Cromatografía

1. 1 º º º º º º º º º º Fase estacionaria Fase móvil 1 2

2. Descubridor El botánico ruso Mikhail Tswett ( Mikhail Semenovich Tsvett , 1872-1919)

3. CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA. En este caso se utiliza una placa recubierta con fase estacionaria manteniendo un pequeño espesor constante a lo largo de la placa. El eluyente ascenderá, por capilaridad, por la placa y arrastrará los componentes a lo largo de ésta produciendo “manchas” de los componentes . Se usan láminas de: vidrio como soporte del adsorbente , plástico ( ej : acetato ) ó metálicos ( ej : aluminio). Los tamaños de la placa para CCf convencional son: 20 x 20; 10 x 20 y 5 x 2. Hay placas que contienen un indicador de fluorescencia, para facilitar la identificación de las muestras. Si no se usa indicador y los componentes no son coloridos se requerirán técnicas de revelado .

4. (cromatografía de capa fina o sobre papel) CROMATOGRAFIA SOBRE COLUMNA (cromatografía líquida)

5. 5 Clasificaciones de cromatografía Según el tipo de fase móvil y de fase estacionaria Según el formato y la geometría de la fase estacionaria Según el tipo de interacción entre la fase estacionaria y los solutos Según el tipo de flujo empleado Según el tipo de modificaciones en la fase móvil Según el método de detección Según la finalidad del experimento

6. 6 Según el tipo de fase móvil y de fase estacionaria Fase estacionaria Fase móvil Sólido Líquido Gas Líquido adsorbido Líquido Gas

7. 7 Según el formato y la geometría de la fase estacionaria Fase estacionaria Formato Por ejemplo: Sílice Placa fina Columna HPLC-NP

8. 8 Según el tipo de interacción entre la fase estacionaria y los solutos Interacción Cromatografía Carga – carga Intercambio iónico Dipolos Fase Normal Fase Reversa Hidrofóbica Efecto hidrofóbico Diversa pero específica Afinidad Enlaces covalentes IMAC

9. 9 Según el tipo de flujo empleado Flujo por Cromatografía Gravedad En columna Capilaridad En papel Capa fina Fluido a presión HPLC Gases

10. 10 Según el tipo de modificaciones en la fase móvil Gradiente de: Polaridad Concentración pH Temperatura

11. 11 Según el método de detección Detección por Espectroscopías diversas IR, UV-Vis, Fluorescencia, MS Propiedades físicas Índice de refracción Conductividad Ionización Reactividad Revelado y derivatización A tiempo fijo A distancia fija Rf Tiempo de retención Volumen de elución

12. 12 Según la finalidad del experimento Separación y purificación Preparativa Separación, cuantificación y caracterización Analítica

13. Métodos cromatográficos De gases En capa fina En líquidos inmovilizados De exclusión molecular Intercambio iónico Hidroxiapatita Hidrofóbica Afinidad HPLC

14. 54 CROMATOGRAFÍA

15. 15 ¿En qué son distintas las sustancias que deseo separar ? 1.- Carga eléctrica 2.- Hidrofobicidad superficial 3.- Afinidad por iones metálicos 4.- Afinidad por ligandos específicos 5.- Radio hidrodinámico (tamaño)

16. 55 CROMATOGRAFÍA

17. 56 CROMATOGRAFÍA

18. CROMATOGRAFÍA Análisis cualitativo cromatográfico Los parámetros cromatográficos que se utilizan en el análisis cualitativo son dos: tiempo de retención(t R ) y volumen de retención (v R ) Procedimiento : ambos parámetros han de ser comparados con los de una sustancia patrón Inconvenientes: No se tiene siempre certeza de que ambos parámetros sean reproducibles, ni aún manteniendo condiciones de trabajo constantes. Es preferible utilizar valores relativos, en vez de absolutos. Bajo condiciones de flujo de fase móvil F c constante :

19. 62 CROMATOGRAFÍA

20. 63 CROMATOGRAFÍA

21. 64 CROMATOGRAFÍA

22. 65 CROMATOGRAFÍA

23. 66 CROMATOGRAFÍA INSTRUMENTACIÓN

24. 67 CROMATOGRAFÍA INSTRUMENTACIÓN

25. 68 CROMATOGRAFÍA en los dos tipos de cromatografía

26. 69 CROMATOGRAFÍA

27. 70 CROMATOGRAFÍA (CG) Ejemplos: Conductividad térmica ( general-no destructivo) Ionización en llama (destructivo) Captura electrónica (específico-no destructivo)

28. 73 CROMATOGRAFÍA EJEMPLO CG

29. 74 CROMATOGRAFÍA HPLC (Detector de índice de refracción)

30. 76 CROMATOGRAFÍA CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA vs CROMATOGRAFIA DE GASES Son al día de hoy dos poderosísimas herramientas de análisis Ambas admiten acoplamiento con otras técnicas de detección (hibridación de técnicas, por ejemplo con espectrometría de masas o plasmas..etc) La cromatografía de gases, requiere muestras gaseosas o fácilmente volatilizables. El resto de muestras que no poseen esas características pueden ser analizadas por HPLC. Ambas técnicas por su versatilidad, y por las diversas posibilidades que ofrece la selección de la columna cromatográfica, permiten abordar análisis de multicomponentes en muestras de diversa procedencia, con elevada precisión y sensibilidad (dependiendo del detector).