Pertemuan 3 KULTUR JARINGAN [Autosaved].pdf

tissue culture laboratory and equipment

1. Pertemuan3:
PPT KuliahMahasiswaTingkatI Biologi, FMIPA UNIMED Semester
Ganjil
September 2021
Mata kuliah: Kultur JaringanTanaman
(BIO4616010204)
Dosen: Prof. Dr. FauziyahHarahap, M.Si.
Ayu Putri Ningsih, S.Si., M.Si
DepartemenBiologi, FMIPA UNIMED

2. BAGIAN II: LABORATORIUM
DAN PERALATAN KULTUR
JARINGAN
•FasilitasLaboratorium,
•PeralatanDan BahanYang
Dibutuhkan,
•SterilisasiAlat Dan Media, Dan
•Persyaratan-persyaratanUmum
Yang DibutuhkanDalamTeknik
Kultur Jaringan

3. FasilitasLaboratorium
•Laboratoriumkulturjaringan
berbedadenganlaboratorium-
laboratoriumlainnyakarena
memilikidesainyangkhusus.
•Bangunanlaboratoriumsebaiknya
memilikipembagian ruangan yang
teratur sehingga setiapaktivitas
yang berbeda dilakukan pada
ruang yang berbeda

4. Contohlain designlaboratoriumKultur JaringanTumbuhanygsederhana

5. Wastafelmerupakanalatyangpentingyangberadadiruangsterilisasi.Di
wastafelsebaiknyadilengkapidengansabunpencucipiring,klorin,serta
alat-alatlainsepertisikat(berbagaijenissikat),sertaalat-alatlainyang
membantudalammemudahkanpencucianatauprosessterilisasialat-
alatyangdigunakandalamkulturjaringan.
FasilitasLaboratorium: Ruang Sterilisasi
Ruangan tempat dimana seluruhalatkulturjaringan
dibersihkan.Mensterikanalatyangdibutuhkan dalam
kultur jaringan dibutuhkan westafel danautoklafdi
dalamruanganini.
Untukmensterilkanalat-alat/botol yang
terkontaminasi dengan yang tidak terkontaminasi
sebaiknyadipisahkanruangandanperalatanyang
digunakan.

6. FasilitasLaboratorium: RuangPreparasi
Ruanganyang digunakanuntuk
mempersiapkaneksplan(bahan
tanaman, membuat/mempersiapkan
media dan hallainnya.
Padaruanganinidibutuhkan
fasilitas,seperti;
•meja,
•washtafel,
•lemari,
•oven,dan
•kulkas,
•hotplatemagneticstirrer,serta
•timbangandigital.

7. Kegiatan-kegiatanyangdilakukandi
dalamruangpreparasi.Sebagianbesar
pemanfaatanruangpreparasidigunakan
untukmembuatmediakulturjaringan.
Dalamlangkahpembuatanmediatersebut
adapenimbanganbahanyangdigunakan
(gambara);pemasakanmedia(gambarb)
danmemasukkanmediakedalambotol
kultur(gambarc).
(a)
(b)
(c)

8. FasilitasLaboratorium: Ruang Stok Media
(bag.1)
Semuamediayangdibutuhkandalam
kulturjaringan(apakahituNA,Mg,
Unsurharamakro,mikro,vitamin,
dll)disimpandalamruanganini.
DalamruanganiniharusadaAC
untuk menjaga kelembaban
bahan/media

9. FasilitasLaboratorium: RuanganStok (bag.2)
Juga untukkemudahanpembuatanmedia dan
mengecilkanresikokesalahan, makazat-zathara yang
dibutuhkandalamjumlahsangat sedikitdalam
pembuatanmedia dibuatdalambentukstoklarutan
Umumnyaalatyang adadi ruanganiniadalah
lemaries, untukmenyimpanstokdalambentuk
larutandan beberapazatkimialainnya.
Rak penyimpanan stok
untuk pembuatan media
kultur jaringan
Lemariessebagaitempatpenyimpanan
stockdalambentukcairataularutan.

10. FasilitasLaboratorium: RuangTransfer/Tanam/Inokulasi
Sesuaidengannamanya,didalamruanganini
dilakukankegiatantransfer,inokulasiatau
pengkulturan,yaknimenanamkaneksplanpada
mediumcairataupadat.
Didalamruanganiniditempatkanlaminar
airflowcabinet(LAFC).
Proses inokulasiataupenanamaneksplandi dalam
laminariair flow cabinet yang adadi ruangantransfer
laboratoriumkultur jaringanUPT BIH Gedung Johor
Medan
Ruang transfer juga ditempatkanpula
alat-alatlain, seperti:
•mikroskop,
•lampuspiritus,
•alat-alatinokulasi,

11. FasilitasLaboratorium: Ruang Kultur / Inkubasi
merupakan ruang untuk meletakkan
dan menumbuhkan hasil kultur yang
kita tanam.
Ruangan inidilengkapidengan
pendinginyangbisadiatursuhunya.
Umumnya suhuyangdibutuhkan
berkisar20-24
0
Ckarenamorfogenesis
dalamkulturumumnyaterjadipada
kisaransuhutersebut.
Ruanginijugaharusdijagasterilitasnya
untukmenghindarkankulturdari
kontaminan.Sterilitasdijagadengan
jalanmenyemprotkandesinfectansecara
berkalasertamembersihkanruangan
sertamenyingkirkankulturyangsudah
terkontaminasi.

