primeira aula - U1S1 Bacteriologia Clínica.pdf

A Bacteriologia Clínica é a especialidade que estuda bactérias de relevância para a saúde humana, focando no seu diagnóstico, identificação e tratamento de infecções. Utiliza técnicas como coloração de Gram e métodos modernos como sequenciamento genético e espectrometria de massa para identificar patógenos, auxiliar na escolha de antibióticos e combater a resistência antimicrobiana

1. Características
Bacterianas
BACTERIOLOGIA CLÍNICA
Prof. Me. Diego Fernandes Alarcon

2. Bacteriologia
•Bacteriologia:estudodasbactérias.
•Bacteriologia:ramoda
Microbiologiaqueestudaas
bactérias.
•Microbiologia:ramodaBiologia
queestudaosmicrorganismos.
•Bactérias:seresmicroscópicos,
portantoobservadasem
microscopiaóptica,comum
tamanhoquepodevariarde0,2
micrômetro(µm)dediâmetroa
10,0µmdecomprimento.

3. Morfologia das
bactérias
Tiposdebactérias:
•Bastonetesoubacilos
•Espirilos
•Cocos

4. Morfologia
das bactérias
•Bastonetesoubacilos:bactériasretangularesou
emformadebastão,longosoucurtos,coma
extremidaderetaoucomapontaarredondada.
•Àsvezesapresentamformatodevírgula.
•Podemserencontradasisoladasouagrupadas,aos
pares(diplobacilos)eemcadeias(estreptobacilos).

5. Morfologia das
bactérias
Espirilos:bactérias
quepossuem
formatodehéliceou
espiralese
apresentamde
formaisolada.

7. Morfologia das bactérias
•Cocos:bactériasredondasque
possuemformatodeesfera.
•Podemserencontradasdeforma
isoladaouagrupada,emarranjode
duasesferas(diplococos),emcadeia
(estreptococos)aqualapresentaum
aspectoquelembraumcolarde
pérolas,agrupadasdeformaaleatória
(estafilococos),lembrandooformato
deumcachodeuva,emgrupode
quatrococosunidos(tétrades)eem
grupodeoitococosunidosemformato
decubo(sarcinas).

9. Classificaçãoe
estruturasbacterianas
•Asbactériassãoseresunicelulares,
constituídos,comoditoanteriormente,
porumamembranaplasmáticae
externamenteaelaapresentaumaparede
celular,alémdoconteúdocitoplasmático.
Entretantoessegrupodemicrorganismos
apresentaalgumasparticularidades,que
serãodescritasaseguir:
•Membranaplasmática: possui
invaginaçõesedobramentos,
denominadasdemesossomosquesão
responsáveispelarespiraçãocelular.

10. Classificaçãoe
estruturas
bacterianas
•Citoplasma:matriznutritiva,semifluida,
gelatinosa,localdeocorrênciadasreações
químicasondeestãoinseridososribossomose
grânuloscontendosubstânciasarmazenadas
comoamido,lipídios,ferro.Dispersosno
citoplasmahátambémumalongacadeiadeDNA
condensadaeaderidaàmembranacelular,
responsávelportransmitirascaracterísticas
hereditárias.Algumasespéciespossuemo
plasmídeo,éumtipodeDNAcircularque
proporcionaasbactériasresistênciaaos
antibióticos.
•Paredecelular:éumaestruturaquedefinea
formacelular,sendosemirrígidaeconstituídade
mureína(peptideoglicano).

11. Classificação e
estruturas
bacterianas
•Flagelos:formadosporapêndicesmuitofinos(10a20
nmdeespessura),sãoresponsáveispelomovimento,
pelalocomoçãoeestãopresentesemalgumas
bactérias.Comprimentonormalmenteémuitomaior
queotamanhodacélulaeseudiâmetroépequeno.
Podemserúnicosoumúltiplos,distribuídosounão
portodaacélula.Quandoosflagelossãodistribuídos
portodaasuperfíciedacélula,asbactériassão
chamadasdebactériasperitríquias.Quandohátufos
deflageloslocalizadosemumaúnicaextremidade,
sãochamadasdebactériaslafotríquiase,noscasos
deumoumaisflageloemcadaextremidade,são
denominadasdebactériasanfitríquias.Temosainda
asbactériascomumúnicoflagelopolar,nomeadasde
bactériasmonotríquias.
•Pilioufímbria:apêndicesmuitofinos,maisfinosque
osflagelos,eapresentamestruturarígida.São
responsáveispelaaderênciaetransportedematerial
genético.

