Ganglio linfático, histología, biopsia e inmunohistoquímica básica

Una presentación realizada a manera de introducción antes de abordar el tema de linfomas. Donde se tratan aspectos básicos de histología, de la toma de biopsia y el manejo adecuado de esta, y los conceptos básicos de inmunohistoquímica y su utilidad en el diagnóstico de linfomas

1. Ganglio linfático
Histología, biopsia e
inmunohistoquímicabásica
Dr. Luis Humberto Cruz Contreras
Hospital General
Morelia, Mich

2. Ganglio linfático -anatomía

3. Ganglio
linfático
Centro
germinal
Manto

4. Centro
germinal
•Blastos(centroblastosy
centrocitos)
•Macrófagos de cuerpos
teñibles
•Células dendríticas
foliculares (capturar y
preservar antígenos para
presentación)
Zona del Manto
•Linfocitos pequeños NO
estimulados (folículos
primarios)
Zona Marginal

5. Paracorteza
Linfocitos T
Células
interdigitantes
reticulares
Vénulas de
endotelio
ALTO

6. Ganglio
linfático
Manejo
Toma de biopsia y manejo SUBOPTIMO
•Diagnóstico correcto
•Diagnóstico oportuno
•MANEJO -
Toma de Biopsia
•Selección
•Disección COMPLETA
•NO fragmentos

7. Ganglio
linfático
BAAF
UTILIDAD BAAF
•Separar carcinoma vs Linfoma
•Detectar recurrencias
•Estadificación
•Diagnóstico de LINFOMA …
NO!!

8. Ganglio
linfático
MANEJO
PATOLOGÍA
Fijación
•10 veces el volumen en formol
•REBANAR
•FIJACIÓN 24 HRS
•Se puede realizar citología por
impronta
•Tejido fresco sin fijar para biología
molecular, citometríade flujo

9. Ganglio
linfático
PROCESO
HISTOLÓGICO
CORTES 3-5 MICRAS
•Tinción HE
•Giemsa–Wright
•PAS -Inmunoglobulinas
•Reticulina

10. Gangio
linfático
IHQ
INMUNOHISTOQUÍMICA
•Estándar en muchas partes
•CONFIRMATORIA, No Dx
•Diagnóstico PRECISO
•¿ Costo?
Trivial, ante la necesidad de Dx
preciso y los costos de Tratamiento

11. Gangio
linfático
IHQ
INMUNOHISTOQUÍMICA
•Control de Calidad –Testigos
•Buscar testigos internos…
UN CORTE UNIFORMEMENTE
AZUL…. NO SIRVE

12. Ganglio linfático
PREGUNTAS
INICIALES Y
GENERALIDADES
¿Es un linfoma?
•CD45, EMA, PS100, HMB45
CD45, LCA (Leucocytecommonantigen)
•Presente en casi todos los linfocitos
•AUSENTE,
•Precursores de linfocitos (linfomas linfoblástico)
•Linfoma anaplásico(Puede ser positivo para
EMA, pero no otras citoqueratinas)
•Células Reed Stenberg/ Hodgkin

13. ¿Linfoma B?

14. ¿Linfoma B?
Inmunoglobulinas
•Células B = Capacidad de secretar Ig
•Retículo endoplásmico–
Paranuclear(Golgi positivo)
•Clonalidad–Monotípico
•Solo un tipo de cadena ligera
(RESTRICCIÓN DE CADENAS
LIGERAS)

15. CD20 (L26)
Fosfoproteína
NO glucosilada
de Membrana
Membrana de células B
•NO ES PERFECTO
•No se expresa en etapas tempranas
•NO se expresa cuando comienzan la
diferenciación a cél. plasmática
MEMBRANA
•Núcleo, nucléolo, citoplasma =
NEGATIVO

16. CD79a
Glicoproteína de
membrana que
se asocia con las
Ig
CITOPLASMA DE
células B
•SE UNE A CADENA alfa de Ig
•Marcador casi perfecto
•Todas las etapas de
Diferenciación
•50% Linfomas linfoblásticosT

