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Articulo Cientifico de Tomografía de coherencia óptica

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ABIERTO
Investigación del cambio post mortem en
el epitelio corneal humano mediante
citología de impresión
Ting Deng1, Kaori Shintani-Ishida1-, Hidetoshi Tanioka2, Chie Sotozono2y Hiroshi Ikegaya1
El epitelio corneal, que consta de capas superficiales, intermedias y basales, demuestra desprendimiento capa por capa
con la prolongación del intervalo post mortem (PMI). Este estudio tuvo como objetivo evaluar los cambios post mortem
en el epitelio corneal mediante citología de impresión. Se obtuvieron muestras de 134 casos de TC post mortem y/o
autopsia, que se dividieron en 6 grupos por PMI (6 h–14 días). Las células recolectadas de la superficie corneal utilizando
filtros de membrana se tiñeron doblemente con anticuerpos contra ZO-1 (que se expresa en células superficiales) y
ocludina (que se expresa en células superficiales o intermedias) para identificarlas. Con la prolongación del PMI, el
porcentaje de células ZO-1 (+)/ocludina (+) disminuyó, mientras que el de células ZO-1 (−)/ocludina (−) aumentó, lo que
demuestra el desprendimiento del epitelio corneal. Mientras tanto, las células ZO-1 (−)/ocludina (+) mostraron
inicialmente un aumento porcentual hasta las 48 h y posteriormente se volvieron indetectables, lo que sugiere una
disminución de la tinción. La edad, el sexo y las condiciones de humedad no tuvieron un efecto significativo en el número
de células ZO-1 (+)/ocludina (+) ni ZO-1 (−)/ocludina (−). Los efectos de la temperatura ambiente y de si los párpados
estaban abiertos o cerrados siguen sin estar claros debido a la falta de datos. Una citología de impresión simple y no
invasiva podría ser aplicable para el diagnóstico en la práctica forense.
Palabras claveEpitelio corneal, Intervalo post mortem, Citología de impresión, Uniones estrechas, ZO-1, Ocludina
En el campo de la medicina forense, la estimación del intervalo post mortem (IPM) es crucial. Los cambios post mortem en el
cuerpo, como la temperatura corporal, el rigor mortis, la lividez y la opacidad corneal, son útiles para estimar el IPM hasta
aproximadamente 72 h post mortem.1Sin embargo, la temperatura corporal, el rigor mortis y la lividez se ven fuertemente
influenciados por factores externos. La determinación de la opacidad corneal a simple vista es subjetiva. Por lo tanto, merece la
pena explorar más a fondo criterios de evaluación objetivos que no se vean significativamente influenciados por el entorno
externo.
Dado que el globo ocular está protegido por la cavidad orbitaria y el párpado cerrado, los cambios post mortem en el globo
ocular no se ven significativamente influenciados por el entorno externo. En los últimos años, se han realizado cada vez más
estudios sobre la correlación entre el IPM y los cambios post mortem en el globo ocular, en particular en la opacidad corneal.2,
espesor corneal3, iris y pupila4, lente5, retina6, presión intraocular7, temperatura ocular8,9y concentraciones de electrolitos vítreos6
Sin embargo, estos exámenes requieren procedimientos invasivos o instrumentos costosos. Para abordar este problema, se
necesita urgentemente el desarrollo de métodos más convenientes y no invasivos.
Las células epiteliales corneales se dividen en tres capas, de anterior a posterior: superficial, intermedia y basal. Un
estudio previo sobre el tiempo máximo post mortem para la extracción de córneas de donantes indicó que las células
epiteliales se desprenden capa por capa con la prolongación del PMI.10,11La observación de cambios post mortem en las
capas epiteliales puede ser útil para la estimación del IPM en medicina forense. Sin embargo, en la práctica forense, dado
que la córnea de un cadáver no puede recolectarse antes de la autopsia, el examen histológico de secciones de tejido
corneal no es factible.