12. Bactérias

13. Para melhor compreensão das estruturas bacterianas observe a ilustração abaixo.
https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/5/5a/Average_prokaryote_cell-_en.svg

14. Classificação
e estruturas
bacterianas
•Abactériapodeserclassificadaemgram-
positivaougram-negativaconformea
espessuradesuaparedecelular.
•Asgram-positivaspossuemmuitas
camadasdepeptideoglicano,tornando-as
espessaserígidas,alémdeserem
constituídastambémdeácidosteicóicos,
quetêmoimportantepapelno
crescimentocelular,impedindoaruptura
daparedecelular,fornecendotambém
reconhecimentoespecífico(antigênico)da
paredeefacilitandoaidentificaçãodo
tipodebactéria.

15. Em que local da
célula os antibióticos
agem para combater
a infecção
bacteriana e como
eles atuam?
Osantibióticosagemnaparede
celular,sínteseproteicaenasíntese
deácidosnucleicos(DNA/RNA),
sendodivididosemduasclasses:
•Bactericidas:atuamnamembrana
plasmáticaouparedecelularbacteriana,
impedindoasuaproduçãoe,
consequentemente,asuadestruição.
•Bacteriostáticos:impedemamultiplicaçãoe
proliferaçãobacteriana,agindosobreoDNA
bacteriano,bloqueandoareplicação,a
transcriçãoeasíntesedeproteínas

16. Meios de cultura

17. Características
dos meios de
cultura
•Meiosdecultura:preparaçõessólidas,
semissólidasoulíquidas,simplesou
complexas,estéreisquepermitemo
crescimentodemicrorganismos.
•Funções:fornecernutrientesparao
crescimentobacteriano–cultivoinvitro,
podendoserespecíficosparacada
microrganismoounão,identificamsua
família,gêneroeespécieeformam
culturabacterianaapartirdeuminóculo.
Inóculo:amostradematerialcontendo
geralmenteumapequenaquantidadede
microrganismos.

18. Características
dos meios de
cultura
Paraqueocorraocrescimentode
microrganismos,sãonecessáriosfatores
físicosequímicos:
•Fatoresfísicos:temperatura,pHepressão
osmótica.
•Fatoresquímicos:fontesdecarbonoe
nitrogênio(proteínas,carboidratose
lipídeos),enxofre(síntesedeproteínase
vitaminas),fósforo(síntesedeácidos
nucleicosefosfolipídeosdamembrana
celular),oligoelementos(ferro,cobre,
molibdênio,zinco–atividadeenzimática),
oxigênio(algunssãoanaeróbicos)e
fatoresorgânicosdecrescimento.

19. Classificação
dos meios de
cultura
Quantoàconsistência:
•Líquidosoucaldos:osnutrientesestãodissolvidos
emumasoluçãoaquosaeacondicionadosemtubos
deensaio.Ocrescimentobacterianonessemeio
mudaseuaspecto,ouseja,omeiosofreuma
turvação.
•Semissólido:possuemnasuacomposição,alémdos
nutrientes,umapequenaporcentagemdeum
polissacarídeoprovenientedealgasmarinhas,
chamadoágar,utilizadocomoagentesolidificador
(semelhanteàgelatina),esteágaréadicionadoao
meiolíquido.Sãogeralmenteutilizadosemtubos.
•Sólidos:possuememsuaconstituição,alémdomeio
líquido,umaporcentagemmaiordeágar.Podemser
dispostosemtubosouemPlacasdePetri,deacordo
comanecessidadeondeomeiosesolidifica.

20. Funções dos
meios de
cultura •Ricoouenriquecimento:geralmentesãolíquidos,ricos
emnutrientes.Permitemqueasbactériascontidasem
umaamostraaumentemdenúmero.Aomeiodecultura
comumsãoadicionadassubstânciasenriquecedoras,
comosangue,soro,ovo,extratodelevedurasetc.Ex.:
CaldoBrainHeartInfusion(BHI)eCaldoTetrationato.
•Seletivo:aomeiocomumsãoadicionadosinibidoresque
tornaminviávelocrescimentodecertosmicrorganismos,
comafinalidadedeselecionarasespéciesquesedeseja
isolareimpedirodesenvolvimentodeoutrosgermes.
Ex.:ágarMacConkey,queinibeocrescimentode
bactériasgram-positivas,podendo,dessaforma,
selecionarasgram-negativas.