17. Otros marcadores…

18. CD5
Glicoproteina
de membrana
cél. T
Expresado en células T
•De manera más débil en
LINFOMA LINFOCÍTICO DE
CÉLULAS PEQUEÑAS
•LEUCEMIA LINFOCÍTICA
CRÓNICA
•LINFOMA DE CÉLULAS DEL
MANTO

20. •COMMON ACUTE LINFOBLASTIC
LEUKEMIA ANTIGEN
•CENTRO GERMINAL
•Linfomas con origen en centro
germinal : FOLICULAR, DIFUSO
DE CÉL. GRANDES, BURKITT
•Linfomas / Leucemias
linfoblásticosB y T
CALLA
CD10
Endopeptidasa
Neutral de
superficie (Zinc
Dep)

21. CD23
Glicoproteína
de membrana
Células B activadas
•Ganglios reactivos centro germinal y
zona del manto
•CÉLULAS DENDRITICAS FOLICULARES
LINFOMA linfocítico de cél.
Pequeña / LLC
•Marcador útil de este linfoma

22. CiclinaD1
Ch 11q13
Reg. Ciclo celular
Translocadaen
•LINFOMA DE CÉL. DEL MANTO
•Leucemia de cél. peludas
•Tinción NUCLEAR, en citoplasma
es negativa
Control Interno
•CÉLULAS ENDOTELIALES

23. Bcl-2
Proteína de
membrana
mitocondrial
Regula apoptosis
•Ch18q21
•Translocación 14:18
•LINFOMA FOLICULAR
Utilidad
•Tej. Reactivos : Linfocitos B y T pequeños
•Negativa en centro germinal normal
•POSITIVA EN LINFOMA FOLICULAR!!!!
•Reactivo vs folicular

24. Bcl-6
Factor represor
transcripción
dep. ZINC
Expresa centro germinales reactivos
•Ch3q27
•LINFOMA FOLICULAR, LINFOMA
DIFUSO, LINFOMA BURKITT
•Tinción NUCLEAR
Utilidad
Origen de centro germinal

25. CD3
glicoproteína
asociada a
receptor de cél. T
Marcador de células T
•Pérdida de este marcador
•SOLO 25% de linfomas T
•Tinción membrana
Utilidad LIMITADA
•No es el marcador ideal

26. CD5 Marcador EXCELENTE DE CÉL.
T!!
•Casi todos los linfomas T
•Tinción Membrana FUERTE
CUIDADO!!!
•Linfoma linfocítico de cel. Pequeña / LLC
y MANTO
•Tinción débil
•Diferencial: CD20 y CD79a

27. Otros
CD1a
•Timocitoscorticales y CÉL. LANGERHANS
CD4
•Linfocitos T Cooperadores
CD8
•Linfocitos T citotóxicos
CD45RO
•Marcador Linfocitos T (Sustituido actualmente por CD3 y CD5)
CD43
•Sialophorinade Membrana, células T, B
•NEOPLASIA GRANULOCÍTICAS INDIFERENCIADAS

28. CD56
células NK
CD56 / NCAM
•Neural celladhesión molecule….
Identificada en cerebro
•Tumores neuroectodérmicos
•Células Natural Killer(2 tipos)
•Célula T NK
•Célula NK-
CD57
•Algunos linfocitos normales periféricos y
algunas células NK

29. TdT
Terminal
dioxynucleotidyl
transferasa
PRECURSORES LINFOIDES
B Y T
•DNA polimerasa intranuclear que
cataliza la unión de
dioxidonucleótidos
•Linfoma / Leucemias linfoblásticas
•NO Leucemia mieloide
TINCIÓN NUCLEAR
•Presente en 1-2% linfocitos MO
•Timocitoscorticales

30. CD30 Familia de factor de necrosis tumoral =
activación
•Tinción membranosa y paranuclear
•Tinción difusa = NEGATIVO
Expresión
•Células reactivas parafoliculares(blastoides)
•LINFOMA ANAPLÁSICO
•CÉLULAS DE REED-STENBERG