12. Peralatanyang dibutuhkanuntukkultur
jaringantanaman

13. PeralatanKultur Jaringan: TimbanganDigital
DokumenDwiyani, R (2015)
Dalamlab kultur, alatinidigunakanuntukmenimbang
bahan/zatyang digunakandalamkultur, misalnyazatpengatur
tumbuh, bahanuntukmedia, gula, agar, dan lain sebagainya.
Sebelummenimbangbahan,
kitaharusmengetahuikapasitas
timbangdarisuatutimbangan.
Pilihanjenistimbanganyang akan
digunakandisesuaikandengan
beratbahanyang akan
ditimbangdan kapasitas
timbangan.
Secaraumum, carapenggunaantimbanganadalahsebagai
Berikut:
•Timbangandihubungkandenganstop kontaklistrik(plug-in),
•Tekantombol“on/off” untukmengaktifkan(Sebelum
digunakantimbangandinolkanterlebihdahulu)
•Setelah alas timbang(untukmenaruhbahanyang akan
ditimbang) diletakkanpada timbangan, timbangankembali
dinolkan.
•Kemudianbahanyang akanditimbangditaruhpada alas
timbangyang sudahdisiapkan. Selanjutnya,
•beratbendayang ditimbangakanterbacapada layar.
Setelah pekerjaanpenimbanganselesai,
•timbanganharusdibersihkan, dinolkandan stop kontakharus
dicabut.

14. PeralatanKultur Jaringan: Hot Plate MagnetikStirrer
Digunakanuntukproses pembuatanmedia serta
pembuatanlarutandarisenyawayang berbentuk
padat. Dimana alatinidilengkapidgnmagnet
Magnetic stirrer memilikiduafungsiyaituuntuk
pemanasan(heating) dan pengadukan(stirring)
Tujuanpenggunaanmagnetic stirrerdalam
pembuatanmedium ataularutanadalah
mempercepathomogenisasipelarutdengan
bahanyang akankitagunakan
Magnetic stirrer merupakanalatyang
digunakandalamproses pembuatan
media dan pembuatanlarutandalam
kultur jaringantanaman

15. PeralatanKultur Jaringan:Laminar Air Flow Cabinet
(Lafc)
LAFC merupakansuatutempatmejakerjayang steriluntukmelakukan
kegiatanmulaidaripersiapanbahantanam, inokulasiataupenanaman
dan pemindahantanamandarisatutempatketempatlain dalamsatu
kultur.
LAFC merupakansuatutempatmeja
kerjayang steriluntukmelakukan
kegiatanmulaidaripersiapanbahan
tanam, inokulasiataupenanamanbahan
eksplan
PrinsipkerjaLAFC adalahdenganhembusanudara(air flow)
yang steril.
sebelumdansesudahbekerja,laminarharusdisemprotdengan
alkohol.Semuabendayangakandimasukkankedalamlaminar,
termasuktanganpenggunajugadisemprotdenganalkohol.
Prinsipkerjasterilmerupakansyaratmutlakdalam
pekerjaankulturjaringan.

16. PeralatanKultur Jaringan: Autoklaf
•Autoklafadalahalatuntuksterilisasidenganmetodeuappanas(steam heating).
•Ada duajenisjikadilihatdaridayayang digunakan. Yang pertamaadalahautoklafyang
menggunakankompor& yang keduaadalahautoklafyang menggunakandayalistrik.
Dokumen Dwiyani, R (2015)

17. Autoklafyang menggunakandayakompor
Autoklafdilengkapidengan“sarangan” seperti
pada dandanguntukmengukus.
Jikasudahmencapaitekanan17,5Psi
atausuhu121
0
C,komporharussegera
dikecilkan.Kemudiansuhuinidijaga
selamawaktuyangdibutuhkanuntuk
sterilisasi.
Misalnyauntuksterilisasimedia selama
20-30 menit, peralatankecildan
glasswaresselama1 jam.

18. Autoklafyang menggunakandayalistrik
Pada autoklafdayalistrik, besaransuhuakanberjalansecaraautomatissesuaipengaturan
suhuyang kitalakukan.
Untukjenisautoklaflistrik,naiknyasuhusangatlambatdantekanan17,5Psidicapaidalamwaktuyang
lebihlama.Namunkemudianstabildalamtekananinitanpaharusmencabutstopkontaksepertihalnya
mengecilkankomporpadaautoklafkompor.