21. Função dos
meios de
cultura
•Diferencial:permiteadiferenciação,adistinçãodevários
gêneroseespéciesdemicrorganismos.Emsuacomposição,
possuisubstânciasquepermitemdiferenciarmicrorganismos
parecidos(evidenciadanamudançanacoloraçãodascolônias
debactérias).Ex:ágarMacConkey,utilizadoparadiferenciar
bacilosgram-negativosisoladosdeamostrasdefezes.
•Indicador/diferencial:possibilitaaanálisedaspropriedades
bioquímicaseverificaçãodefunçõesfisiológicasede
microrganismos,facilitandosuaidentificação.Omaissimplesé
aqueleusadonoestudodasreaçõesdefermentação,indicando
seoorganismofermentaalactoseounãopelacoloraçãodas
colônias.Ex.:ágarTripleSugarIron(TSI)eágarCitratode
Simmons.
•Transporte:nãopossuinutrientes,contendoapenasumagente
redutor(tioglicolatooucisteína).Previneadesidrataçãode
secreçõesduranteotransporteeevitaaoxidaçãoe
autodestruiçãoenzimáticadospatógenospresentes.Ex.:Meio
deStuart,MeiodeCary-BlaireCaldoTioglicolato.

22. Preparo e utilização dos meios
de cultura
•Preparotécnicasimples
semelhanteaopreparode
“gelatina”.
•Antesdeiniciaropreparoleiaas
recomendaçõesdofabricante.
•Importante:osmateriaisutilizados
(vidrarias)devemestar
esterilizados.

23. Preparo do
meio de
cultura
Seguirinstruçõesdofabricante:
•Pesaroágarasertrabalhadoemumabalança
analíticaousemi-analíticacomoauxíliodeuma
papel-alumíniooubéquer.Importantetarara
balança(zerar)antesdecolocaropópara
pesagem.
•Transferiroágarparaumbéquercomcapacidade
maiorqueovolumeasertrabalhado.
•Medirovolumedeáguadestiladaoudeionizada,
comoauxíliodeumaproveta,eadicionaraoágar
metadedovolumedaágua.
•Dissolveroágarnaáguacomoauxíliodeum
bastãodevidro,apósasoluçãoficarhomogênea
acrescentarorestantedaágua.
•Transferirasoluçãoparaumerlenmeyer.

24. Preparo do
meio de
cultura •ComoauxíliodobicodeBunsenetelade
amianto,aquecerofrasco.Importanteutilizar
luvastérmicas.Omeionãodeveráferver,apenas
seraquecido.
•Vedaroerlenmeyercomoauxíliodeumtampão
dealgodãoepapelkraft.Levarparaaautoclave
por15'a121C.
•Distribuiromeiodeculturaemplacasdepetriou
tubos,quedeverãoestaresterilizados,sempre
respeitandoaáreadesegurançaqueveremosa
seguir.
•Levaremgeladeiraparaendurecer.

25. Como ocorre a identificação
de um microrganismo?
•Paraisolar,cultivareidentificar
omicrorganismoaser
estudado,sãonecessárias
técnicasadequadasque
permitamumrápido
crescimentosemcontaminação.

26. Técnicas de
semeadura e
isolamento de
microrganismos
•Métodoutilizadoparatransferirinóculos
bacterianosdeummeiodeculturaou
materialaseranalisado(secreções,
alimentos)paraumoutromeiode
cultura.
•Importante:garantirquenãoocorraa
contaminaçãodomeioparaqueapenas
omicrorganismodesejadosejasemeado,
fazendousodetécnicasassépticas.

27. Técnicas de assepsia
Astécnicasdeassepsiaincluem:
•fazeradesinfecçãodaáreadetrabalho(bancada)eantissepsiadas
mãosantesedepoisdequalquertrabalho/experimento;
•trabalharsempredentrodaáreadesegurança,queconsisteem
umaáreadeaproximadamente10cmaoredordobicodeBunsen;
•esterilizartodoomaterial,comoalçaseagulhasbacteriológicas,
antesedepoisdouso,aquecendodabaseparaaponta;
•flambarabocadosfrascosetubosantesedepoisdasinoculações,
evitandoacontaminaçãodomaterial/culturaasertrabalhadoe
garantindoquesomenteomicrorganismodesejadoserá
inoculado.