31. CD15
Reconoce
sequenciade
azúcar
(haptenoX)
FINAL de diferenciación MIELOIDE
•NEUTRÓFILOS… Testigo interno
•MEMBRANA Y CITOPLASMA
Células Reed-Sternberg/ Hodgkin
•70-80% Linfomas Hodgkin
•Débil : algunos linfomas B y T, Carcinomas
y células epiteliales normales

32. CD21
Receptor de
C3d y para EBV
Células dendríticas
foliculares
•EXCELENTE
MARCADOR
•Algunos linfocitos B

33. CD21
Receptor de
C3d y para EBV

34. CD68
proteína
transmembrana
•TRÁFICO DE LISOSOMAS
Expresada en histiocitos
normales y neoplásicos

35. Proteína S 100
proteína de
unión a calcio
¿S100?
•Solubles en SULFATOde amonio
neutral al 100%
•Identificadas por PRIMERA vez en
cerebro
Expresion
•Células interdigitantes
reticulares
•Células de Langerhans
•Tumores neurales, Melanomas

37. Ki67
Nucleoproteína
NO histona
¿Ki67?
•Kiel, Alemania, clona número 67
•MIB-1 (Otro anticuerpo misma molécula)
Nucleoproteína que se expresa
casi en todo el ciclo celular
•EXCEPTO G0
•Máximo en mitosis
•Índice de proliferación
•Valor pronóstico
•Ayuda diagnóstica

38. Ki67
Ayuda
diagnóstica
Linfoma de
células
pequeñas
Linfoma B
Difusode
células grandes
Linfoma Burkitt
1-15% 45-95% 100%
Índicede proliferación

39. ALK-1
Anaplastic
lymphoma
kinase
Tirosina cinasa85% LINFOMAS
ANAPLÁSICOS
•Resultado Translocación 2:5
•Citoplasma, núcleo y nucléolo
•Algunos linfomas difusos
También tumor miofibroblástico
inflamatorio
•Misma translocación

40. Diagnósticarlo
imposible
•Ganglios demasiado
pequeños
•Artificios
•Necrosis extensa
•MALA FIJACIÓN
NO diagnosticar

41. Diagnóstico
Categorías
Reactivo
Neoplásico
•Linfoma
•Cél. Grande
•Cél. pequeñas

42. Divisiones
iniciales
Linfomas
•NO Hodgkin
•Hodgkin
Linfomas
•Cél. Madura
•Células precursoras
Linfomas
•Células B
•Células T

45. Denis Parson
Burkitt
1911-1993
Médico Irlandés
•EnniskillenIrlanda
•Padre ingeniero y ornitólogo
•Familia protestante evangelista-papel activo en religión
•Inicialmente entró a la escuela de ingeniería y por la
influencia de un tío médico cambió
•Perdió un ojo cuando era pequeño
Colegio real de cirujanos –EDINBURGO
(Escocia)
•Trabajo como cirujano en varios hospitales

46. Denis Parson
Burkitt
1911-1993
Quiso ayudar a los más desprotegidos
•Se unió al ejercito en la segunda guerra mundial
(Kenia, Somalia, Uganda)
•Solicitó quedarse en Uganda
•Interés en epidemiología
•RELACIONÓ HIDROCELE CON FILARIASIS
•Inició una fábrica de prótesis para enfermos amputados por
elefantiasis
1957-Encontró su primer caso de Linfoma de
Burkitt,
•Reuníodatos y pacientes y encontró 51 pacientes
•Sarcoma indiferenciado

47. Denis Parson
Burkitt
Continuó su investigación
•Posteriormente lo relacionó con los
ganglios linfáticos (lymphoma
syndromein Uganda, Burkitty Grez
O’Connor)
•Causa del linfoma (Mosquitos??)
•1961 Michael Anthony Epstein le pidió
muestras para buscar virus
•Se aisló 1ª vez Virus Epstein Barr