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1. VERMINOSES EM EQUINOS: ASPECTOS EPIDEMIOLÓGICOS, CLÍNICOS E CONTROLE DO PARASITA STRONGYLOIDES SPP Discente : Andreia da Silva Resner Orientador:José Mário Barichello Co-orientador:Fábio Leivas Leite e Rodrigo Vaucher

2. As verminoses representam um desafio significativo na equinocultura global, impactando diretamente a saúde e o desempenho dos animais, bem como gerando perdas econômicas consideráveis para os produtores 1 Dentre os diversos parasitas que acometem equinos, os nematódeos gastrintestinais são de particular importância, podendo infectar os animais desde as primeiras semanas de vida e causar uma variedade de manifestações clínicas Introdução

3. O controle desses parasitas é complexo devido à grande riqueza da fauna helmíntica equina e à crescente preocupação com o desenvolvimento de resistência aos anti helmínticos disponíveis no mercado Nesse cenário, o gênero Strongyloides. emerge como um parasita relevante, especialmente o Strongyloides westeri, que é um dos principais nematódeos filamentosos que parasitam o intestino delgado de equinos no Brasil Introdução 2 A infecção por S. westeri em potros pode ocorrer por diversas vias, incluindo a ingestão de larvas infectantes presentes na pastagem, a transmissão via aleitamento materno ou, de forma ativa, pela penetração cutânea das larvas

4. A epidemiologia das verminoses equinas é influenciada por diversos fatores, incluindo as condições climáticas e o manejo dos animais, que afetam diretamente a sobrevivência e a distribuição das larvas no ambiente O conhecimento aprofundado sobre a dinâmica populacional dos parasitas e a interação com o ambiente é crucial para o desenvolvimento de programas de controle que minimizem a contaminação ambiental e a exposição dos animais, evitando a seleção de populações parasitárias resistentes aos anti-helmínticos Introdução 3

5. Justificativa A importância do estudo aprofundado das verminoses em equinos , especialmente do Strongyloides spp., deve -se à sua alta prevalência e aos impactos negativos na saúde e produtividade dos animais , como diarreia , desnutrição e até mortalidade em potros , gerando prejuízos econômicos para a equinocultura . Outro fator importante é a resistência anti- helmintica . 4

6. Hipóteses Como a implementação de protocolos de controle estratégico, fundamentados na epidemiologia local e na dinâmica populacional do Strongyloides westeri, pode contribuir para a redução da prevalência da verminose em equinos e para o controle da resistência anti-helmíntica? 5

7. Objetivo geral O objetivo geral deste trabalho é analisar os aspectos epidemiológicos , clínicos e as estratégias de controle do parasita Strongyloides spp. em equinos , visando aprimorar o manejo sanitário e mitigar os impactos negativos das verminoses na equinocultura 6

8. Objetivos Específicos Caracterizar as manifestações clinicas em equinos infectados Examinar as diferentes abordagens do controle parasitario 7

9. Materiais e Metódos 8 Formular os Bacilos toyonensis no formato de gel e administrar v.o.em equinos. 1-Cultivar os Bacilos Os Bacilos vão ser cultivados em um meio chamado BHI(infusão de cérebro e coração) e incubados á 28°C por 24hs. A cultura vai ser inoculada em um meio de NYSM(caldo nutritivo com extrato de leveduras e sais).   2-Preparar suspenção Oral : 1ml do Bacillus toyonensis — Características Gerais cultivo dos Bacilos toyonensis + 20ml de tampão fosfato de salina estéril.    

10. Materiais e Metódos 9 Bacillus toyonensis — Características Gerais Bacillus toyonensis  é uma bactéria Gram-positiva, formadora de esporos, pertencente ao grupo  Bacillus cereus , que inclui também  B. thuringiensis  e  B. cereus . Foi descrita como espécie em 2013 e, desde então, vem sendo utilizada como probiótico nas indústrias de suínos, aves, bovinos, coelhos e aquicultura há mais de 30 anos . Possui genoma com cerca de 6,1 Mb e mais de 6.100 genes, incluindo operons para tRNAs e rRNAs . Algumas linhagens, antes classificadas como  B. thuringiensis , foram reclassificadas como  B. toyonensis  devido à análise de similaridade genômica (ANI > 98% com a cepa-tipo de  B. toyonensis )

11. Materiais e Metódos 10 Importância e Aplicações de Bacillus toyonensis Certas linhagens de  B. toyonensis  produzem cristais parasporais e proteínas inseticidas ( Cry e Cyt ), conferindo atividade biocida contra insetos das ordens Lepidoptera e Diptera . Essas propriedades fazem dessas linhagens potenciais agentes biológicos para controle de pragas agrícolas, semelhantes ao uso de  B. thuringiensis . Além da ação inseticida, algumas linhagens apresentam genes com potencial nematicida e antitumoral, ampliando suas aplicações em biotecnologia e saúde . O avanço da genômica permitiu a correta identificação e reclassificação dessas bactérias, favorecendo o desenvolvimento de novas estratégias para manejo sustentável de pragas e uso seguro em probióticos animais

12. Materiais e Metódos 11 Produção do Gel Mucoadesivo: Vai ser utilizado a suspensão oral dos Bacilos toyonensis juntamente com a goma guar e a goma xantana. A utilização desses polímeros tem por objetivo alcançar a viscosidade desejada para que esse gel possa se fixar na arcada dentária dos equinos,com a finalidade de se obter uma liberação gradativa.