En oftalmología, la citología de impresión se emplea principalmente en la detección del ojo seco, la
queratoconjuntivitis y en la detección no invasiva de tumores de la superficie ocular.12Este método fue desarrollado por
Egbert en 1977.13Consiste en la recolección de células epiteliales mediante la aplicación de un filtro de membrana a la
córnea o la conjuntiva durante unos segundos bajo anestesia general. La citología de impresión es sencilla y causa un
daño mínimo a la córnea y la conjuntiva. El epitelio corneal actúa como barrera, protegiendo al ojo del ambiente externo,
y esta función de barrera se mantiene mediante uniones estrechas, que son estructuras adhesivas entre células. Las
uniones estrechas del epitelio corneal están compuestas por proteínas de unión estrecha, como ZO-1 y ocludina. En la
inmunocitoquímica de la córnea humana intacta, ZO-1 se limitó a las células más superficiales y no se...
1Departamento de Medicina Forense, Escuela de Posgrado de Ciencias Médicas, Universidad de Medicina de la Prefectura de Kioto,
465 Kajii-cho, Kamigyo-ku, Kioto 602-8566, Japón.2Departamento de Oftalmología, Escuela de Posgrado de Ciencias Médicas,
Universidad de Medicina de la Prefectura de Kioto, Kioto, Japón.-Correo electrónico: [email protected]
Informes científicos| (2025) 15:20027 | https://doi.org/10.1038/s41598-025-04410-9 1
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observado en las células epiteliales intermedias o basales14En la inmunohistoquímica de las secciones transversales de la
córnea humana, ZO-1 se tiñó en la mayoría de las células superficiales apicales, así como en el límite entre las células
basales e intermedias.15Mientras tanto, la ocludina fue evidente en las capas celulares superficiales e intermedias del
epitelio en las secciones transversales de la córnea de la rata.16Ban et al. demostraron que la ocludina se concentraba en
los límites entre células solo en la capa superficial y que parecía expresarse en las capas celulares superficiales e
intermedias de la córnea humana.15La tinción de inmunofluorescencia con anticuerpos anti-ZO-1 y antiocludina podría
identificar las células epiteliales obtenidas mediante citología de impresión. Este estudio tuvo como objetivo determinar
si las células epiteliales corneales obtenidas de ojos de cadáveres mediante citología de impresión son útiles para la
observación de cambios post mortem en el epitelio corneal.
Resultados
Tinción de inmunofluorescencia de células epiteliales corneales recolectadas de cadáveres con
diferentes PMI
Las imágenes representativas de la doble tinción con anticuerpos anti-ZO-1 y anti-ocludina se presentan en la Figura.1a.
La mayoría de las células del grupo 1 presentaban una forma pentagonal o hexagonal y estaban próximas entre sí. Se
tiñó el borde de cada célula con ZO-1 u ocludina, concentrándose la tinción en las zonas de contacto entre las células (Fig.
1b). Las células se encogieron y se dispersaron con la prolongación del PMI.
Las células ZO-1 (+)/ocludina (+) representaron el 98,8 % (mediana) del número total de células en el grupo 1 (Fig.2a). Este valor
no se modificó estadísticamente en el grupo 2, sino que disminuyó gradualmente con la prolongación del PMI hasta el 78,4 % en el
grupo 6. El coeficiente de correlación de rangos de Spearman fue de -0,69, lo que indica una correlación negativa. Por el contrario,
el porcentaje de células ZO-1 (−)/ocludina (−) fue de tan solo el 0,39 % en el grupo 1, que aumentó con la prolongación del PMI en
el grupo 4 y alcanzó el 19,3 % en el grupo 6 (Fig.2c). Se observó una fuerte correlación positiva entre el porcentaje de células ZO-1 (
−)/ocludina (−) y el PMI (coeficiente de correlación de rangos de Spearman = 0,70). Mientras tanto, el porcentaje de células ZO-1 (−)/
ocludina (+) aumentó inicialmente en el grupo 3, pero posteriormente disminuyó (Fig.2b) El coeficiente de correlación de rangos de
Spearman fue 0,20.
