Citogenetica

Problema de Infertilidad sin causa definida puede tener un origen cromosónico.

1. CITOGENÉTICA CLÁSICA
Y
CITOGENÉTICA MOLECULAR
PROF. T.M. CIT. FAVIÁN TREULEN

2. ¿ QUE ES LA CITOGENÉTICA?
-Disciplina que tiene por objeto estudiar alteraciones numéricas
y estructurales que pueden producirse en los cromosomas.
- Estas alteraciones pueden ser congénitas o adquiridas.
- Pueden producirse en todas las células del organismo o solo
en algunas.

3. -La citogénetica se remonta al año 1956 cuando
Tijo y Levan describen el número de 46
cromosomas.
- En 1959 Lejeune describe a la trisomía 21.
-En 1971 Caspersson describe el primer método de
bandeo cromosómico, el bandeo Q.
-El bandeo Q y otras técnicas de bandeo (GTG,
CBG) descritas posteriormente han facilitado la
identificación de cada uno de los cromosomas.

4. -Actualmente existe el ISCN 1995.
-Cromosomas 1 – 22 X e Y.
-Grupos A(1-3), B(4-5), C(6-12,X), D(13-15), E(16-18),
F(19-20), G(21-22,Y)
-Brazos largos y cortos.

6. ¿ QUE ES UN CARIOTIPO?
-El conjunto de cromosomas de una célula se
denomina cariotipo.
- Se mantiene inalterable en todas las células de
un individuo asi como en los individuos de una
misma especie.
-A veces se producen alteraciones que son
estudiadas con técnicas de citogenética clásica.

12. ¿CÓMO OBTENEMOS UN CARIOTIPO?
CICLO CELULAR
-La transición desde interfase a división celular
(mitosis) y volver a interfase.
-Se reconocen 4 fases en el ciclo celular: G1 (gap
one); S(síntesis); G2(gap two); M(mitosis).

13. MITOSIS
En la fase S cada cromosoma se replica y la célula
llega ser 4n. Durante la mitosis cada una de las dos
copias se deriva a cada una de las células hijas.
La mitosis puede dividirse en cuatro etapas: profase,
metafase, anafase, telofase.
En metafase los cromosomas se encuentran en su
máxima compactación.

15. CULTIVO CELULAR
-El análisis citogenético se puede realizar en células de
diferentes tejidos como, linfocitos de sangre periférica,
fibroblastos, amniocitos, trofoblastos, células tumorales
y germinales.
-Por la facilidad de la obtención de la muestra, los
exámenes de rutina se realizan en linfocitos de sangre
periférica.
-Dependiendo del diagnóstico existen variaciones a la
técnica standard.

17. -Incubar la muestra en un medio de cultivo líquido
adecuado (RPMI 1640).
-Una vez alcanzado el crecimiento adecuado se detiene
el ciclo celular en metafase (colcemid).
-Se realiza la cosecha de las mitosis.
-Se gotea la solución en un portaobjeto limpio y los
cromosomas fijados al vidrio se someten luego a
técnicas de tinción y bandeo.

18. BANDEO CROMOSÓMICO
-Se someten los cromosomas a diferentes agentes
denaturantes del DNA (calor, tripsina, soluciones
alcalinas).
-El bandeo GTG (tripsina) se usa de rutina y se
complementa con otros bandeos (CBG o RBG)

23. ANÁLISIS MICROSCÓPICO
-Se realiza en un mínimo de 35 mitosis bandeadas, más
una fotografía y el montaje del cariotipo completo de cada
una de ellas.
- Este recuento debe ser aumentado a 50 o 100 mitosis en
presencia de dos o más lineas celulares y en X frágil.

