ampc detection.pdf

ampc detection.

1. B-lactamasas AmpC
Fenotipos de resistencia
Deteccion en el
laboratorio

C. Segura. Patologia Infecciosa.
Laboratori de Referéncia de

i
Catalunya

2. Generalidades
Espectro actividad
Origen y tipos AmpC plasmidicas
Inhibidores

Detección en el laboratorio

Especies sin AmpC cromosómico
Especies con AmpC cromosómico

Confirmación sensibilidad carbapenems

Descartar la presencia de carbapenemasas

C. Segura. Patologia Infecciosa. Laboratori de
Referéncia de Catalunya

3. Espectro actividad e inhibición

TABLE 1. Correspondence between Amblers molecular clasification of B-lactamases and the functional groups of Bush etal
Seul cles Fascical group Acti?
(Ambler) Bub) Palo Carbenilin Ondlin Cephabeidins Cefoatime Azıreonam — Inipenem

Serine f-lactamases
A da +++
db +++
dhe +++
dbr ++

AmpC:
c 1+

D FF
Undetemined ++

Zine B-lactamases
B

MlEstas enzimas se caracterizan por ser resistentes a los inhibidores como el
ácido clavulánico (AC) y Tazobactam . Espectro de actividad cefalosporinasa.
Cromosómica de E. coli (constitutiva), E. cloacae (Inducible), C. freundii

(Do...

4. Betalactamicos/Betalactamasas

1940-1950 Penicilinas/Aminopenicilinas S. aureus penicilinasa
s a a Betalactamasas de amplio
1960-1970 Al ae espectro (TEM-1, TEM-2,
SHV-1)
Betalactamasa de espectro
Cefalosporinas 3? generación aro (Comadascla ly
2 9 SHV), betalactamasas
1980 resistentes a los inhibidores
Inhibidores de betalactamasa Hiperproducción de AmpC
Betalactamasas de espectro
1990-2000 Cefalosporinas 4? generación extendido (CTX: delata)
Carbapenems AmpC plasmídicas
Carbapenemasas plasmídicas

©. Segura. Patologia Infecciosa.
Laboratori de Referéncia de Catalunya

5. —*— Group 1/class C cephalosporinases

Group 2/class À and class D B-lactamases
—— Group 3/class B metallo-f-lactamases

E
E
E
E]
=
Ed
E
3
5
=
E
5

T T T
1970 2007

C. Segura. Patologia Infecciosa.
Laboratori de Referéncia de Catalunya

6. Movilización de genes AmpC del cromosoma de especies
productoras de esta enzima. Inserción en transposones y
plásmidos conjugativos

ANTIMICROS. AGENTS CHEMOTHER.

A. hydrophila
A soi

Y enserocoliica

L lactamgenus

5 marceschm
P. stuart
FIG. 3. Dendrogram of representativo plasmid-encoded and chromosomally encoded AmpC f-lactamasos. Branch lengths are to scale
according to the amino acid changes determined using the Blesum matrix. The percentages at the branch points refer to the number of times a
particular node was found in 100 bootstrap replications.

7. B-lactamasas AmpC plasmídicas

FOX (7), MOX (3), CMY (50), LAT (1), MIR (4), ACC (4),
ACT (3), DHA (2)

M ACT-1, DHA-1, DHA-2 y CMY-13 están ligados al gen ampR y
son inducibles

Bl Resto AmpC plasmidicas no están ligadas al gen ampR y se
expresan contitutivamente (similar a desrepresión)

Bl Presencia de promotores eficaces que incrementan la
expresión tanto en las inducibles como en constitutivas

C. Segura. Patologia Infecciosa.
Laboratori de Referéncia de Catalunya

8. coli derivatives producing plasmid-encoded AmpC B-l
Antimicrobial 1) for derivatives producing:

en CFE DHA FO}

Ampicillin
Piperacillin 2 >256

Aztreonam
Cefepime
Celpirome
Imipenem
Meropene

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Laboratori de Referència de Catalunya