19. Autoklafyang menggunakandayalistrik
Autoklafdilengkapidengan“sarangan” seperti
pada dandanguntukmengukus.

20. Cara MenggunakanAutoklafListrik/ Sterilisasi
1. Masukanair denganjumlahvolume yang sesuaidengan
kebutuhan,
2. Menyalakantombolpower terlebihdahulu.
3. Tempatkanmedia cair, ataumedia padatatauperalatan
laboratoriumyang akandisterilisasipada autoclave.
4. Tutupautoclave denganbaikdan rapat, kemudiancekkembali
safety clamp sebelummelakukanproses sterilisasi.
5. Setting waktudan suhupada autoclave sesuaidengankebutuhan,
kemudiantekantombolstart.
6. Setelah proses steriliasiberakhirdan suhumenjadidingin, baru
bisamemindahkanprodukkeluardariautoclave.
7. Kosongkanautoclave dariprodukyang telahdisterilisasisetiapkali
sudahdigunakan.
8. Jika tidakdigunakandalamwaktuyang cukuplama disarankan
untukmengkosongkanair pada bakpenampung, memutus
hubunganautoclave dengansumberlistrik.

21. PeralatanKultur Jaringan: Oven
Sterilisasijugabisadilakukandenganoven,
namunhanyabisauntukalat-alatkecildan
glasswares(Erlenmeyer,cawanpetri,tabung
reaksidangelaslainnya)dantidakbisauntuk
sterilisasimedia.
Metodesterilisasidenganovendikenaldengan
dryheating,karenaprosessterilisasi
menggunakanudarakeringyangpanas.
Pada umumnya temperatur yang digunakan pada
sterilisasi cara kering adalah sekitar 140-170
0
C selama
paling sedikit 2 jam
Ovendipakaiuntukmensterilkanalat-alatgelasseperti
Erlenmeyer,cawanpetri,tabungreaksidangelaslainnya

22. PeralatanKultur Jaringan: RakKultur
Adalahtempat untuk menaruheksplan setelah
ditanam pada media steril dan
menumbuhahkannya hingga menjadi plantlet.
Rak kultur diletakkan dalam ruang kultur atau
ruang inkubasi.
Semuaprosesmorfogenesishingga
terbentuknyaplantletberlangsungdiruang
kulturpadarakkultur.

23. PeralatanKultur Jaringan: LemariPendingin/Es
Lemaries digunakanuntukmenyimpanstok-stok
media kultur agar tidakcepatrusak. Beberapa
media stokyang bisadisimpandi dalamlemari
es adalah; stokhormon, stokhara makro, dan
stokhara mikro

24. Glassware & PeralatanKecil lainnya
dibutuhkanuntukkultur jaringantanaman

26. Mikropipet& Tips
Mikropipet(micropipet)adalahsuatualat
yangdigunakanuntukmemindahkancairan
dalamjumlahkecilsecaraakurat.
Adabeberapamacammikropipetyangbiasa
dipakaidilaboratorium,sepertimisalnyamerk
GilsonadatertulisP20,P200danP1000pada
kepalapipet.
P20 untukmemipetlarutanpada volume antara2-20 ul
P200 untukmemipetlarutanpada volume antara20 –200 ul
P1000 untukmemipetlarutanpada volume antara100 –1000 ul

27. Bagian –Bagian Mikropipet

28. Cara PengoperasianMikropipet
•Set volume : dengancaramemutarknop pengaturvolume,
missal kitamaumengambilvolume larutanstokatauvolume
ZPT yang akankitagunakan= 20 µl
ataumaumengambillarutanstoksebanyak132µl
•Pasang tip disposable
•Tekanpenyedotpipet sampaipada batas
pertama.

29. Cara PengoperasianMikropipet(Cont….)
•Benamkan tip kedalam cairan yang akan
dipindahkan
•PengeluaranSampel
Untukmengeluarkansampeldaripipet caranyasebagaiberikut:
a.Sentuhkantip pada dindingwadahpenampungsampel.
b.Tekanpenyedotsampaipembataspertama.
c.Tahanpaling tidak1 detik, 1-2 detikuntukP-1000, 2-3 detik
untukP-5000 ataulebihlama untuksampelyang mempunyai
viskositasyang lebihtinggi.
d.Tekanpenyedotkepembataskeduauntukmengeluarkansisa-
sisacairan.

30. Media / BahanYang TidakDapatDisterilkandgnAutoklaf
•Bahanygtidaktahan
panas, ex: serum,
antibiotic, hormone,
enzim
•Pelarutorganic, ex;
fenol
•buffer