Influencia de otros factores en la tasa de positividad de ZO-1/ocludina en células epiteliales corneales post
mortem
Para evaluar el efecto simultáneo del IPM y otra variable independiente, como la edad, el sexo y la condición húmeda,
sobre la tasa de células post mortem positivas para ZO-1/ocludina, se realizaron análisis ANOVA de dos vías sobre los
porcentajes de células ZO-1 (+)/ocludina (+) y ZO-1 (−)/ocludina (−), que se correlacionaron estadísticamente con el IPM.
En primer lugar, se analizaron 114 casos, incluyendo aquellos en sus 50 s (50-59 años, n = 23), 60 s (60-69 años, n = 22), 70
s (70-79 años, n = 36) y 80 s (80-89 años, n = 33) para la interacción entre el IPM y la edad en cada tipo celular (Tabla1El
efecto del IPM fue estadísticamente significativo, pero el de la edad no lo fue en ambos tipos celulares. No se observó
interacción significativa entre el IPM y la edad.
En segundo lugar, se analizaron 134 casos, incluidos 89 hombres y 45 mujeres, para determinar el efecto principal del género (Tabla2No
se observó un efecto significativo del género en ninguno de los dos tipos celulares. Sin embargo, sí se observó una interacción significativa
entre el PMI y el género en las células ZO-1 (−)/ocludina (−), pero no en las células ZO-1 (+)/ocludina (+).
Las condiciones húmedas y secas pueden influir en los cambios post mortem en el epitelio corneal. Los casos, hasta
las 48 h post mortem, se dividieron en tres grupos según la situación en la que se encontró el cadáver: con la cara
sumergida en el agua del baño (n = 12), con la cara no sumergida en el agua del baño (n = 8) y en un lugar distinto del
baño o la orilla del agua (n = 61). No se observó un efecto significativo de las condiciones húmedas ni una interacción
significativa entre el PMI y las condiciones húmedas en ambos tipos de células (Tabla).3).
Discusión
La mayoría de las células recolectadas de cadáveres entre 6 y 12 horas después de la muerte mediante citología de impresión se
identificaron como células superficiales según las formas y los patrones de tinción de inmunofluorescencia. El examen de 51
córneas de donantes humanos mediante microscopía electrónica de barrido o microscopía óptica reveló un epitelio intacto en las
48 horas posteriores a la muerte cuando el cuerpo se colocó en una cámara frigorífica a 4 °C pocas horas después del
fallecimiento.11Tras 48 h, aumentó la separación de las capas epiteliales superficial y profunda, así como la pérdida de células
epiteliales. En consonancia con estos hallazgos, el presente estudio demostró que el porcentaje de células ZO-1 (+)/ocludina (+)
disminuyó a las 25 h post mortem y el de células ZO-1 (−)/ocludina (−) aumentó a las 49 h post mortem.
Mientras tanto, los porcentajes de células ZO-1 (−)/ocludina (+) aumentaron inicialmente a las 25-48 h post mortem y posteriormente
disminuyeron. En patología forense, se observa con frecuencia una disminución de la reacción inmunohistoquímica en muestras de tejido
obtenidas de cuerpos descompuestos. En una micromatriz de tejido con 120 muestras de autopsia forense, incluyendo tejido hepático,
pulmonar y cerebral, las muestras de cadáveres recolectadas entre 1 y 3 días post mortem mostraron tinción positiva con todos los
anticuerpos, mientras que las muestras con un IPM más prolongado mostraron tasas de tinción reducidas.17En la tinción inmunocitoquímica
de muestras de colon y vejiga urinaria de humanos, cobayas y ratas dejadas durante 48 h a 20 °C hasta su fijación, la cantidad de tinción
positiva disminuyó sustancialmente debido a la autólisis del tejido.18La inmunohistoquímica en tejidos quirúrgicos humanos reveló que la
variación en la intensidad de la tinción se vio afectada principalmente por el intervalo de tiempo antes de la fijación del tejido, y la pérdida de
intensidad de la tinción se hizo evidente a las 48 h.19Es probable que la cantidad de células negativas para ZO-1/ocludina se viera
parcialmente afectada por la disminución de la capacidad de tinción con los anticuerpos.
