Citometria de Flujo, equipos, parametros

Caracteristicas de la citometria

1. CITOMETRÍA
DE FLUJO Y
SUS
APLICACIONES
Morlan Pineda David Eduardo
Paniagua García Roberto Nael
Instituto Politécnico Nacional
Hematología / 9CM30

2. La citometría de flujo (FCM) es una tecnología capaz de proporcionar un análisis
multiparamétrico rápido de células o partículas individuales.
DEFINICIÓN
Mide simultáneamente caracteres físicos (tamaño y complejidad) y
múltiples marcadores superficiales/intracelulares de células
individuales.
Permite una caracterización fenotípica rápida y precisa de una
población celular.
Diagnosticar rápidamente la leucemia y clasificarla.
La FCM puede detectar la intensidad del antígeno y el patrón de expresión
antigénica aberrante.
Ruíz, G. (2009). Fundamentos de hematología. México: Panamericana. ISBN:9786077743040

3. PRINCIPIOS Y ELEMENTOS CLAVE DE LA CITOMETRÍA DE FLUJO
IMPORTANCIA
Análisis de poblaciones celulares/ partículas a gran velocidad.
Capacidad para medir parámetros celulares (tamaño, forma y complejidad),
componentes o funciones celulares que pueden ser marcadas con un fluorocromo.
Análisis multiparamétricos de poblaciones celulares.
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También permite evaluar la clonalidad
de una población madura de células B o
T y determinar la ploidía del ADN, lo
cual resulta muy útil para el diagnóstico
o la predicción del pronóstico.

4. Los citómetros de flujo constan de tres sistemas principales:
Fluídica: es responsable de transportar las muestras a la celda de flujo
donde las células forman una corriente de una sola fila y cruzan el haz
láser..
Óptica: El sistema óptico consta de fuentes de luz (láseres), lentes, filtros
y detectores..
Electrónica.
Las células o partículas en la corriente de una sola fila viajan a
través del punto de interrogación donde son iluminadas por la luz
de uno o más láseres.
Los láseres iluminan las células o partículas, y se utilizan
espejos dicroicos (DM) y filtros ópticos (OF) para dirigir las
señales de luz resultantes a los detectores apropiados.
El software de análisis recopila e interpreta
la información digital
El análisis de datos puede realizarse en el ordenador conectado al
citómetro de flujo o en otros ordenadores con acceso a los datos.
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5. Solución
Técnica en que se emplea
un fluorocromo para marcar
un anticuerpo.
La fluorescencia ha sido usada
para visualizar ciertas
moléculas y estructuras por
medio de
la microscopia óptica.
El objetivo del análisis
por inmunofluorescencia en
citometría de flujo es asignar
a cada célula a un grupo
específico de células
que compartan
propiedades comunes
Inmunofluorescencia y su relación con la citometría
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6. Único
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7. La dispersión de luz y la fluorescencia son
los dos tipos de señales generadas y
recolectadas para una célula a medida que
viaja a través del haz láser.
Mide las propiedades físicas de una célula.
La dispersión frontal (FSC): Mide el
área superficial o tamaño de la célula.
La dispersión lateral (SSC) se refiere
a la luz refractada o reflejada por los
orgánulos citoplasmáticos o núcleos
de las células
Proporciona la granularidad y
complejidad interna de la
célula
Juntas, las señales FSC y SSC permiten
la separación de células en una muestra
que contiene poblaciones celulares
heterogéneas
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8. Las muestras aptas para el análisis de FCM incluyen PB, MO, líquido
cefalorraquídeo, derrames serosos, aspiraciones con aguja fina (PAAF) y tejido
fresco sin fijar.
Deben estar anticoagulados.
Los reactivos clave para los estudios de FCM son anticuerpos conjugados con
fluorocromos contra antígenos de superficie celular, citoplasmáticos o nucleares.
ANÁLISIS DE MUESTRAS
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9. Adquisición y análisis de datos
Los datos de citometría de flujo pueden mostrarse como histogramas o diagramas de puntos.
Los histogramas se utilizan para mostrar un solo parámetro.
El diagrama de puntos se utiliza para mostrar dos
parámetros, y cada punto representa una célula o
partícula.
Cuanto más intensa sea la señal, más se mostrarán
los datos en cada escala. Un antígeno se considera
positivo cuando su señal fluorescente asociada es
superior a la del control negativo (señal de fondo).
La gamificación se refiere al proceso de aislar poblaciones celulares
dentro de una muestra celular heterogénea según sus
características físicas y fenotípicas, y buscar la población celular
anormal.
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10. Dispersión lateral:
Área de la
célula.
Dispersión
frontal
Gránulos
citoplasmático
s y núcleo.
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11. Ruíz, G. (2009). Fundamentos de hematología. México: Panamericana. ISBN:9786077743040

