2a CLASE marcacion SONDAS Y tecnica PCR.ppt

tecnicas biologia molecular

1. 
MARCACION DE SONDASMARCACION DE SONDAS

PCR Y APLICACIONES:PCR Y APLICACIONES:
CONDICIONES DE LA REACCIONCONDICIONES DE LA REACCION
PRIMERS DEGENERADOSPRIMERS DEGENERADOS
RT – PCR RT – PCR
REAL TIME PCRREAL TIME PCR
Dra. Liliana N. GuerraDra. Liliana N. Guerra
BIOLOGIA MOLECULAR EN BIOLOGIA MOLECULAR EN
MEDICINA MEDICINA

2. Marcación de SONDASMarcación de SONDAS

LA PREPARACION DE LA SONDA ES CRITICA PARA LAS LA PREPARACION DE LA SONDA ES CRITICA PARA LAS
TECNICAS DE HIBRIDIZACION MOLECULARTECNICAS DE HIBRIDIZACION MOLECULAR
EN LA HIBRIDIZACION:EN LA HIBRIDIZACION:
LA SONDA Y EL ACIDO NUCLEICO A HIBRIDIZAR DEBEN LA SONDA Y EL ACIDO NUCLEICO A HIBRIDIZAR DEBEN
ESTAR COMO SIMPLE CADENA ESTAR COMO SIMPLE CADENA

SOUTHERN: SE TRATA EL GEL CON HCl PARA SOUTHERN: SE TRATA EL GEL CON HCl PARA
DESNATURALIZAR EL ADN, SE NEUTRALIZA CON NaOH Y DESNATURALIZAR EL ADN, SE NEUTRALIZA CON NaOH Y
SE TRANSFIERE A LA MEMBRANA EN SOLUCION DE ALTA SE TRANSFIERE A LA MEMBRANA EN SOLUCION DE ALTA
FUERZA IONICAFUERZA IONICA

NORTHERN: NO ES NECESARIO EL TRATAMIENTO, SOLO NORTHERN: NO ES NECESARIO EL TRATAMIENTO, SOLO
MANTENER ARN SIN ESTRUCTURA SECUNDARIAMANTENER ARN SIN ESTRUCTURA SECUNDARIA

3. Marcación de SONDASMarcación de SONDAS
TECNICAS MAS USADAS:TECNICAS MAS USADAS:

NICK – TRANSLATIONNICK – TRANSLATION

RANDOM PRIMER EXTENSIONRANDOM PRIMER EXTENSION

OLIGONOCLEOTIDES PROBESOLIGONOCLEOTIDES PROBES
SE USA UN NUCLEOTIDO MARCADO:SE USA UN NUCLEOTIDO MARCADO:

α–32P–d NTP, α-35S–d NTP, α–125 I–d NTP: α–32P–d NTP, α-35S–d NTP, α–125 I–d NTP:
GENERALMENTE d CTPGENERALMENTE d CTP

biotina-11-d UTP, dioxigenina-11-d UTPbiotina-11-d UTP, dioxigenina-11-d UTP

4. Marcación de SONDASMarcación de SONDAS

LA SONDA PUEDE SER/ O NO RADIOACTIVA, LA SONDA PUEDE SER/ O NO RADIOACTIVA,
EN TODOS LOS CASOS DEBE TENER ALTA EN TODOS LOS CASOS DEBE TENER ALTA
ACTIVIDAD ESPECIFICAACTIVIDAD ESPECIFICA

DETERMINACION DE ACTIVIDAD DETERMINACION DE ACTIVIDAD
ESPECIFICA: UNA VEZ MARCADO EL ADN SE ESPECIFICA: UNA VEZ MARCADO EL ADN SE
PRECIPIA CON TCA 5% Y SE CUENTA LA PRECIPIA CON TCA 5% Y SE CUENTA LA
MARCA PRECIPITADA MARCA PRECIPITADA

AE = AE = TOTAL DE CUENTAS INCORPORADASTOTAL DE CUENTAS INCORPORADAS
MASA DE ACIDO NUCLEICO USADOMASA DE ACIDO NUCLEICO USADO

5. Marcación de SONDASMarcación de SONDAS
NICK TRANSLATIONNICK TRANSLATION

ACTUAN DOS ENZIMAS: DNasa 1 Y DNApolimerasa 1ACTUAN DOS ENZIMAS: DNasa 1 Y DNApolimerasa 1