28. Semeaduras
em meio
sólido
•Utilizadasnoisolamentoeobtençãodeculturaspuras
(colôniasisoladasdeumúnicomicrorganismo,
separando-odeoutrosqueseencontramnomesmo
material)deamostrasquecontenhammaisdeuma
microbiotaeparaoestudodamorfologiacolonial.
•Atécnicaconsisteemdepositarsobreumpontoda
superfíciedoágarumpoucodomaterialaserestudado
e,nasequência,espalhá-loemoutroslugarescomo
auxíliodaalçadeplatina.Dessaforma,nãoteremosum
aglomeradodomaterialqueimpossibilitariaa
identificação,massimquantidadesmenoresformando
colôniasisoladas.
•Oquegaranteosucessodatécnicaéograndenúmerode
estrias,ocuidadoparaquenãoocorraaperfuraçãodo
meio,nãorepassaraalçaemlocaljáestriadoecoletar
umapequenaquantidadedematerialparasemear.

29. Técnica de
semeadura por
esgotamento
Atécnicadesemeadura
poresgotamentopodeser
trabalhadadeduas
formas:
•esgotamentodomaterial
emestriassimples
•esgotamentodomaterial
emestriasmúltiplas

30. Esgotamento por estria
simples
•Esgotamentoporestriasimples:
transferirumaalçadadacultura
parameiosólidoemplacaeestriar
comaalçabacteriológicasobreo
meioemmovimentodedezigue-
zague(estriasinuosa)oucomo
umalinharetasobreomeio(estria
reta).

31. Esgotamento por estrias
múltiplas
•Esgotamentoemestriasmúltiplas:transferiruma
alçadadaculturaparameiosólidoemplacaeestriar
comaalçabacteriológicasobreomeio.
•Aplacaédivididaem4quadranteseainoculaçãopode
serfeitade2tipos:
•Em3estrias:estriaremmetadedaplaca,com
movimentosdezigue-zague.Quandoatingirametade,
giraraplaca90°eestriaratéametade(1/4daplaca),
girarmais90°eestriaromeiorestante.
•Em4estrias:estriaraté2/3dametadedaplaca,girar
90°,estriar2/3dopróximoquadrante(1/4daplaca),
girar90°,estriarmais2/3dopróximoquadrante(1/4
daplaca),girar90°eestriarorestantedomeio.

32. Semeadura em meio líquido
•Flambaraalçaedeixaresfriar,retirara
tampa(deroscaoutampãodealgodão)
dotuboeretirarcomalçaumaporçãode
amostra;fecharotuboquecontéma
amostra;retiraratampadotuboquevai
serinoculado;introduziraalçaaté
aproximadamente¼deprofundidadedo
meio;fecharotubo

33. Semeadura em meio sólido -
tubo inclinado
•Flambaraalçaedeixaresfriar;retirara
tampa(deroscaoutampãodealgodão)
dotuboeretirarcomaalçaumaporção
deamostra;reporatampanotuboque
contémaamostra;retiraratampadotubo
quevaiserinoculado;introduziraalçaaté
abasedasuperfíciedomeioinclinado,
passando-aaolongodasuasuperfícieem
movimentosdezigue-zague;fecharo
tubo.

35. Semeaduras
•Semeaduraemmeiosólido:esgotamentoemestriasmúltiplas temo
objetivodeobtercolôniasisoladas.
•Semeaduraemmeiolíquido:éumrepiquegenéricoparacrescimento
bacterianoemmeiolíquido.
•Semeaduraemmeiosólido:tuboinclinadoobtençãodeintensamassade
microrganismos.
Apósarealizaçãodecadatécnicadesemeadura,éimportantelevaro
materialparaestufaem30a37Cpor48horasparaocrescimentodos
microrganismos.

36. Bibliografia
recomendada
•YOKOMIZO,C.etal.Bacteriologiaclínica.Porto
Alegre:SAGAH,2019.
•BROOKS,G.F.;CAROLL,K.C.;BUTEL,J.S.;MORSE,
S.A.;MIETZNER,T.A.MicrobiologiaMédicade
Jawetz,MelnickeAdelberg(Lange).PortoAlegre:
GrupoA,2014.
•MADIGAN,M.T.;MARTINKO,J.M.;BENDER,K.S.;
BUCKLEY,D.H.;STAHL,D.A. Microbiologiade
Brock.PortoAlegre:GrupoA,2016.
•LEVINSON,W. MicrobiologiaMédicae
Imunologia.PortoAlegre:GrupoA,2016
•ENGELKIRK,P.G.;DUBEN-ENGELKIRK,J.Burton:
microbiologiaparaasciênciasdasaúde.9ed.Rio
deJaneiro:GuanabaraKoogan,2016.
•TORTORA,G.J.;FUNKE,B.R.;CASE,C.L.
Microbiologia.12ed.PortoAlegre:Artmed,2017.