12. APLICACIÓN EN EL DIAGNÓSTICO
DE LEUCEMIAS

13. Ruíz, G. (2009). Fundamentos de hematología. México: Panamericana. ISBN:9786077743040
METODOLOGÍA
Proteínas de superficie celular, citoplasmáticas o nucleares
↓
Tipificación y determinación de célula normal/maligna

14. Ruíz, G. (2009). Fundamentos de hematología. México: Panamericana. ISBN:9786077743040
PANELES

15. Ruíz, G. (2009). Fundamentos de hematología. México: Panamericana. ISBN:9786077743040
ANALISIS DE PUNTO O “DOT PLOT”
1.Tamaño y Complejidad
2. HLA

16. DISCRIMINACIÓN DEL TRASTORNO AGUDO O CRÓNICO
Ruíz, G. (2009). Fundamentos de hematología. México: Panamericana. ISBN:9786077743040

17. DISCRIMINACIÓN DEL TRASTORNO AGUDO O CRÓNICO
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18. DISCRIMINACIÓN DEL TRASTORNO AGUDO O CRÓNICO
Ruíz, G. (2009). Fundamentos de hematología. México: Panamericana. ISBN:9786077743040

19. CITOMETRÍA Y APOYO DIAGNÓSTICO
Ruíz, G. (2009). Fundamentos de hematología. México: Panamericana. ISBN:9786077743040
A) Enumeración de Células Leucémicas

20. Ruíz, G. (2009). Fundamentos de hematología. México: Panamericana. ISBN:9786077743040
B) Caracterización Inmunológica del Blasto

21. Ruíz, G. (2009). Fundamentos de hematología. México: Panamericana. ISBN:9786077743040
C) Identificación de Células Leucémicas

22. LEUCEMIAS LINFOBLÁSTICAS
Rodak, B. (2014). Hematología: fundamentos y aplicaciones clínicas. México: Médica Panamericana. ISBN: 9786079356163
ONTOGENIA
Indica el compromiso de la célula
con su linaje determinado.

23. Rodak, B. (2014). Hematología: fundamentos y aplicaciones clínicas. México: Médica Panamericana. ISBN: 9786079356163
CÉLULAS B

24. Ruíz, G. (2009). Fundamentos de hematología. México: Panamericana. ISBN:9786077743040

25. Rodak, B. (2014). Hematología: fundamentos y aplicaciones clínicas. México: Médica Panamericana. ISBN: 9786079356163

26. Rodak, B. (2014). Hematología: fundamentos y aplicaciones clínicas. México: Médica Panamericana. ISBN: 9786079356163

27. Rodak, B. (2014). Hematología: fundamentos y aplicaciones clínicas. México: Médica Panamericana. ISBN: 9786079356163
CÉLULAS T

28. Rodak, B. (2014). Hematología: fundamentos y aplicaciones clínicas. México: Médica Panamericana. ISBN: 9786079356163
LEUCEMIAS DE
LINAJE MIXTO
Score: >2.5

29. REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA
Hematología Clínica Shirlyn B. Mckenzie Última edición
Hematología Clínica Sans-Sabrafen. Última edición
Hematología Clínica Williams. Ultima edición
McDonald, G. (2000). Atlas de Hematología. Madrid: Médica
Panamericana. ISBN: 9788485320882
Ruíz, G. (2009). Fundamentos de hematología. México: Panamericana.
ISBN:9786077743040
Rodak, B. (2014). Hematología: fundamentos y aplicaciones clínicas.
México: Médica Panamericana. ISBN: 9786079356163

30. GRACIAS