SE UTILIZA ADN DOBLE CADENASE UTILIZA ADN DOBLE CADENA

SE INTRODUCE NICK (AGUJERO) AL AZAR EN UNA SE INTRODUCE NICK (AGUJERO) AL AZAR EN UNA
DE LAS CADENAS DEL ADNDE LAS CADENAS DEL ADN

SE USA ENZIMA CON ACTIVIDAD 5’-3’ SE USA ENZIMA CON ACTIVIDAD 5’-3’
EXONUCLEASA: REMUEVE EL d NTP DEL EXTREMO EXONUCLEASA: REMUEVE EL d NTP DEL EXTREMO
5’ (pol 1) Y EL NICK SE VA TRASLADANDO5’ (pol 1) Y EL NICK SE VA TRASLADANDO

SE SEPARA EL MARCADO DEL RESTO POR SE SEPARA EL MARCADO DEL RESTO POR
PRECIPITACION CON ETANOL O COLUMNA PRECIPITACION CON ETANOL O COLUMNA
SEPHADEXSEPHADEX

6. Marcación de SONDASMarcación de SONDAS

7. Marcación de SONDASMarcación de SONDAS
RANDOM PRIMERRANDOM PRIMER

SE UTILIZA UNA SECUENCIA DE OLIGONUCLEOTIDOS SE UTILIZA UNA SECUENCIA DE OLIGONUCLEOTIDOS
CONOCIDA O DE TIPO HEXANUCLEOTIDOS CONOCIDA O DE TIPO HEXANUCLEOTIDOS
(CUALQUIERA CONSENSO)(CUALQUIERA CONSENSO)

SE USA ADN SIMPLE CADENA (SE DESNATURALIZA POR SE USA ADN SIMPLE CADENA (SE DESNATURALIZA POR
CALOR)CALOR)

SE USA ENZIMA QUE NO POSEA ACTIVIDAD 5’ – 3’ SE USA ENZIMA QUE NO POSEA ACTIVIDAD 5’ – 3’
EXONUCLEASA PARA QUE NO DEGRADE AL PRIMER EXONUCLEASA PARA QUE NO DEGRADE AL PRIMER
(Klenow)(Klenow)

SE GENERA CADENA COMPLEMENTARIA SE GENERA CADENA COMPLEMENTARIA

SE SEPARA EL MARCADO DEL RESTO POR SE SEPARA EL MARCADO DEL RESTO POR
PRECIPITACION CON ETANOL O COLUMNA SEPHADEXPRECIPITACION CON ETANOL O COLUMNA SEPHADEX

8. Marcación de SONDASMarcación de SONDAS

9. Marcación de SONDASMarcación de SONDAS
NICK
TRANSLATION
RANDOM PRIMER
MASA A MARCAR 50 – 500 ng 25 – 250 ng
ACTIVIDAD
ESPECIFICA
5 x 10
8
dpm/ug 1 X 10
9
dpm / ug
LARGO del
FRAGMENTO
MARCADO
200 – 500 d NTP 200 – 2000 d NTP
SONDA NO RADIOACTIVA:
SE USA 1 ug DE MASA A MARCAR
SENSIBILIDAD COMO RAD. CON AE = 1 x 10
8
dpm/ug

10. Marcación de SONDASMarcación de SONDAS
MARCACION DE OLIGONUCLEOTIDOSMARCACION DE OLIGONUCLEOTIDOS

SE UTILIZAN PARA REALIZAR SCREENING DE SE UTILIZAN PARA REALIZAR SCREENING DE
BIBLIOTECASBIBLIOTECAS

SE MARCAN USANDO LA ENZIMA SE MARCAN USANDO LA ENZIMA
DEOXINUCLEOTIDO TRANSFERASA (TdT) QUE DEOXINUCLEOTIDO TRANSFERASA (TdT) QUE
AGREGA d NTP AL EXTREMO 3’AGREGA d NTP AL EXTREMO 3’

TEMPLADO DE 20 a 30 NTTEMPLADO DE 20 a 30 NT

MASA A MARCAR: 20 ngMASA A MARCAR: 20 ng

ACTIVIDAD ESPECIFICA: 5 x 10 ACTIVIDAD ESPECIFICA: 5 x 10
66
dpm/ ug dpm/ ug

SE OBTIENE BAJA SEÑAL QUE AYUDA A NO TENER SE OBTIENE BAJA SEÑAL QUE AYUDA A NO TENER
FONDO “SUCIO”FONDO “SUCIO”

11. Marcación de SONDASMarcación de SONDAS

12. Polymerase chain reaction (PCR)
 Inventada en 1985 por Kary B. Mullis (Premio Nobel
de Química, 1993)
Se usa en criminología/medicina forense (identificar
personas a través de muestras de sangre, cabellos, por
comparación de DNA)
 En el área de evolución (obtener enormes cantidades de
DNA a partir de fósiles que contienen trazas de DNA).
Revolucionó el diagnóstico de defectos genéticos,
(mutaciones), la detección de virus (HIV, HCV).
Permite hacer millones de copias de una muestra ínfima
de DNA.