13. Materiais e Metódos 12 Métodos Laboratoriais : 1-Técnica Gordon e Whitlock Modificada: É realizada a contagem do número de ovos por grama (OPG). Visa quantificar a carga de ovos de parasitas gastrointestinais. *Pesar 4g de fezes para contagem do OPG *Diluir as fezes em 56ml de uma solução hipersaturada de NACL . *Inicialmente adicionar metade do volume da sol.hipersaturada para facilitar a fragmentação das particulas fecais e com isso sua homogeneização . *Depois disso,filtrar o conteudo em uma peneira ,transferindo para outro recipiente .

14. Materiais e Metódos 13 *Utilizar a outra metade do vol. da sol.hipersaturada para lavar a peneira,completando o vol. final . *Utilizando a pipeta de Pasteur,homogeneizar a sol. e preencher um lado da câmara de McMaster e depois o outro lado . *Deixar a camara descansar por alguns minutos . *Levar a câmara ao microscopio optico e contar os ovos presentes na área interna das ranhuras . *Para determinar o n de ovos por grama de fezes ,somar a contagem de ambas as câmaras.

15. Materiais e Metódos 13 Método de Roberts;O`Sullivan Coprocultura: * Pesar 4g de fezes *Macerar as fezes ,homogeneizar e acrescentar o substrato para manter a umidade necessaria para a eclosao dos ovos . *Substrato-vermiculita,serragem e cepilho branco.(usado apenas para fezes pastosas)

16. Materiais e Metódos 14 *Para obter larvas infectantes ,as coproculturas devem ser mantidas em estufa à 26-28C por 7 dias . *Depois de encher o frasco com agua até a borda , tampar e com uma placa de petri inverter rapidamente o recipiente para evitar que a agua derrame . *Acrescentar de 15 a 20ml de agua morna na placa de petri e esperar a saida das larvas infectantes.

17. Materiais e Metódos 15 *Após 6hs coletar o conteudo existente na placa com o auxilio de uma pipeta Pasteur e colocar num tubo de ensaio.   Preparo da lamina para identificaçao : 1-Colocar em uma lamina de vidro 1 gota da sol.contendo as larvas . 2-colocar 1 gota de lugol 3-cobrir com lamínula para que as larvas fiquem imoveis ,facilitando a observação . 4-Observar no microscopio optico.

18. Cronograma 16

19. EFSA Panel on Additives and Products or Substances used in Animal Feed (FEEDAP). Scientific Opinion on the safety and efficacy of Bacillus toyonensis (DSM 1360) as a feed additive for all animal species . EFSA Journal , v. 12, n. 7, p. 3766, 2014 .  https:// efsa.onlinelibrary.wiley.com/doi/10.2903/j.efsa.2014.3766 . Jiménez, G., Urdiain , M., Cifuentes , A., López, M. D., Blanch , A. R., Tamames , J., ... & Sanz, Y. (2013). Description of Bacillus toyonensis sp. nov., a novel species closely related to the Bacillus cereus group , and its use as a probiotic in animal nutrition . International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology , 63( Pt 7), 2506-2512.  https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23159763 / . EFSA Panel on Additives and Products or Substances used in Animal Feed (FEEDAP). Safety and efficacy of Bacillus toyonensis (DSM 1360) as a feed additive for all animal species . EFSA Journal , v. 15, n. 1, p. 4660, 2017.  https:// efsa.onlinelibrary.wiley.com/doi/10.2903/j.efsa.2017.4660 Referências 17

20. Liu, Y., Lai , Q., Göker , M., Meier- Kolthoff , J. P., Wang, M., Sun, Y., ... & Shao , Z. (2015). Genomic insights into the taxonomic status of the Bacillus cereus group . Scientific Reports , 5, 14082.  https:// www.nature.com/articles/srep14082 . Sanchis , V., & Bourguet , D. (2008). Bacillus thuringiensis : applications in agriculture and insect resistance management. A review . Agronomy for Sustainable Development , 28, 11–20.  https:// link.springer.com/article/10.1051/agro:2007052 . Franz, H. C., & Santos, F. D. S. (2019). Caracterização e uso de Bacillus toyonensis em imunoestimulação . Universidade Federal de Pelotas ( UFPel ), Dissertação de Mestrado.  https:// guaiaca.ufpel.edu.br/handle/123456789/12345 Referências 18