Respecto a los cambios relacionados con la edad en el epitelio corneal, se han publicado varios informes sobre el espesor del
epitelio corneal (CET)20,21, densidad de células epiteliales de la córnea y área de células epiteliales de la córnea22En el presente
estudio, entre los grupos de 50 a 89 años, los cambios en el epitelio corneal se vieron afectados principalmente por el IPM, pero no
por la edad. Estos hallazgos inconsistentes podrían atribuirse a diferentes mediciones. Además, el rango de edad en el presente
estudio fue más estrecho que en los otros estudios y no incluyó casos menores de 50 años.
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Figura 1. Panel (a) muestra imágenes representativas de la tinción de inmunofluorescencia de células epiteliales corneales
recolectadas de cadáveres con diferentes intervalos post mortem. NC, control negativo; barra de escala = 50 µm. Panel (b)
muestra imágenes ampliadas de las células del grupo 2.
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Figura 2Relación entre el intervalo post mortem y los porcentajes de células ZO-1 (+)/ocludina (+) (a), células ZO-1 (−)/ocludina (+) (
b) y células ZO-1 (−)/ocludina (−) (doLos puntos azules y rojos indican los casos masculino y femenino, respectivamente. Los
diagramas de caja muestran los valores mínimo, primer cuartil, mediana, tercer cuartil y máximo.osCoeficiente de correlación de
rangos de Spearman. Se empleó la prueba de comparaciones múltiples de Steel para comparar el grupo post mortem de 6 a 12 h
con los demás grupos; los resultados analíticos se presentan en la parte superior del gráfico. ns: no significativo; **PAG<0,01; *
PAG<0.05.
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Tipos de células PMI EdadInteracción
ZO-1 (+)/ocludina (+)< 0,0010,830,81
ZO-1 (−)/ocludina (−)< 0,0010,730,49
Tabla 1.PAG-valor en ANOVA de dos vías entre el intervalo post mortem (PMI) y la edad en la tasa de células
ZO-1/ocludina positivas. Se analizaron 114 casos, incluidos aquellos en sus 50 s (50-59 años, n = 23), 60 s (60-69
años, n = 22), 70 s (70-79 años, n = 36) y 80 s (80-89 años, n = 33).
Tipos de células PMI Género Interacción
ZO-1 (+)/ocludina (+)< 0,0010,59 0.06
ZO-1 (−)/ocludina (−)< 0,0010,29 0.045
Tabla 2.PAG-valor en ANOVA de dos vías entre el intervalo post mortem (PMI) y el género en la tasa de células ZO-1/
ocludina positivas. Se analizaron 134 casos, incluidos 89 hombres y 45 mujeres.
Tipos de células PMI SituaciónInteracción
ZO-1 (+)/ocludina (+)< 0,0010,87 0.12
ZO-1 (−)/ocludina (−)< 0,010.80 0.051
Tabla 3.PAGValor en ANOVA de dos vías entre el intervalo post mortem (IPM) y la condición húmeda en la tasa
de células positivas para ZO-1/ocludina. Los casos hasta las 48 h post mortem se dividieron en tres grupos
según el lugar donde se encontró el cadáver: con el rostro sumergido en el agua del baño (n = 12), con el rostro
no sumergido en el agua del baño (n = 8) y en un lugar distinto al baño o la orilla del agua (n = 61).
