultivos  es de gran ayuda para un laboratorio de bacteriología pues reduce el tiempo de detección de  hemocultivos  positivos debido al monitoreo continuo, que permite detectar el crecimiento bacteriano en término de horas  

20. VITEK 2 VITEK® 2 Compact es un sistema completamente automatizado que garantiza  excelencia en la identificación microbiana de rutina .

21. SISTEMA DE PCR MULTIPLE FILM- ARRAY  El  sistema FilmArray ™ permite la prueba simultánea de bacterias, virus, levaduras, parásitos y / o genes resistentes a los antimicrobianos. El sistema  FilmArray ™ es un Sistema PCR multiplex certificado  FDA, CE-IVD, y TGA que integra la preparación de muestras, amplificación, detección y análisis. Simple:  2 minutos de mano de obra. Fácil:  No se requeire medición precisa ni pipeteo. Rápido:  El tiempo de espera de alrededor de una hora.  

22. Panel Gastrointestinal : 22 CEPAS Campylobacter  ( C. jejuni / C. coli / C. upsaliensis ) Clostridium difficile   toxina A/B Plesiomonas shigelloides Salmonella Vibrio  ( V. parahaemolyticus / V. vulnificus / V. cholerae ), incluida la identificación específica de  Vibrio cholerae Yersinia enterocolitica Escherichia coli   enteroagregativa (EAEC) Escherichia coli   enteropatógena (EPEC) Escherichia coli   enterotoxigénica (STEC  lt / st ) Escherichia coli   productora de toxina tipo Shiga (STEC  stx1/stx2 ), incluida la identificación específica del serogrupo O157 Shigella / Escherichia coli   enteroinvasiva (EIEC) Cryptosporidium Cyclospora cayetanensis Entamoeba histolytica Giardia lamblia   Adenovirus F 40/41 Astrovirus Norovirus GI/GII Rotavirus A Sapovirus GI/GII/GIV/GV

23. Panel molecular multiplex (PCR-RT) para detección infecciones respiratorias agudas  de origen viral. Consta de 16  tipos de virus, incluyendo Coronavirus COVID-19 : SARS COV-2 (Coronavirus COVID-19) Coronavirus OC43 Coronavirus 229E Coronavirus NL63 Metapneumovirus Adenovirus Parainfluenza 1 Parainfluenza   Parainfluenza 3 Parainfluenza 4 Rinovirus humano A,B y C Virus sincitial respiratorio A/B Bocavirus humano 1,2,3,4 Enterovirus Influenza A Influenza B

24. Este examen es para el diagnóstico etiológico rápido y simultáneo de infecciones del sistema nervioso central que se presentan con síntomas y signos de meningitis y/o encefalitis. Cytomegalovirus Enterovirus Herpes simplex virus 1 Herpes simplex virus 2 Human herpesvirus 6 Human parechovirus Varicella zoster virus HONGOS: Cryptococcus neoformans / gattii

25. El  Panel de Identificación de Hemocultivo (BCID) de FilmArray ®  permite una detección automatizada, rápida y precisa de patógenos y genes resistentes a antibióticos asociados con infecciones del torrente sanguíneo Acinetobacter baumannii Haemophilus influenzae Neisseria meningitidis Pseudomonas aeruginosa Enterobacteriaceae Complejo Enterobacter cloacae Escherichia coli Klebsiella oxytoca Klebsiella pneumoniae Proteus Serratia marcescens Enterococcus Listeria monocytogenes Staphylococcus Staphylococcus aureus Streptococcus Streptococcus agalactiae Streptococcus pyogenes Streptococcus pneumoniae

26. Levaduras Candida albicans Candida glabrata Candida krusei Candida parapsilosis Candida tropicalis Genes de resistencia antibiótica mecA - resistencia a Meticilina vanA /B - resistencia a Vancomicina KPC - resistencia a carbapenems

27. MUCHAS GRACIAS