13. Polymerase chain reaction (PCR)

14. Polymerase chain reaction (PCR)

15. Polymerase chain reaction (PCR)
Si repetimos este ciclo (desnaturalización, annealing,
extensión) muchas veces logramos una amplificación
exponencial

16. Polymerase chain reaction (PCR)

17. Polymerase chain reaction (PCR)

18. Polymerase chain reaction (PCR)
EL PRODUCTO FORMADO A PARTIR DE LA PCR SE PUEDE LLAMAR
AMPLICON. ES ESPECIFICO Y SOLO DEBE VERSE UNA BANDA POR
AMPLIFICACION CON PRIMERS ESPECIFICOS.

19. Polymerase chain reaction (PCR)
CONCEPTOS BASICOS:CONCEPTOS BASICOS:

ESPECIFICIDAD: GENERACION DE UN UNICO PRODUCTO DE ESPECIFICIDAD: GENERACION DE UN UNICO PRODUCTO DE
AMPLIFICACIONAMPLIFICACION

EFICIENCIA: MAXIMA PRODUCCION DE AMPLIFICACION EN EFICIENCIA: MAXIMA PRODUCCION DE AMPLIFICACION EN
FUNCION DEL NUMERO DE CICLOSFUNCION DEL NUMERO DE CICLOS

FIDELIDAD: NUMERO DE ERRORES QUE COMETE LA DNA FIDELIDAD: NUMERO DE ERRORES QUE COMETE LA DNA
POLIMERASA DURANTE LA COPIAPOLIMERASA DURANTE LA COPIA

SENSIBILIDAD: MINIMA CANTIDAD DE DNA QUE SE NECESITA SENSIBILIDAD: MINIMA CANTIDAD DE DNA QUE SE NECESITA
PARA OBTENER UNA GRAN CANTIDAD DE COPIASPARA OBTENER UNA GRAN CANTIDAD DE COPIAS

20. VARIANTES DE PCR:VARIANTES DE PCR:

NESTED PCR: NESTED PCR:
SE REALIZA UNA SEGUNDA REACCION DE PCR A PARTIR DEL SE REALIZA UNA SEGUNDA REACCION DE PCR A PARTIR DEL
AMPLICON, USANDO PRIMERS INTERNOS A LA 1ª AMPLICON, USANDO PRIMERS INTERNOS A LA 1ª
AMPLIFICACIONAMPLIFICACION
AUMENTA LA SENSIBILIDAD : SE REALIZAN 2 REACCIONES AUMENTA LA SENSIBILIDAD : SE REALIZAN 2 REACCIONES
CONSECUTIVAS DE PCRCONSECUTIVAS DE PCR
AUMENTA LA ESPECIFICIDAD: SE UTILIZAN OTROS PRIMERS AUMENTA LA ESPECIFICIDAD: SE UTILIZAN OTROS PRIMERS
INTERNOS ESPECIFICOSINTERNOS ESPECIFICOS

PCR MULTIPLEX: PCR MULTIPLEX:
UNA REACCIÓN DE PCR CON VARIOS PARES DE PRIMERS QUE UNA REACCIÓN DE PCR CON VARIOS PARES DE PRIMERS QUE
AMPLIFICAN DIFERENTES SECUENCIASAMPLIFICAN DIFERENTES SECUENCIAS
Polymerase chain reaction (PCR)

21. Polymerase chain reaction (PCR)
DNA polimerasas para PCR :Termoestables

22. Polymerase chain reaction (PCR)

23. Polymerase chain reaction (PCR)

24. Polymerase chain reaction (PCR)

25. Polymerase chain reaction (PCR)
APLICACION LONGITUD TEMPLADO
HASTA
ENZIMA
RUTINA

5kb Taq Pol
ALTA ESPECIFICIDAD
Tº AMBIENTE

5kb Platinum Taq Pol
ALTA ESPECIFICIDAD
ALTA FIDELIDAD

12kb Platinum Pfu Pol
SIN AGREGADO DE A (PARA
GENOTIPIFICACION)