Aunque la prevalencia del ojo seco aumenta con la edad23No se pudo determinar si cada cadáver tenía alguna
enfermedad ocular.
No se observó ninguna diferencia estadísticamente significativa entre hombres y mujeres en el CET24Mientras tanto, otros
estudios informaron que los hombres tenían córneas más gruesas que las mujeres.21,25En el presente estudio, el género no tuvo
efecto en los cambios post mortem en el epitelio corneal, mientras que se observó una asociación entre el género y el IPM en las
células ZO-1 (−)/ocludina (−). Esto podría atribuirse a la diferencia significativa en el número de casos entre hombres y mujeres, así
como al bajo número de casos en general.
En ratones expuestos a un ambiente de baja humedad, se indujo una disfunción de la barrera corneal, lo que resultó
en el desprendimiento del epitelio corneal.26Sin embargo, no está claro si el efecto de la baja humedad en la función de la
barrera corneal se extiende a los ojos post mortem. En el presente estudio, el cambio post mortem en el epitelio corneal
pareció no estar relacionado con la situación en la que se encontró el cadáver: en el baño o en otro lugar. Sin embargo,
dado que el presente estudio se realizó durante la temporada de alta humedad en Kioto, no se observó ninguna
diferencia significativa. Además, aunque los párpados del cadáver se mantuvieron cerrados al menos durante su
transporte a nuestro departamento, no pudimos obtener información sobre si estaban abiertos al momento del hallazgo.
Hasta donde sabemos, la citología de impresión nunca se ha empleado en la práctica forense. Es adecuada para el
examen forense, ya que es un método no invasivo y rápido, y no afecta el examen posterior ni la autopsia. La técnica de
inmunofluorescencia para la citología de impresión fue adaptada con éxito por Pflugfelder et al. en 1990.27En el presente
estudio, el filtro de membrana se disolvió con acetona antes de la tinción de inmunofluorescencia según el protocolo de
Krenzer y Freddo.28para eliminar la fluorescencia de fondo y obtener mejores imágenes de fluorescencia.
Este estudio presenta varias limitaciones que deben reconocerse. La primera es la posible contaminación de las células
epiteliales conjuntivales y las células sanguíneas en la citología de impresión. Tanto ZO-1 como la ocludina se tiñeron
positivamente en las células superficiales apicales conjuntivales y las células epiteliales corneales.29Por lo tanto, excluimos del
análisis los casos con sangre en la córnea y en el saco conjuntival. Al realizar la citología de impresión, abrimos el párpado con la
mayor suavidad posible y colocamos el filtro de membrana en el centro de la córnea. Además, lavar el bulbo con solución salina u
otra solución acuosa estéril antes de la citología de impresión podría haber evitado la contaminación de la muestra con otros tipos
de células. La segunda limitación fue que no pudimos obtener información completa sobre la situación en el momento del
hallazgo del cuerpo. En particular, la temperatura ambiente y el hecho de que los párpados estuvieran abiertos o cerrados pueden
tener un gran impacto en el estado del epitelio corneal. También se desconocía el historial de enfermedades oculares del sujeto.
En un epitelio corneal lesionado, se indujo la expresión de ZO-1 en el intermedio.30,31y basal31Las células reconstituyen las uniones
estrechas durante la recuperación. Finalmente, con este método, pueden requerirse 3 h para disolver la membrana para la tinción
de inmunofluorescencia. Las aplicaciones forenses también pueden requerir métodos que no requieran la disolución de la
membrana para un procesamiento más rápido.32–34.
En conclusión, el presente estudio demostró que es posible observar cambios dependientes de PMI en el epitelio
corneal a través de la tinción de inmunofluorescencia de proteínas de unión estrecha en células epiteliales corneales.
