Reação em Cadeia da Polimerase Uma técnica essencial da biologia molecular.
Agenda •O que é PCR? •Importância da PCR •Etapas da PCR •Desnaturação do DNA •Hibridização e Extensão
O que é PCR? A PCR, ou Reação em Cadeia da Polimerase, é uma técnica que permite fazer milhões de cópias de uma sequência específica de DNA rapidamente. Por exemplo, em cenas de crime, isso pode ajudar a analisar uma única gota de sangue. Esse processo simula a replicação do DNA em células vivas.
Importância da PCR A PCR é fundamental na biologia molecular pois permite amplificar sequências de DNA mesmo a partir de amostras minúsculas, como uma gota de sangue de uma cena de crime. Essa técnica possibilita obter milhões de cópias do material genético, vital para análises forenses e diagnósticos. A evolução para a qRT-PCR trouxe agilidade e maior precisão na detecção de DNA.
Etapas da PCR •Desnaturação: DNA separado por calor •Anelamento: primers se ligam ao DNA •Extensão: duplicação do DNA com Taq polimerase
Etapas da PCR Figura | Esquema da análise de PCR DNA original a ser aplicado Primer Nucleotídeo Desnaturação a 94- 96 ° C Anelamento a 60 ° C Alongamento a 72 ° C Fonte: adaptada de <https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Polymerase_chain_reaction.svg>. Acesso em: 13 set. 2017.
Desnaturação do DNA A desnaturação do DNA ocorre quando aquecemos a amostra entre 92-95°C, permitindo que as fitas se separem devido à quebra das pontes de hidrogênio. Esse passo é crucial na amplificação do DNA, pois remove a estrutura da dupla hélice. Por exemplo, em um caso forense, essa etapa é essencial para isolar o DNA de uma gota de sangue.
Hibridização e Extensão Durante a PCR, os primers se ligam às fitas de DNA desnaturadas. A enzima Taq polimerase começa a adicionar nucleotídeos, formando novas fitas. Por exemplo, com isso, uma gota de sangue pode resultar em milhões de cópias do DNA alvo.
PCR em Tempo Real A PCR em tempo real combina a amplificação do DNA com a detecção simultânea, permitindo resultados rápidos e precisos. Por exemplo, em testes de COVID-19, essa técnica facilita a identificação do vírus a partir de pequenas amostras. Assim, erradica-se o risco de contaminação das amostras durante o processo.
Conclusão •PCR permite amplificar pequenas quantidades de DNA. •Fundamental em análises forenses e diagnósticos médicos. •As etapas da PCR são cruciais para seu funcionamento. •A qRT-PCR traz inovações na detecção do DNA. •Recursos adicionais podem aprofundar seu conhecimento.