500pb Platinum Genotype Pol
ALTO CONTENIDO DE GC
CODONES REPETIDOS
Dependiendo de la
polimerasa
Taq, Platinum Taq

26. Polymerase chain reaction (PCR)

27. Polymerase chain reaction (PCR)
Cómo diseñamos los primers?
Tº MELTINGTº MELTING

MAYOR DE 20 nt: MAYOR DE 20 nt:
Tm = 8105 + 16.6 log M + 0.41 (G-C) – 500/ longitudTm = 8105 + 16.6 log M + 0.41 (G-C) – 500/ longitud

HASTA 20 nt:HASTA 20 nt:
Tm = 4 ∑ ( G + C) + 2 ∑ (A + T)Tm = 4 ∑ ( G + C) + 2 ∑ (A + T)

28. Polymerase chain reaction (PCR)

29. Polymerase chain reaction (PCR)

30. Polymerase chain reaction (PCR)

31. Polymerase chain reaction (PCR)

32. Polymerase chain reaction (PCR)
RESUMENRESUMEN

LONGITUD DE 18 a 24 d NTPLONGITUD DE 18 a 24 d NTP

ESPECIFICOSESPECIFICOS

Tm = 55 a 75 C, CON Tm SIMILARES ENTRE SITm = 55 a 75 C, CON Tm SIMILARES ENTRE SI

DISEÑAR PRIMERS CON CANTIDAD APROXIMADAMENTE 50% DE GC Y DISEÑAR PRIMERS CON CANTIDAD APROXIMADAMENTE 50% DE GC Y
DISTRIBUCION AL AZARDISTRIBUCION AL AZAR

EVITAR PRIMERS CON SECUENCIAS DE POLIPURINAS Y/O EVITAR PRIMERS CON SECUENCIAS DE POLIPURINAS Y/O
POLIPIRIMIDINAS (Poly GC: DISMINUYE ESPECIFICIDAD - Poly AT: POLIPIRIMIDINAS (Poly GC: DISMINUYE ESPECIFICIDAD - Poly AT:
DISMINUYE EFICIENCIA)DISMINUYE EFICIENCIA)

EVITAR SECUENCIAS QUE FORMEN ESTRUCTURAS SECUNDARIASEVITAR SECUENCIAS QUE FORMEN ESTRUCTURAS SECUNDARIAS

CONTROLAR QUE LOS PRIMERS NO HIBRIDICEN ENTRE SICONTROLAR QUE LOS PRIMERS NO HIBRIDICEN ENTRE SI

EVITAR MAS DE 3 CG SEGUIDAD EN EL EXTREMO 3´EVITAR MAS DE 3 CG SEGUIDAD EN EL EXTREMO 3´

COMENZAR Y TERMINAR CON PURINASCOMENZAR Y TERMINAR CON PURINAS

EXISTEN PROGRAMAS DNAstar PARA DISEÑO DE PRIMERSEXISTEN PROGRAMAS DNAstar PARA DISEÑO DE PRIMERS

33. PRIMERS DEGENERADOS:PRIMERS DEGENERADOS:

SE USAN CUANDO QUIERO AMPLIFICAR UN SE USAN CUANDO QUIERO AMPLIFICAR UN
GEN Y SOLO CONOZCO SU SECUENCIA DE GEN Y SOLO CONOZCO SU SECUENCIA DE
AMINOACIDOSAMINOACIDOS

SE REALIZAN TODOS LOS PRIMERS POSIBLES SE REALIZAN TODOS LOS PRIMERS POSIBLES
PARA UNIRLOS A LA SECUENCIA DE INTERESPARA UNIRLOS A LA SECUENCIA DE INTERES

NO LOS DISENO LOS DISEÑAMOS EN NUESTRO ÑAMOS EN NUESTRO
LABORATORIO, SE PIDENLABORATORIO, SE PIDEN

Polymerase chain reaction (PCR)

34. Polymerase chain reaction (PCR)

35. PRIMERS DEGENERADOS:PRIMERS DEGENERADOS:

SE USAN SECUENCIAS QUE ESTEN SE USAN SECUENCIAS QUE ESTEN
CONSERVADAS PARA UNA FAMILIA DE CONSERVADAS PARA UNA FAMILIA DE
PROTEINASPROTEINAS