9. Inhibidores AmpC

Aztreonam
Cloxacilina—
Ac. borónico

C. Segura. Patologia Infecciosa.
Laboratori de Referencia de Catalunya

10. ‘AmpC positive - CMY-2 Genotype

E.coli
CN (cefotetan)/ CNI [cefotetan+cloxacilin|: 6 nt

efotetan)/ C tetan+cloxacillin}:

©. Segura. Patologia Infecciosa
Laboratori de Referéncia de Catalunya

11. Inhibidores AmpC

12. C. Sgura.

oratori de en

DETECCION EN EL
LABORATORIO

je lega al feo
iade a

13. SISTEMAS AUTOMATIZADOS

14. Detección en el laboratorio

« Especies sin AmpC cromosómico

Salmonella, Proteus mirabilis, Klebsiella spp.,
Citrobacter koseri, Citrobacter amalonaticus

Detección fácil. Perfil que no concuerda con la especie

C. Segura. Patologia Infecciosa
Laboratori de Referencia de Catalunya

15. Proteus mirabilis AmpC plasmidica/cefamicinasa (DHA)

INTER.

00 o) 3 A A i
| © 2002 oJ
Bo,

Kerr

C. Segura. . Patologia
Laboratori de Referen: a Meese nya

16. Proteus mirabilis AmpC plasmidica/cefamicinasa (DHA)

Ampicilina
Amox+AC
Pip/Taz
Cefalotina
Cefazolina
Cefoxitina
Ceftazidima
Ceftazid/AC
Cefotaxima
Cefotax +AC
Cefepime
Aztreonam
Ertapenem
Imipenem

>16
>16/8
<=8
>16
>16
<=8
16
>2
16
>4
<=
<=
==08
<=il

C. Segura. Patologia Infecciosa.
Laboratori de Referéncia de Catalunya

4317814

17. K. pneumoniae CMY-2

CMI Real Interpr

Ampicilina 5256

Ticarcilina 64-3256
Piperacilina 32-5256
Piper/Tazo 64- >256
Amox / clav 3256

Cefalotina >256

Cefoxitina 32->256
Cefuroxima 32->256
Cefotaxina 2256 r/R
Ceftazidima 2->256 r/R
Ge 1° S
@ Aztreonam 22256 r/R

pa Y Imipenem 0,06-0.12S

C. Segura. Patologia Infecciosa. Laboratori de Referéncia de SEIMC GEMARA. F. Navarro
Catalunya

DUVDVVIII

nD DUVDUVDVIDIIID

18. K. pneumoniae DHA-1 + CTX M 15

Ampicilina >16
Amox+AC >16/8
Pip/Taz 64
Cefalotina >16
Cefazolina >16
Cefoxitina >16
Ceftazidima >32
Ceftazid/AC >2
Cefotaxima >16
Cefotax+AC >4
Cefepime >16
Aztreonam >16
Ertapenem <=0.5
Imipenem <i

C. Segura. Patologia Infecciosa.
Laboratori de Referència de Catalunya
4304893

19. 4633366

20. Detección en el laboratorio

« Especies con AmpC cromosómico

« Constitutiva de baja expresión: Escherichia coli
Difícil de detectar por métodos fenotípicos

» Inducible: Enterobacter cloacae, Enterobacter
aerogenes, Citrobacter freundii, Morganella morganii,
Providencia spp.

No detectable por métodos fenotipicos

C. Segura. Patologia Infecciosa.
Laboratori de Referéncia de Catalunya

21. Hiperproducción de la B-lactamasa cromosómica
(AmpC). E. coli

CMI Real Interpr

Ampicilina 32->256 R R
Ticarcilina 8-32 r |
Piperacilina 8-32 r |
Piper/Tazo 32-256 R R
Amox/clav 32-256 R R
Cefalotina 32-256 R R
Cefoxitina 16-256 R R
Cefuroxima 16->256 R R
Cefotaxina 0,25-2 r VR
Ceftazidima 1-4 VR

| Cefepime Go 5 5

+ Aztreonam 0,25- r VR
Imipenem 0,06-0.12 S Ss

SEIMC GEMARA. F. Navarro

22. Producción de una cefamicinasa plasmidica
(AmpC) E. coli CMY-2

CMI Real Interpr

Ampicilina >256 R
Ticarcilina 16->256 r/R
Piperacilina 16->256 r/R
Piper/Tazo 32-5256 R
Amox/clav >256 R
| Cefalotina >256 R
* Cefoxitina 32->256 R
Cefuroxima 32-5256 R
Cefotaxina 2->256
Ceftazidima 2->256