24. DESCRIPCIÓN DEL CARIOTIPO
La descripción del cariotipo normal o con
alteraciones como traslocaciones, deleciones,
inversiones, rearreglos estructurales complejos,
fragilidades, duplicaciones, se realiza con la
nomenclatura indicada por el ISCN (1995)

30. CITOGENETICA MOLECULAR
-Las limitaciones de la citogenética clásica y de la genética molecular
por si solas, han sido superadas por la implementación de la citogenética
molecular que utiliza las ventajas de ambas
-A esta metodología se le denomina FISH.
-Se basa en la hibridación in situ, detección y localización de secuencias
específicas de ácidos nucleicos en estructuras biológicas
morfológicamente conservadas.
-Utiliza sondas complementarias a un segmento de DNA.
-Estas sondas son biotiniladas no radioactivas.

32. TECNICA DE FISH
-PREPARACION PREVIA DE LA MUESTRA
-PREPARACION DE LAS PLACAS
-PREPARACION DE LAS SONDAS
-HIBRIDACION
-LAVADOS POST-HIBRIDACION
-DETECCION
-TINCION DE CONTRASTE (yoduro de propidium o DAPI)
-VISUALIZACION (microscopio de epifluorescencia)

34. TIPOS DE SONDAS
PAINTING o COATING
SONDAS REPETITIVAS DE DNA ALFA SATELITE
SONDAS DE DNA DE SECUENCIA UNICA

47. GEN SRY EN CROMOSOMA X

48. CROMOSOMA X: SONDA ROJA
CROMOSOMA Y: SONDA VERDE
CROMOSOMA 18: SONDA CELESTE

50. SONDA DELECION CROMOSOMA 15

51. DELECION EN EL CROMOSOMA 15

52. DELECION DEL LOCUS KAL EN EL CROM. X

54. EL FISH NOS PERMITE RESPONDER PREGUNTAS
IMPOSIBLES DE RESOLVER CON TÉCNICAS DE
CITOGENÉTICA CLÁSICA, ES MENOS LABORIOSO
Y MAS RÁPIDO QUE LOS BANDEOS DE ALTA
RESOLUCIÓN, ES UNA TÉCNICA FACTIBLE Y
PODEROSA EN RESOLUCIÓN.

55. CITOGENETICA CLASICA Y MOLECULAR EN
REPRODUCCION
APLICACIONES:
-Determinar la prevalencia de anomalias y de variantes cromosómicas
en parejas con esterilidad e infertilidad.
-Determinar presencia de alteraciones numéricas( aneuploidias).
-Determinar presencia de alteraciones estructurales (translocaciones
deleciones, microdeleciones, inversiones, duplicaciones,etc.)
-Determinar presencia de variantes cromosómicas (sitios fragiles,
variaciones satelitales, heterocromatina centromérica aumentada, etc.)

56. -Diagnóstico prenatal: (anomalias genéticas y defectos del tubo
neural.
-FISH permite la evaluación de aberraciones numéricas en células de
líquido amniótico directamente sin cultivar.(trisomía 21, trisomía 13,
trisomía 18, S. de Turner o S. De Klinefelter.)
-Diagnóstico genético preimplantatorio: Posibilidad de analizar la
presencia de alteraciones cromosómicas (FISH) y genéticas
(P.C.R.)en embriones antes de ser transferidos al útero. (biopsia
embrionaria).
-Translocaciones, determinar el sexo de embriones en enfermedades
ligadas al sexo (hemofilia, distrofia muscular de Duchenne).
-Determinar enfermedades genéticas (Fibrosis quística, Enf. De Tay-
Sachs, Sindrome de Marfan, Beta-talasemia, Anemia falciforme, etc.

57. LOS PROBLEMAS DE ESTERILIDAD O INFERTILIDAD
SIN CAUSA DEFINIDA, PUEDEN TENER UN ORIGEN
CROMOSÓMICO Y REFUERZAN LA NECESIDAD DE
ESTUDIAR A UN MAYOR NÚMERO DE PAREJAS CON
PROBLEMAS DE REPRODUCCIÓN PARA UNA
EVALUACIÓN CITOGENÉTICA, UNA VEZ EXCLUIDAS
OTRAS CAUSAS.