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Grupo Intervalo post mortem Número de casos
1 6–12 horas 17
2 13–24 horas 35
3 25–48 horas 31
4 49–72 horas 9
5 4–7 días 30
6 8–14 días 12
Tabla 4. Número de casos en cada grupo dividido según el intervalo post mortem.
Se obtuvieron de los ojos de cadáveres mediante citología de impresión. Una citología de impresión simple y no invasiva puede ser
aplicable para el diagnóstico en la práctica forense.
Métodos
La aprobación ética
Este estudio fue aprobado por la Junta de Revisión Institucional de la Universidad de Medicina de la Prefectura de Kioto
(ERB-C-3107). Todos los experimentos se realizaron de conformidad con la Declaración de Helsinki. Los cadáveres se
obtuvieron de autopsias médico-legales encargadas por la Policía de la Prefectura de Kioto. Además, este estudio se
realizó utilizando registros de autopsias anteriores. Sin embargo, no pudimos obtener el consentimiento informado de la
familia en duelo para el uso de estos registros. Por lo tanto, realizamos este estudio de conformidad con las Directrices
Éticas para la Investigación Médica en Seres Humanos, Capítulo 5, Parte 12-1, (b), (ii) (promulgadas por el Ministerio de
Salud, Trabajo y Bienestar Social de Japón). Publicamos información sobre nuestra investigación en nuestro sitio web.
https://square.umin.ac.jp/kpum-hoi/research.html), lo que permitió la exclusión de personas cuyos familiares no
aceptaron participar en el estudio. El Comité de Revisión Institucional de la Universidad de Medicina de la Prefectura de
Kioto aprobó este método y eximió la necesidad de consentimiento informado.
Sujetos de estudio
Los sujetos para la citología de impresión fueron seleccionados entre cadáveres llevados a nuestro departamento para tomografía
computarizada (TC) post mortem y/o autopsia del 15 de marzo al 31 de agosto de 2024, con base en los criterios de inclusión/
exclusión. El cadáver fue transportado a nuestro departamento a temperatura ambiente con los párpados cerrados. La citología de
impresión se realizó aproximadamente 15 minutos después de la llegada del cadáver. Los criterios de inclusión fueron PMI < 2
semanas y edad > 18 años. Los criterios de exclusión fueron un alto grado de descomposición, ardor, atrofia del globo ocular,
sequedad corneal, lesión del globo ocular, estenosis de la fisura palpebral, cicatrización conjuntival y sangre o moco en la córnea y
en el saco conjuntival. El intervalo desde la hora estimada de la muerte hasta la hora de inicio del examen de TC o autopsia se
definió como PMI. La citología de impresión se realizó en 134 casos que cumplieron con los criterios de inclusión y exclusión. El
número de casos masculinos y femeninos fue de 89 y 45, respectivamente. El rango de edad fue de 21 a 97 años, con una mediana
de 71 años. El IPM osciló entre 6 h y 14 días. Estos casos se dividieron en seis grupos según su IPM (Tabla4).
