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1. Pontificia Universidad Católica de Chile Escuela de Ingeniería Departamento de Ingeniería Química y Bioprocesos IIQ2663 – Fundamentos de Biotecnología Ayudantía regulación génica Vicente Cataldo [email protected]

2. Kornberg y colaboradores incubaron extractos solubles de E. coli con una mezcla de dATP , dTTP, dGTP y dCTP, todos marcados con 32 P en el grupo α -fosfato. Al cabo de algún tiempo, la mezcla de incubación fue tratada con ácido tricloroacético, que precipita el DNA pero no los precursores nucleotídicos. El precipitado fue recolectado, y la cantidad de precursor incorporado al DNA fue determinada a partir de la cantidad de radioactividad presente en el precipitado. Si cualquiera de los 4 precursores nucleotídicos fuese omitido de la mezcla de incubación ¿se encontraría radioactividad en el precipitado? Justifique la respuesta. ¿Se incorporaría el 32 P al DNA si solamente estuviese marcado el dTTP? Justifique la respuesta. C. ¿Se encontraría radioactividad en el precipitado si se marcara con 32 P el fosfato β o γ en lugar del α de los desoxiribonucleotidos? Explique.

3. Se cultivan células de E. coli en un medio que contiene lactosa, pero sin glucosa. Indique si cada uno de los siguientes cambios o condiciones aumentaría, disminuiría, o no cambiaría la expresión del operón lac . Adición de una elevada concentración de glucosa. Una mutación que impida la disociación del represor Lac del operador. Una mutación que inactive completamente la β-galactosidasa. Una mutación que inactive completamente la galactósido permeasa. Una mutación que impida la unión de la CRP a su sitio de unión cerca del promotor lac .

4. Un bioquímico reemplaza el dominio de unión al DNA de la proteína GAL4 de levadura por el dominio de unión al DNA del represor Lac y observa que la proteína modificada ya no regula la transcripción de los genes gal de levadura. Dibuje un diagrama de los diferentes dominios funcionales que esperaría encontrar en la proteína GAL4 y en la proteína modificada. ¿Por qué ya no regula la proteína modificada la transcripción de los genes gal ? ¿que se podría hacer en el sitio de unión del DNA reconocido por esta proteína quimérica para que fuese funcional en la transcripción de los genes gal ?