Aztreonam 2->256 1/R
Imipenem 0,06-0.12S

nD DUVDUVUDDIIVID

SEIMC GEMARA. F. Navarro

23. E. coli AmpC plasmidica DHA-1

Ampicilina >16
Amox+AC >16/8
Pip/Taz <=8
Cefalotina >16
Cefazolina >16
Cefoxitina >16
Ceftazidima 16
Ceftazid/AC 2
Cefotaxima 8
Cefotax +AC 1
Cefepime <=1
Aztreonam 8
Ertapenem <=0.5
Imipenem —|

4476959

C. Segura. Patologia Infecciosa.
Laboratori de Referencia de Catalunya

24. Producción de una cefamicinasa plasmídica (AmpC).
Sensible a cefoxitina.

E. coli ACC-1

CMI Real Interpr

3 Ampicilina >256 R
$ Ticarcilina >256 r/R
| Piperacilina 32-256 r/R
® | Piper/Tazo 32->256 R
| Amox / clav >256 R
| Cefalotina >32 R
| Cefoxitina 416 Sl
| Cefuroxima >256 R
Cefotaxina 8-32 |
Ceftazidima 16-32 r
Cefepime 0254 S
4 Aztreonam 1-8 r
Imipenem 0,06-0.12 S

O DO D T TD D TU NU D DU LV

25. Estudio cefamicinasas

» Criterios inclusión:

Especies no AmpC cromosómica: RóÓl a alguna
C3G,C4G6 My A+C I6R

Enterobacteriaceas con CIM a IMI >0.5 mg/L
» Período estudio: 02/2009- 07/2009
+ Cepas incluidas: 184

C. Segura. Patologia Infecciosa
Laboratori de Referencia de Catalunya

26. 12 CARBAPENEMASAS

39 CEFAMICINASAS

184 TOTAL PLASMÍDICAS

7 E.coli *
1 E. cloacae

10
HIPERPRODUCCIÓN
E.coli

©. Segura. Patologia Infecciosa
Laboratori de Referéncia de Catalunya

27. 184 TOTAL

122
NEGATIVAS

IN

C. Segura. Patologia Infecciosa.
Laboratori de Referència de Catalunya

28. Fallos

« Proteus mirabilis: Oxa- 30 + blea o hiperproducción
SHV-1 (LRC); CMY-2 (centro referencia)

« Klebsiella pneumoniae: AmpC plasmidica (LRC); No
detección de AmpC plasmídica (centro de referencia)

« Klebsiella pneumoniae: BLEA + AmpC plasmídica ??
No detección de AmpC plasmidica (centro de
referencia);

©. Segura. Patologia Infecciosa.
Laboratori de Referéncia de Catalunya

29. CONFIRMAR POR DIFUSION LA
SENSIBILIDAD A CARBAPENEMS

C. Segura. Patologia Infecciosa.
Laboratori de Referéncia de Catalunya

30. Disminución actividad carbapenems

1. Alteración en la permeabilidad. Afecta a
carbapenems en cepas con determinadas
AmpC (ciertas ampC plasmidicas, ESAC).
También en BLEAS

1 ERTAPENEM /IMIPENEM
2. Presencia de carbapenemasas: Clase A (KPC...),

Clase B (VIM...), Clase D (Oxa- 48...).
Sospechar y desenmasarar

C. Segura. Patologia Infecciosa
Laboratori de Referéncia de Catalunya

31. ANTIMICROBIAL
0066-480 /$12.00 doi:10.1128/AAC.01762-09
Copyright merican Society for Microbiology. All Rights Reserved.