Citología de impresión
Se cortó un filtro de membrana de celulosa (GSWP03700, Merck Millipore, Tokio, Japón) en un trapezoide recto (2 mm de
largo en la parte superior, 4 mm de largo en la inferior y 5 mm de alto). El filtro se colocó sobre la superficie central de la
córnea con unas pinzas y se presionó ligeramente durante 5 s con un palillo.13Posteriormente, el filtro de membrana
seleccionado se roció con Cytosetter (J20000, Matsunami glass, Osaka, Japón) para su fijación y se colocó con la cara de
adhesión celular hacia abajo sobre un portaobjetos recubierto de poli L-lisina (Muto Pure Chemical, Tokio, Japón). Tras
secar el filtro de membrana, se aplicó una gota de acetona para facilitar la adhesión de las células al portaobjetos, y se
secó de nuevo para asegurar su completa adhesión. A continuación, para disolver el filtro de membrana, el portaobjetos
se sumergió en una solución de acetona con agitación a 30 rpm durante 1 h. Tras lavar el portaobjetos con agua
corriente durante 5 min, el residuo del filtro de membrana se digirió con una solución de celulosa 10 U/mL (Nacalai
Tesque, Kioto, Japón) (tampón de acetato 0,1 M, pH 5) durante 2 h a 37 °C.28. Después de lavar con agua del grifo seguido
de solución salina tamponada con fosfato (PBS), la muestra se bloqueó con suero de burro al 5% (D9663, Sigma-Aldrich,
Tokio, Japón) en PBS durante 30 minutos y luego se incubó con anticuerpos anti-ZO-1 (1:1000, 21773-1-AP, Proteintech,
Tokio, Japón) y anti-ocludina (1:2000, 66378-1-lg, Proteintech) durante 1 hora a temperatura ambiente. A continuación,
tras lavar con BSA al 1% con PBS tres veces, la muestra se incubó con anticuerpos ZO-1 (1:500, Goat Anti-Rabbit IgG H&L
Alexa Fluor® 488, ab150081, Abcam, Tokio, Japón) y ocludina (1:1000, Goat Anti-Mouse IgG H&L Alexa Fluor® 568,
ab175701, Abcam) durante 1 h a temperatura ambiente. Posteriormente, la muestra se montó con medio con DAPI
(VECTASHIELD #H-1800, Vector Laboratories, Newark, CA). Se obtuvieron 12 imágenes de fluorescencia de cada
portaobjetos utilizando un microscopio de fluorescencia (BZ-X710 All-in-One Fluorescence Microscope, Keyence, Osaka,
Japón) a un aumento de 40×. La muestra no teñida con el anticuerpo primario se utilizó como control negativo. Las
células teñidas con DAPI se clasificaron en ZO-1 (+)/ocludina (+), ZO-1 (−)/ocludina (+) y ZO-1 (−)/ocludina (−). El número de
células se contabilizó mediante un programa informático de imágenes (cellSens 1.16, Evident, Tokio, Japón).https://
evidentscientific.com/es/productos/software/cellsens).
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Análisis estadístico
Los datos cuantitativos se expresaron como mediana (rango intercuartil [RIC]) y se analizaron utilizando EZR.35Se utilizó el
coeficiente de correlación de rangos de Spearman para determinar la correlación entre el IPM y el número de células
inmunoteñidas. Se empleó la prueba de comparaciones múltiples de Steel para comparar el grupo post mortem de 6 a 12 h con
los demás grupos. La influencia de los demás factores en la correlación se investigó mediante un análisis de varianza (ANOVA) de
dos vías en los diferentes grupos de IPM.PAG-Los valores de 0,05 o menos se consideraron estadísticamente significativos.
Presentación de la conferencia
Este estudio se presentó en un congreso regional de la Sociedad Japonesa de Medicina Legal en Nara, Japón (9/11/2024).
El resumen breve se publicará en el sitio web de la Sociedad Japonesa de Medicina Legal.
Disponibilidad de datos
Los conjuntos de datos generados o analizados durante el estudio actual están disponibles a pedido razonable del autor
correspondiente.
Recibido: 29 de noviembre de 2024; Aceptado: 27 de mayo de 2025
Referencias
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Expresiones de gratitud
Agradecemos a Enago por la revisión en idioma inglés.
Contribuciones del autor
Conceptualización: TD; metodología: TD, KS-I. y H. T; análisis formal e investigación: TD; redacción del
borrador original: TD y KS-I.; redacción, revisión y edición: CS y HI Todos los autores han leído y aceptado
la versión publicada del manuscrito.
Fondos
No se recibió financiación para ayudar con la preparación de este manuscrito.
Declaraciones
Intereses en competencia
Los autores declaran no tener intereses en conflicto.
Información adicional
Correspondenciay las solicitudes de materiales deben dirigirse a KS-I. Información sobre
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© El autor(es) 2025
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