COLECTA.pptx

Trabajo

1. COLECTA Y ENVIO DE MICROORGANISMOS PARA SU IDENTIFICACION Y FORMACION DE CEPARIO Hilda Gómez [email protected] Hilda Gómez Ramirez [email protected]

2. Sintomatología Diagnóstico de las enfermedades Síntoma: cualquier alteración física que se manifiesta a través de cambios en la estructura o en el comportamiento del insecto, como cambio de coloración, vómito, pérdida de apetito, anormalidad morfológica, etc. Signo: estructuras del patógeno asociados al tejido del insecto enfermo, como micelio, esporas, estromas, etc.

3. Diagnóstico: Fungosis Actividad reducida Lenta pérdida de apetito. Tegumento endurecido, momificado. Cubierto por micelio y esporas de color blanco, verde, de acuerdo a la especie

4. Diagnóstico : Bacteriosis Actividad reducida Tegumento oscuro y firme, arrugado o con aspecto de larva quemada. Salida de líquido marrón por la boca y ano. Presencia de bacterias formadoras de esporas en la hemolinfa

5. Diagnóstico: Virosis - VPN Actividad reducida Lenta pérdida de apetito. Tegumento amarillento y blando, llegando a desintegrarse. Salida de líquido lechoso por la boca y ano. Presencia de poliedros en la hemolinfa

6. INDICACIONES PARA EL ENVIO DE INSECTOS CON VIRUS ENTOMOPATÓGENOS   Las larvas de los insectos plaga cuando se infectan con virus entomopatógenos , se aíslan, presentando coloración blanquecina, dejan de alimentarse, sus movimientos se vuelven lentos y cuando mueren se sostienen por sus falsas patas con la cabeza  hacia abajo, la piel o cutícula de la larva se rompe fácilmente desprendiendo una solución lechosa SIN OLOR, que contiene las partículas virales.   Para su recolección, se recomienda usar una pinza, recolectando las larvas antes de su  muerte, colocarlas en un frasco estéril , los cuales se hacen hervir en una olla con agua, luego se sacan, se escurren y se dejan enfriar. Colocar las larvas recolectadas, cerrarlas herméticamente y conservarlas en la refrigeradora hasta su envío.   Es recomendable enviar como mínimo 5 individuos por frasco, para evitar la pérdida de material si se contaminan varios de ellos. Las muestras así preparadas, acondicionarlas y enviarlas en una caja de tecnopor con hielo, si no fuera posible enviarla en una caja plástico, tecnopor o cartón duro.   Las muestras deben ser enviadas lo mas pronto posible al Laboratorio de Entomopatógenos de la SBC del SENASA, debiendo adjuntar toda la información necesaria para su identificación y registro.

7. Diagnóstico: Nematodos entomopatógenos Larvas o pupas de color rojo vino (Heterorhabditis) Larvas o pupas de color amarillento (Steinernema)

8. Colección de insectos enfermos Colectar consiste en recoger insectos vivos o muertos, en el follaje, axilas, tallos, corteza de los árboles, sobre la superficie o en el interior de éstos y en el suelo. Los insectos infectados con entomopatógenos , vivos o muertos se encuentran en ecosistemas naturales, acuáticos o terrestres, agroecosistemas y en crías masivas de insectos. Si el insecto se encuentra pegado a una superficie, es necesario cortar la porción del sustrato que lo contiene y colocarlo en una placa o frasco, pero nunca en sobres de papel o en medio líquido. El material se conserva mejor si se mantiene a bajas temperaturas. Es posible colectarlos sin haber encontrado el hospedero enfermo, haciendo uso de insecto trampa para aislar hongos entomopatógenos que se encuentran en el suelo.

9. Los insectos muertos, se acondicionan en frascos de vidrio o plástico, evitando la introducción de tierra u otro material contaminante. enviar como mínimo 10, ya que es posible que se contaminen varios de ellos. Las queresas y ninfas de mosca blanca, se encuentran pegadas en las hojas, se debe recolectar las hojas con los insectos, ponerlos en una placa de Petri o en un taper , no poner algodón o papel humedecido, ya que la humedad favorece el crecimiento de bacterias u hongos saprófitos. También se puede engrapar las hojas en que se encuentran los insectos micosados en papel para evitar que las hojas al secarse se arruguen y se pierda la muestra, además el papel absorberá la humedad de la hoja.