Phenotypic and Biochemic parison of the
Carbapenem-Hydrolyzing Activities of Five

Plasmid-Borne AmpC f-Lactamases”

Hedi pes Hélène Guillon, François Eb, and Patrice Nordmann?

nire Hospitalier Un jpital Nord, 80054 Amiens, Franc
gie-Virologie-Hygióne, Unité INSERM 914, Emerging Resistance to

Hópital de Bicétre, Assistance Publique/Höpitaux de Paris, Faculté de
Médecine et Université Paris Sud, 942

Received 13 December 2009/Returned for modification 21 February 2010/Accepted 13 August 2010

C. Segura. Patologia Infecciosa.
Laboratori de Referéncia de Catalunya

* and

32. TABLE 2. MICs of B-lactams for the recombinant clone:

the recipient strain E. coli TOP10
in E coli HB4

ant dom and the OmpC/OmpF
porin-deficient s

B-Lactam MIC (ng/ml)

E coli strain

roxime

fu Cefotaxime E A

TOP10(pDH
TOP10(pFO?
TOPIO(pACı
TOP10(pAmpC-B2)*
TOP10

HB4(pACC-1)*
HB4(pAmpC-B2)
HB4

Ceftazidim Cefepi

128
64

0.064

0.064
0.032
0.032
0.125
0.032
0.032

0.032

4 0.032

©. Segura. Patologia Infecciosa
Laboratori de Referéncia de Catalunya

33. 1. ESAC Blactamasas:
Extended-spectrum AmpC
Subclase le

« Ampliación espectro: cefepime y cefpiroma

« En P aeruginosa variante con incremento en
la actividad sobre imipenem

« Modificaciones en 6 regiones ampC

« En cepas con Omp C- y Omp F- + ESAC :
Resistencia a ertapenem y reducción
sensibilidad a imipenem

« AmpC cromosómicas y plasmídicas

« Detección sólo por biología molecular

©. Segura. Patologia Infecciosa ‘crows :
Laboratori de Referéncia de Catalunya AmpC -Lactamases George A. Jacoby Clin Microbiol Rev 2009:161-82

34. 2. Descartar carbapenemasas

K. pneumoniae K. oxytoca
DHA-1 + CTXM-15 + SHV-12 AmpC +BLEA + permeabilidad
22
Ampicilina >16 Ampicilina >16
Amox+AC >16/8 Amox+AC >16/8
Pip/Taz <=8 Pip/Taz >64
Cefalotina >16 Cefalotina >16
Cefazolina >16 Cefazolina >16
Cefoxitina >16 Cefoxitina >16
Ceftazidima >16 Ceftazidima >16
Ceftazid/AC >2 Ceftazid/AC >2
Cefotaxima >32 Cefotaxima >32
Cefotax +AC >4 Cefotax +AC >4
Cefepime >16 Cefepime 16
Aztreonam >16 Aztreonam >16
Ertapenem <=0.5 Ertapenem il
Imipenem <= Imipenem 2

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Laboratori de Referéncia de Catalunya

35. K. oxytoca

Etest IMIP/IMIP+EDTA

VIM 1 + SHV-12

C. Segura. Patologia Infecciosa.
Laboratori de Referéncia de Catalunya

36. Difícil cuando existen varias enzimas
mecanismos diferentes

1 Sinergias a diferentes distancia y con varios
inhibidores:

amoxicilina + ac. clavulánico (BLEAS , KPC)
ácido borónico (AmpC, KPC)

EDTA (metalobetalactamasas)

cloxacilina (AmpC)

2 PCR BLEAS, Carbapenemasas

C. Segura. Patologia Infecciosa
Laboratori de Referencia de Catalunya

37. Gracias por vuestra atencion

39. K. pneumoniae DHA-1 + CTX M 1 + K. oxytoca
SHV-12

ps

40. K. oxytoca

No sinergia sinergia