SE USA SECUENCIA CON MENOR SE USA SECUENCIA CON MENOR
CANTIDAD DE CODONES POSIBLESCANTIDAD DE CODONES POSIBLES

SE INCLUYEN SITIOS DE RESTRICCION SE INCLUYEN SITIOS DE RESTRICCION
PARA CLONAR POSTERIORMENTEPARA CLONAR POSTERIORMENTE
Polymerase chain reaction (PCR)

36. Polymerase chain reaction (PCR)

37. Polymerase chain reaction (PCR)

38. Polymerase chain reaction (PCR)

39. Polymerase chain reaction (PCR)

40. Polymerase chain reaction (PCR)

41. Polymerase chain reaction (PCR)

42. Polymerase chain reaction (PCR)

43. Polymerase chain reaction (PCR)

44. Polymerase chain reaction (PCR)

45. Polymerase chain reaction (PCR)

46. Polymerase chain reaction (PCR)

47. Polymerase chain reaction (PCR)

48. Polymerase chain reaction (PCR)
PCR
1
10
100
1000
10000
100000
1000000
0
2
5
4
0
5
0
6
0
Nº ciclos
N
º

p
b

49. Polymerase chain reaction (PCR)
CONDICIONES PARA MEJORAR LA ESPECIFICIDADCONDICIONES PARA MEJORAR LA ESPECIFICIDAD
DISMINUIR:DISMINUIR:

Mg++Mg++

[d NTP][d NTP]

LARGO DE LOS CICLOSLARGO DE LOS CICLOS

NUMERO DE CICLOSNUMERO DE CICLOS

CONCENTRACION DE PRIMERCONCENTRACION DE PRIMER
AUMENTAR:AUMENTAR:

Tº DE ANNEALINGTº DE ANNEALING

50. Polymerase chain reaction (PCR)
RESUMENRESUMEN

MENOR TIEMPO Y MAYOR Tº DE ANNEALING: MAYOR MENOR TIEMPO Y MAYOR Tº DE ANNEALING: MAYOR
ESPECIFICIDADESPECIFICIDAD

CICLOS EXTRAS: MENOR ESPECIFICIDADCICLOS EXTRAS: MENOR ESPECIFICIDAD
PARA OBTENER MAS MASA DE AMPLIFICACION SE REALIZA PARA OBTENER MAS MASA DE AMPLIFICACION SE REALIZA
REAMPLIFICACIONREAMPLIFICACION
CONTROL NEGATIVO:CONTROL NEGATIVO:

SIN ADNSIN ADN

MUESTRA CON ADN QUE NO CONTIENE SECUENCIA MUESTRA CON ADN QUE NO CONTIENE SECUENCIA
TARGETTARGET

SOLUCION DE EXTRACCION DE ADNSOLUCION DE EXTRACCION DE ADN

51. Polymerase chain reaction (PCR)
VARIANTES DE PCR PARA MEJORAR ESPECIFICIDAD:VARIANTES DE PCR PARA MEJORAR ESPECIFICIDAD:

HOT START PCR: EVITA PRODUCTOS INESPECIFICOS HOT START PCR: EVITA PRODUCTOS INESPECIFICOS
GENERADOS INICIALMENTE CUANDO AUMENTA LA GENERADOS INICIALMENTE CUANDO AUMENTA LA
Tº Tº
SE REALIZA LA DESNATURALIZACIÓN DEL ADN Y AHÍ SE REALIZA LA DESNATURALIZACIÓN DEL ADN Y AHÍ
SE AGREGA LA POLIMERASASE AGREGA LA POLIMERASA

TOUCH DOWN PCR: Tº DE ANNEALING TOUCH DOWN PCR: Tº DE ANNEALING
DECRECIENTES PARA ASEGURAR MAXIMA DECRECIENTES PARA ASEGURAR MAXIMA
COMPLEMENTARIDAD DE LOS PRIMERSCOMPLEMENTARIDAD DE LOS PRIMERS

52. APLICACIONES DE PCRAPLICACIONES DE PCR

MUTAGENESISMUTAGENESIS

RT-PCRRT-PCR

PRODUCCION DE SONDASPRODUCCION DE SONDAS

DETECCIÓN DE INFECCIONES BACTERIANAS Y DETECCIÓN DE INFECCIONES BACTERIANAS Y
VIRALESVIRALES

DIAGNÓSTICO DE ENFERMEDADES HEREDITARIASDIAGNÓSTICO DE ENFERMEDADES HEREDITARIAS

ESTUDIOS DE EVOLUCIÓN MOLECULARESTUDIOS DE EVOLUCIÓN MOLECULAR

ESTUDIOS DE MEDICIDNA FORENSE ESTUDIOS DE MEDICIDNA FORENSE

ESTUDIOS DE FILIACIÓNESTUDIOS DE FILIACIÓN
Polymerase chain reaction (PCR)

