Ap7 - Reação de Aglutinação

Aula prática: Reação de Aglutinação

1. Aula 7
Trabalho realizado pelos estudantes de Medicina da UFBA Adriana
Campos, Nivaldo Cardozo Filho, Sabrina Oliveira e Silvana
Asfora,
sob orientação dos Professores Roberto Meyer, Ivana Nascimento, Robert
Schaer, Cláudia Brodskyn, Songelí Freire e Denise Lemaire, do
Laboratório de Imunologia do Instituto de Ciências da Saúde da UFBA.
Atualizado em julho de 2003

2. * Caracteriza-se pela formação de agregados, como resultado da interação de Ag
particulados e Ac específicos.
* Pode ocorrer tanto com partículas que apresentam determinantes antigênicos
naturais em sua superfície, como em partículas inertes ou células que são
recobertas com Ag.
* Principais fatores que influenciam a formação dos agregados: isotipo do Ac
(IgM é mais eficaz que IgG), pH ideal (6,0 - 8,0), o tipo das moléculas antigênicas
envolvidas, tempo e temperatura.
*São muito fáceis de ser executadas e de grande praticidade na rotina
laboratorial.
* Possuem a desvantagem de possibilitar a avaliação das amostras somente de
forma qualitativa ou semiquantitativa, na rotina laboratorial até o presente
momento.

3. AGLUTINAÇÃO DIRETA
1) Adicionar a amostra de sangue na placa teste:
2) Adicionar o reagente (anticorpo anti A, B ou Rh):
Exemplo: tipagem sanguínea em lâminas.
COMO FAZER:

4. 3) Adicionar o controle negativo:
4) Misturar:

5. 5) Movimentar levemente a placa teste por dois minutos:
6) Fazer a leitura do resultado:
Um resultado positivo é indicado por uma aglutinação visível
(aglomeração dos eritrócitos na placa teste), como ilustrado
acima.
negativo positivo

6. AGLUTINAÇÃO INDIRETA (PASSIVA)
Exemplo: hemaglutinação passiva para a Doença de
Chagas:
•As hemácias são revestidas com Ag do T. cruzi (li-
gação covalente) e então distribuídas nos poços de
uma placa de microtitulação.
•O soro teste e os controles positivos e negativos, de-
vidamente diluídos, são adicionados aos poços da
referida placa.
•Se houver Ac específico contra o Ag, as hemácias
se aglutinam e formam uma camada no fundo do
poço. Quando não existe Ac específico, as células
formam um botão no fundo do poço.
Aglutinação positiva
negativa
Soros testes diluídos (recíproca da diluição):
Em cada
poço: soro
diluído +
hemácias
com o an-
tígeno.
+
Antígenos são ligados de modo
covalente na superfície da he-
mácia. Tal conjunto está pron-
to para ser usado na reação:
Hemácias com o Ag na superfície
anticorpo
antígeno
2 4 8 16 32 64 128 ... pos. neg.

7. INIBIÇÃO DA AGLUTINAÇÃO
Exemplo: presença de hCG na urina (gravidez)
Partículas revestidas
com hCG
+
Soro anti - hCG
pois os Ac se ligaram no hCG da urina,
(ficando bloqueados), na incubação inicial
são incubados
previamente e
colocados
resultado positivo
(presença de hCG
na urina): não ocorre
aglutinação.
resultado negativo
(ausência de hCG na urina):
ocorre aglutinação, pois os
anticorpos anti-hCG não são
bloqueados na incubação
inicial, porque não havia o hor-
mônio na urina. Livres, po-
dem aglutinar as partículas re-
vestidas de hCG.
Urina
A
d ic
i o n a - s e
numa placa
FIM