Quimioluminescencia

Aula sobre Quimioluminescencia da disciplina Imunologia I

1. UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA INSTITUTO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE – ICS DEPARTAMENTO DE BIOINTERAÇÃO DISCIPLINA: IMUNOLOGIA I – ICS 045 IMUNOQUIMIOLUMINESCÊNCIA Trabalho realizado pela Doutoranda de Imunologia da UFBA Mírian Flores Rebouças sob orientação dos Professores Robert Schaer , Roberto Meyer, Claudia Brodskin e Ricardo Portela. Atualizado em Fevereiro de 2010.

2. CARACTERÍSTICAS BÁSICAS

3. CARACTERÍSTICAS BÁSICAS Método imunológico baseado na emissão de energia luminosa a partir de uma reação química. Quantifica antígeno ou anticorpo presente em fluidos corporais. Muito usado para dosagens de hormônios, marcadores tumorais e outras proteínas séricas. Um dos métodos de escolha para substituir o radioimunoensaio .

4. CARACTERÍSTICAS BÁSICAS DIFERENÇAS PARA O RADIOIMUNOENSAIO: Radioimunoensaio: Primeira técnica a ser desenvolvida para dosagem hormonal e de outras substâncias presentes em pequenas concentrações em fluídos biológicos, sendo um método muito sensível para análise quantitativa antígeno-anticorpo. Limitações do radioimunoensaio: envolve material radioativo. a validade desse reagente reativo é curta. demora na execução do teste.

5. CARACTERÍSTICAS BÁSICAS VANTAGENS DA QUIMIOLUMINESCÊNCIA: Opção de ensaio com elevada sensibilidade e especificidade adequada. Exame basicamente automatizado e rápido. Várias amostras podem ser analisados e distintas moléculas podem ser quantificadas de uma só vez.

6. CARACTERÍSTICAS BÁSICAS COMPOSTOS QUIMIOLUMINESCENTES USADOS: Derivados de luminol Necessita de um catalisador. Apresenta uma série de interferências de fundo ao emitir sua luz. Reação lenta e gradual. Dependente de pH

7. CARACTERÍSTICAS BÁSICAS COMPOSTOS QUIMIOLUMINESCENTES USADOS: É steres de acridina Não requer um catalisador. Baixas interferências de fundo. Muito estável, grande vida média. Alto rendimento – linear. Tempo de reação rápido – medição mais fácil A conjugação não limita o rendimento. Alta sensibilidade.

8. CARACTERÍSTICAS BÁSICAS A técnica se baseia na ligação de antígeno – anticorpo. Um dos dois reagentes é conjugado a uma substância que, quando ativada, emite luz visível. Então, a emissão de luz é proporcional ao reagente pesquisado.

9. PASSOS DA TÉCNICA

10. Adição de anticorpo monoclonal específico para o antígeno pesquisado conjugado a enzima. Uma microesfera de poliestireno é revestida com anticorpo monoclonal contra antígeno analisado Adição do soro do paciente, que é incubado com agitação intermitente. Lavagem para retirada do antígeno não fixado Incubação do conjugado e mais uma lavagem para tirar o anticorpo não fixado PASSOS DA TÉCNICA Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Adição do substrato da enzima, em seguida, incubação. A adição de substrato quimioluminescente sofre hidrólise na presença da enzima, produzindo substâncias instáveis que geram emissão de fótons (luz). Y Y Anticorpo monoclonal Substrato Conjugado Antígeno do soro do paciente

11. Estes impulsos são lidos em “contagens” de luz por segundo ( cps ). Essa unidade é proporcional a quantidade de antígenos presentes na amostra . Estes fótons são medidos través de um fotomultiplicador (PMT) que tem a função de transformar a luz emitida pelos fótons em impulsos elétricos. PASSOS DA TÉCNICA

12. Edwards, R. Imunnodiagnostics, a pratical approach. Oxford University Press. 281 pg, 1999. Howard, G.C.; Kaser, M.R. Making and using antibodies, a pratical handbook.CRC Press. 396 pg, 2006. http://alvaro.com.br/home/palestras/8 http://quimicanova.sbq.org.br/qn/qnol/1993/vol16n3/v16_n3_%20(6).pdf http://www2.ucg.br/cbb/professores/49/Biomedicina/6_periodo/Quimioluminescencia.pdf Zhao, L.; Sun, L.; Xiaogang Chu. Chemiluminescence immunoassay. Trends in Analytical Chemistry, Vol. 28, No. 4, 2009. REFERÊNCIAS