53. RT-PCR (Reverse Transcription PCR)
RNAc DNA

54. RT-PCR (Reverse Transcription PCR)
RNAc DNA

55. RT-PCR (Reverse Transcription PCR)
RNAc DNA
RT-PCR Semi-cuantitativa
Control interno para normalizar: gen
constitutivo (eliminar errores en la
cantidad inicial de muestra)
PRIMERS: del gen de interés y del
control interno.
Cuantifico las bandas: relación
gen/control interno
C: células no tratadas.
LPS: células expuestas a 100 µg/ml LPS
(E. colio, P. aeruginosa).
ARP: acidic ribosomal phosphoprotein (control
interno para normalizar la cantidad de mRNA inicial).

56. 
PCR o RT-PCR CUANTITATIVA:PCR o RT-PCR CUANTITATIVA:
SE REALIZA UN CONTROL INTERNO QUE SE REALIZA UN CONTROL INTERNO QUE
SE UTILIZA PARA RELATIVIZAR LA SE UTILIZA PARA RELATIVIZAR LA
CANTIDAD DE AMPLICON OBTENIDA CANTIDAD DE AMPLICON OBTENIDA
DEL GEN DE INTERESDEL GEN DE INTERES

SE REALIZA LA DETECCION DEL SE REALIZA LA DETECCION DEL
CONTROL INTERNO Y DEL GEN DE CONTROL INTERNO Y DEL GEN DE
INTERES CON SONDAS ESPECIFICAS Y INTERES CON SONDAS ESPECIFICAS Y
DIFERENTESDIFERENTES
Polymerase chain reaction (PCR)

57. 0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
01520253035404550
No de ciclos
A
b
s
o
r
b
a
n
c
i
a
SEÑAL
CONTROL
SEÑAL
INTERES
Polymerase chain reaction (PCR)

58. RT-PCR (Reverse Transcription PCR)
RNAc DNA
RT -PCRRT -PCR
PRUEBA CUANTITATIVA PARA HIVPRUEBA CUANTITATIVA PARA HIV

CARGA VIRAL = VIREMIACARGA VIRAL = VIREMIA

HIV ES RETROVIRUS, SE OBTIENE RNA Y HIV ES RETROVIRUS, SE OBTIENE RNA Y
SE REALIZA RT-PCRSE REALIZA RT-PCR

SEGUIMIENTO DE LA TERAPIA DE SEGUIMIENTO DE LA TERAPIA DE
PACIENTE INFECTADOPACIENTE INFECTADO

LIMITE DE DETECCIÓN: 40 COPIAS LIMITE DE DETECCIÓN: 40 COPIAS
VIRALES/ML (ULTRASENSIBLE)VIRALES/ML (ULTRASENSIBLE)

59. RT-PCR (Reverse Transcription PCR)
RNAc DNA

60. Rapid Amplification of cDNA Ends
RACE-PCR
RT-PCR para amplificar secuencias desconocidas
del extremo 3‘ y 5' del mRNA
Se realiza la RACE y se SECUENCIA el
producto obtenido
EVITA ERRORES DE LA PCR PUES
PRODUCTOS CORTOS
RT-PCR (Reverse Transcription PCR)
RNAc DNA

61. RT-PCR (Reverse Transcription PCR)
RNAc DNA

62. RT-PCR (Reverse Transcription PCR)
RNAc DNA

63. Polymerase chain reaction (PCR)

64. Polymerase chain reaction (PCR)

65. Polymerase chain reaction (PCR)

66. Polymerase chain reaction (PCR)
Fluorocromo + Quencher (absorbe la energía del fluorocromo cuando
está cerca fluorocromo no fluoresce)

67. Polymerase chain reaction (PCR)

68. Polymerase chain reaction (PCR)
 Aplicaciones de la PCR: PROTOCOLO DE AMPLIFICACION
DE LAS REPETICIONES TELOMERICAS QUE MIDE
ACTIVIDAD DE TELOMERASA

69. Polymerase chain reaction (PCR)
Aplicaciones de la PCR: deteminación de
polimorfismos genéticos