10. Datos de colección (1) 1 . Nombre del colector. 2. Nombre del insecto colectado (familia, género, especie). 3. Lugar (en este caso no es suficiente poner el nombre del área, hay que incluir el lugar preciso). 4. Hospedante, cultivo o ambiente. 5. Altitud. 6. Fecha. 7. Observaciones adicionales (estado del insecto, signo, síntomas, condiciones climáticas, etc )

11. Datos de colección (2) 1. Nombre del cultivo: ……………………………………………….. 2. Nombre del insecto: (familia, género, especie)……………………………………………….. 3. Lugar: ……………………………………………………………… Sector: ……………………………………………………… Distrito: ……………………………………………………. Caserío: …………………………………………………….. Provincia: …………………………………………………… Departamento: ……………………………………………… Región: ……………………………………………………… 4. Fecha de colección: …………………………………………………. 5. Nombre del fundo: ………………………………………………….. 6. Nombre del agricultor: ……………………………………………… 7. Nombre del colector: ……………………………………………….. 8. Coordenadas: ……………………………………………………….. 9. Altitud: ……………………………………………………………… 10. Temperatura ºC: …………………………………………………….. 11. Humedad Relativa: ………………………………………………….. Se aplicó anteriormente hongos entomopatógenos ?………………………..

12. Aislamiento Aislar los microorganismos asociados al insecto en colonias puras. Evitar el empleo de material descompuesto, en donde fácilmente proliferan microorganismos contaminantes o saprofitos. Usar el material colectado a la brevedad posible, si no es posible, almacenarlo a bajas temperaturas, manteniéndolo lo mas seco posible

13. Conservación de cepas La conservación de cepas, el mantenimiento y la construcción de colecciones es importante en el estudio de la microbiología y en el desarrollo e investigación de la misma. Esto se debe a que en el transcurso del tiempo, la selección de microorganismos se ha constituido en la base de múltiples procesos biotecnológicos, como la producción de antibióticos, solventes orgánicos, enzimas, entre otros.

14. Objetivos Mantener la pureza del aislamiento. Conservar la viabilidad. Estabilidad genética en el tiempo (evitar posibles cambios de la población por efecto de selección)

15. Conservación en agar inclinado (cuñas)

16. Proceso de conservación de cepas de hongos entomopatógenos mediante la técnica de papel filtro

17. CAMARA HUMEDA HOJA FRUTO 4º C a -20 C AISLAMIENTO 10 gr . SUELO SECAR EN SOMBRA 1 gr. SUELO Metodología de Aislamiento Hongos antagonistas

18. Cámara húmeda en bandeja y bolsa d e plástico Cámara húmeda en recipiente de plástico Cámara húmeda en bolsa d e plástico Cámara húmeda en bolsas de plástico

19. Cámara húmeda en bandeja y bolsa d e plástico Cámara húmeda en bolsa d e plástico Aislamiento

20. Aislamiento de nematodos entomopatógenos Tomar muestras de suelo en varias zonas, a una profundidad de 15 cm, usando una lampita o pala, en un volumen de 1000 gramos En cada área colectar 3 muestras, haciendo un total de 3 submuestras por cada área. Juntar las submuestras , homogenizarlas y si el suelo está muy seco, agregar agua, para darle la humedad adecuada, el suelo debe quedar húmedo, no mojado. Colocar el suelo húmedo en envases limpios de ½ litro. Colocar 10 larvas de Galleria mellonella sobre la superficie del suelo de cada muestra y cubrir con su tapa, poner los datos de colección Invertir el recipiente y enviarlas a la SCB para su evaluación. Si proceden en la misma zona, a los 7 días revisar y retirar los insectos muertos. Enjuagar los cadáveres con agua estéril. Colocar los cadáveres recuperados de cada suelo, en forma separada, sobre una placa de Petri con papel filtro. Los insectos muertos por Heterorhabditis , toman una coloración rojo o marrón rojizo y los insectos muertos por Steinernema varían de crema, ocre hasta casi negros.

21. CIAT - COLOMBIA

22. CIP - PERU

23. Dosis 200 larvas de Galleria infectadas / Ha 500 larvas de Galleria infectadas / Ha 40 millones de JI / Ha 10 5 larvas infectadas /m 2 o metro lineal 2.5 billones / Ha dosis

24. Preparación Preparacion

25. Fountain Geyser Solución final

26. APLICACIÓN DE Heterorhabditis bacteriophora CONTRA GUSANOS BLANCOS (“GALLINAS CIEGAS”) QUE AFECTAN AL CACAO, Provincia Padre Abad - Ucayali

27. Relación nematodo - Bacteria Preparacio Los NEP, forman mutualismo con bacterias de los géneros Photorhabdus y Xenorhabdus , específicos para cada género de NEP. De esta asociación, los NEP se benefician porque las bacterias interfieren con el sistema de inmunidad del huésped, matan al insecto hospedero por septicemia, descomponen sus tejidos y generan antibióticos que inhiben el desarrollo de hongos y otras bacterias, permitiendo a los NEP multiplicarse dentro del cadáver y dispersarse en la naturaleza. De otro lado, las bacterias utilizan a los nematodos para su protección y transporte y para evadir el sistema inmunológico que el huésped genera contra bacterias . Relación nematodo - bacteria

28. Envío de muestras de ensayos para verificar la acción del microorganismo aplicado

29. Detalle grapas y codificación Toma de muestras para envío a laboratorio de la SCB

30. Aislamiento

31. Laboratorio de entomopatógenos SCB - SENASA Gracias