Finger Printingggggggggggggg - Copia.docx

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1. Aurora Crudeli
Titolo: Finger Printing
Obiettivo: Scoprire attraverso il test finger printing chi è il padre del bambino
Materiali e strumenti utilizzati:
▫Camera per elettroforesi con vassoio e pettine
▫Micropipette
▫Puntali
▫Provette e portaprovette
▫Vaschetta di plastica
▫Agarosio in polvere
▫Buffer Tris-acetato EDTA
▫Fast blust DNA (colorante)
▫Acqua sterile
▫DPI (camice e guanti)
Cenni teorici:
Che cos’è il DNA?
Il DNA chiamato anche acido desossiribonucleico è un polimero di nucleotidi
ciascuno formato da tre componenti: molecola di desossiribosio (zucchero con
cinque atomi di carbonio), gruppo fosfato e base azotata (timina, guanina,
citosina, adenina).
In cosa consiste il DNA finger printing?
Il DNA finger printing è una tecnica utilizzata per l’identificazione di un
soggetto. Il seguente test si basa sull’analisi dei STR (sequenze di DNA) che
sono dei marcatori presenti nel genoma di ogni individuo. L’analisi dei STR
consiste nel taglio del DNA tramite enzimi di restrizione che permettono di
ottenere filamenti di DNA di diversa lunghezza. Grazie all’utilizzo della camera
elettroforetica è possibile confrontare i profili genetici dei soggetti in questione
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2. Aurora Crudeli
Procedimento:
1° FASE preparazione della soluzione diluita
1.Prelevare 50 ml di buffer e 200 ml di acqua distillata

Acqua distillata Buffer
2° FASE preparazione con gel agarosio e camera elettroforetica
2.Prendere la camera elettroforetica e inserire i pettini per formare i
pozzetti
3.Sciogliere il gel agarosio al microonde
4.Far raffreddare il gel e versarlo nella vaschetta elettroforetica evitando la
formazione di bolle
5.Aspettare 30 minuti per la polimerizzazione del gel
6.Togliere il pettine (o i pettini) e ricoprire il gel con la soluzione preparata
precedentemente
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3. Aurora Crudeli

Piastra elettroforetica e voltmetro
3° FASE preparazione dei campioni
7.Tirare 10 µl di DNA dalle provette attraverso l’utilizzo delle micropipette e
inserire i DNA nei relativi pozzetti seguendo questo ordine:
a.DNA madre
b.DNA figlio
c.DNA possibile padre 1
d.DNA possibile padre 2
IMPORTANTE: ogni volta che si preleva il DNA di ciascun individuo bisogna
cambiare il puntale così da non mischiare i diversi DNA
4° FASE attivazione della camera elettroforetica
8.Chiudere il coperchio della camera elettroforetica e accendere
l’alimentatore così da permettere l’inizio della corsa elettroforetica
9.Aspettare circa 60 min prima di staccare l’alimentatore
5° FASE colorazione del gel attraverso il Fast Blust
10.Estrarre il gel e metterlo in una vaschetta di plastica contenente il
colorante che ci permetterà di visualizzare le bande
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4. Aurora Crudeli

Osservazioni:
Il processo di finger printing è un processo che richiede tanto tempo e tanta
precisione. Bisogna prestare tanta attenzione nel momento in cui si inseriscono
i DNA all’interno dei pozzetti perché può capitare di sbagliare ad inserire nel
posto giusto il DNA o di lasciare il puntale troppo presto e rischiare quindi di
farlo uscire dal pozzetto. Tutto dipende dalla precisione e dalla fermezza della
mano di chi esegue questa operazione.
Conclusioni:
Attraverso i risultati ottenuti siamo riusciti a capire chi dei due uomini era
davvero il padre de bambino, l’osservazione e il confronto delle bande ci hanno
permesso di individuare quale dei due DNA dei possibili padri era compatibile
con quello del bambino.
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