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Microscopio funcion y partes

1. Microscopio.Técnicas Histológicas
HISTOLOGÍA

2. ocular
columna
objetivos
Tornillo macro-
micrometrico
platina
condensador
revólver
cabezal

3. Oculares

4. Objetivos

5. Platina

6. PODER DE RESOLUCIÓN
Capacidad de discriminar los más finos detalles de
estructura y ligeros contrastes del índice de refracción.
PR= 1/d siendo d:la distancia mínima que debe existir entre
dos puntos del objeto para que se visualicen separados
d=long. de onda de la luz utilizada/AN. Cuanto menor sea d,
tanto mayor será el PR.
APERTURA NUMÉRICA
Capacidad del objetivo de utilizar un menor o mayor número
de rayos luminosos en la formación de la imagen
microscópica. Expresa el tamaño del haz de luz que es
captado por el objetivo después de haber atravesado el
objeto.
AN= seno del semiángulo de apertura X índice de refracción
del medio interpuesto entre el cubreobjeto y la lente frontal
del objetivo (aire)
A mayor AN menor será el valor de d, por lo tanto mayor el
PR.

7. AUMENTO
Aumento propio: es la relación entre el tamaño de la imagen
y el tamaño real del objeto, en valores lineales. La imagen
dada por el objetivo será aumentada luego por el ocular.
El aumento no depende del Poder de Resolución.
Aumento total: se determina mediante el producto del
aumento propio del objetivo por el aumento propio del
ocular. Ej.: al observar con el objetivo de campo que es el de
menor aumento: 5X el aumento total obtenido será de 50
veces el tamaño del objeto observado.
10X, aumento total= 100 veces
40X, aumento total= 400 veces
100X (objetivo de inmersión)= 1000 veces
Para obtener el máximo PR, de alrededor de 0,2µm, se
requiere un aumento de 1000-1400 veces, dado que el PR del
ojo, a la distancia normal de observación (25 cm.) es de 0,2
mlm.

10. PASOS DE LA TÉCNICA HISTOLÓGICA
1.Obtención del material
2.Fijación
3.Deshidratación
4.Aclaración o transparentización del tejido
5.Impregnación o penetración de la parafina
6.Inclusión definitiva o formación del bloque de
parafina
7.Corte con el micrótomo
8.Montaje del corte sobre el portaobjetos
9.Desparafinización
10.Rehidratación
11.Coloración
12.Montaje( colocación del cubreobjeto )

11. FIJACIÓN
1)Fijadores físicos: frío (cortes por
congelación), desecación
2)Fijadores químicos:
a-Simples: formaldehído 4-10%
alcohol etílico
tetróxido de osmio
alcohol metílico
b-Complejos o mezclas fijadoras :
líquido de Bouin (ác. pícrico-
formol-ác. acético)
líquido de Zenker(bicromato-
acético)
líquido de Helly(bicromato—formol)

12. DESHIDRATACIÓN
1) Se dispone una lámina
en un cassette de
deshidratación
2) Deshidratación en
alcoholes sucesivos

13. PENETRACIÓN DE LA PARAFINA

14. INCLUSIÓN DEFINITIVA O
FORMACIÓN DEL BLOQUE DE
PARAFINA

15. CORTE CON MICRÓTOMO

16. COLORACIÓN
Colorantes naturales: de origen vegetal ej. azafrán,
hematoxilina, orceína
de origen animal ej. carmín
Colorantes artificiales o sintéticos: eosina, azul de metileno
Colorantes básicos: aceptan protones y quedan cargados
en forma positiva, son catiónicos ej. hematoxilina, azul de
toluidina, azul de metileno
Colorantes ácidos: liberan protones y quedan cargados en
forma negativa, son aniónicos ej. eosina, fucsina ácida,
naranja G , azul de anilina

17. ACIDOFILIA: afinidad para colorearse con un colorante
ácido como la eosina. Las proteínas al PH fisiológico se
comportan como bases, los citoplasmas de las células dado
que poseen prot. (en sus filamentos citoplasmáticos, en sus
membranas mitocondriales, REL) son acidófilos.
También son acidófilos:la mayoría de los componentes
membranosos intracelulares, la mayoría de las fibras
extracelulares (proteínas con grupos amino ionizados), la
matriz ósea (por sus fibras colágenas)
BASOFILIA: afinidad para colorearse con un colorante
básico como la hematoxilina. Los ácidos nucleicos del
núcleo celular o los ácidos ribonucleicos de los ribosomas
debido a su carga negativa son basófilos.
También son basófilos: el RER( por el contenido de RNA),
matriz cartilaginosa (por los proteoglucanos)

18. Método de PAS
Método de tinción que colorea carbohidratos y
macromoléculas con abundancia de carbohidratos. Detecta
glucógeno en las células, moco en células como las
caliciformes, la membrana basal de los epitelios y las fibras
reticulares del tejido conectivo

19. Inmunohistoquímica
Se basa en la utilización de un anticuerpo específico, que se
marca mediante un enlace químico con una sustancia que
puede transformarse en visible, generalmente un fluorocromoo
una enzima. Permite localizar en las células ccomponentes
como proteínas extracelulares, receptores de membrana,
enzimas citosólicas,etc