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técnicas de tinción

1. Materia: Histología
Doctora: Monica Nayeli Madrazo Moya
Tema: Microoscopios, técnicasde tinción, inmunohistoquímicae
Inmunofluorescencia
Alumna: Esthefania Hernández Huchin.

2. MICROOSCOPIO E LECTRÓNICO:
•Herramienta que emplea un
haz de electronespara
generar una imagen de alta
resolución de objetos muy
pequeños (átomos).
•Fue inventado por Ernst Ruska
en 1931.

3. ¿CÓMO FUNCIONA?
•El microscopio electrónico utiliza
lentes electromagnéticaspara
enfocar y dirigir el haz de
electrones.
•Los electrones que atraviesan la
muestra son detectados y
utilizados para formar la imagen,
que es proyectada en una
pantalla.

4. Microscopio Electrónico de
Transmisión (MET)
Microscopio Electrónico de
Barrido (MEB)
Histología Ross 8va edición
Capítulo 1: Técnicas-microscopia
Pág 15.

5. DIFERENCIAS:
Microscopio Electrónico de
Transmisión (MET)
•Muestra: Debe ser extremadamente delgada
(aproximadamente 10-200 nanómetros) para que el
haz de electrones pueda atravesarla.
•Funcionamiento: Un haz de electrones atraviesala
muestra. Las variaciones en la densidad de la
muestra dispersan los electrones de forma diferente,
y estos electrones transmitidos son los que forman la
imagen.
•Imagen: Genera una imagen en dos dimensiones
(2D). Muestra la ultraestructura internade la muestra,
como los orgánulos de una célula.
•Aplicación:Estudiar la estructura de virus, células, o
analizar defectos a nivel atómico en materiales.
Microscopio Electrónico de
Barrido (MEB)
•Muestra: No necesita ser delgada. El haz de
electrones escanea la superficiede la muestra, que
debe ser conductora.
•Funcionamiento: Un haz de electrones escanea la
superficiede la muestra punto por punto. Los
electrones que son emitidos (electrones secundarios)
son detectados.
•Imagen: Genera una imagen en tres dimensiones
(3D). Muestra la topografía y la morfología de la
superficiede la muestra.
•Aplicación: Se usa para examinar la textura de la
superficie de materiales, y la morfología de insectos
o bacterias.

6. TÉCNICAS DE TINCIÓN

7. ZIEHL-NEELSEN (ZN) -PARA BACILOS ÁCIDO-
ALCOHOL RESISTENTES (BAAR)
•Ziehl-Neelsen (ZN) -para bacilos ácido-alcohol resistentes (BAAR)
•Tiempo:Aproximadamente 10-15 minutos. El proceso es relativamente
rápido una vez que la muestra está fijada.
•Procedimiento:Se aplica un colorante principal (fucsina fenicada) con
calor para que penetre la pared celular cerosa de los bacilos. Luego se
decolora con una mezcla de ácido-alcohol y finalmente se contratiñe
con azul de metileno.
•Lo que tiñe:La pared celular de los bacilos, que es rica en lípidos, retiene
el colorante principal incluso después de la decoloración con ácido-
alcohol. Por eso se les llama bacilos ácido-alcohol resistentes.
•Uso en la práctica médica:Es la tinción más utilizada para detectar
bacilos de la tuberculosis (Mycobacterium tuberculosis) y otras
micobacterias en muestras de esputo, tejidos o líquidos corporales. Es
una herramienta clave para el diagnóstico inicial de la tuberculosis.
•Cómo se ve:Los bacilos de la tuberculosis se ven como pequeños
bastones rojos o fucsiassobre un fondo azul claro o verdoso (el color de
la contratinción).

8. ÁCIDO PERYÓDICO DE SCHIFF (PAS,
PERIODIC ACID-SCHIFF REACTION)
•La reacción de ácido
peryódico de Schiff (PAS,
periodic acid-Schiff
reaction) tiñe hidratos de
carbono y macromoléculas
con abundancia de estos.
Se usa para mostrar el
glucógeno en las células, el
moco en diversas células y
tejidos, y la membrana
basal subyacente en
epitelios y fibras reticulares
en el tejido conjuntivo. El
reactivo de SchifF también
se utiliza en la reacción de
Feulgen, basada en una
hidrólisis débil con ácido
clorhídrico para teñir el
ácido desoxirribonucleico
(ADN).
Microfotografía de tejido renal teñido
con el método del ácido peryódico
de Schiff (PAS). En este método
histoquímico se muestran y localizan
los hidratos de carbono y las
macromoléculas ricas en estas
sustancias. Las membranas basales
son positivas al PAS, como lo muestra
el color magenta de estos sitios. Los
túbulos renales (7) están delimitados
por la membrana basal teñida que
rodea los túbulos. Los capilares
glomerulares (C) y el epitelio de la
cápsula de Bowman (CB) también
presentan membranas basales PAS
positivas. La tinción de contraste de la
muestra, con hematoxilina, permite
visualizar los núcleos celulares. 320X.
Tiempo:Unos 20-30 minutos.

9. GROCOTT (METENAMINA DE
PLATA) -PARA HONGOS
•Tiempo:La preparación puede llevar alrededor de 1-2 horas,
incluyendo los pasos de incubación.
•Procedimiento:Es una técnica de impregnación argéntica. El
ácido crómico oxida los polisacáridos en las paredes celulares
de los hongos, y luego la plata metenamina se deposita en
estas estructuras oxidadas, produciendo un precipitado
oscuro.
•Lo que tiñe:Principalmente la pared celular de los hongosy
las membranas basales.
•Uso en la práctica médica:Es considerada la tinción de
referencia para la detección de hongosen muestras de
tejido, como en infecciones fúngicas profundas. Su alta
especificidad y contraste permiten un diagnóstico preciso.
•Cómo se ve:Las paredes celulares de los hongos (hifas,
levaduras, esporas) se tiñen de negro o marrón oscuro,
destacándose sobre un fondo verde claro o rosado.

10. AZUL ALCIÁN
•Tiempo:Aproximadamente 30-40 minutos.
•Procedimiento:Se utiliza un colorante catiónico
que se une a grupos aniónicos en los
mucopolisacáridos ácidos, como los carboxilos y
los sulfatos. El pH de la solución determina la
especificidad de la tinción.
•Lo que tiñe:Mucinas ácidas. A pH 2.5 tiñe todas
las mucinas ácidas; a pH 1.0, solo las fuertemente
sulfatadas.
•Uso en la práctica médica:Se usa para
diferenciar los tipos de mucinas producidas por
tumores. Es útil en el diagnóstico de
adenocarcinomas, especialmente en el tracto
gastrointestinal.
•Cómo se ve:Las mucinas ácidas se tiñen de color
azul turquesa o verdoso. A menudo se usa en
combinación con PAS para diferenciar mucinas.
Mucinas ácidas teñidas de color azul
turquesa.

11. HIERRO COLOIDAL
•Tiempo:La tinción puede tardar alrededor de 1-2 horas
debido a los pasos de incubación y lavado.
•Procedimiento:Partículas de hierro coloidal a pH bajo se
unen electrostáticamente a los grupos carboxilo y sulfato
de los mucopolisacáridos ácidos. Posteriormente, se
visualiza el hierro con una reacción de azul de Prusia.
•Lo que tiñe:Mucopolisacáridos ácidossulfatados y no
sulfatados. Es una técnica alternativa al Azul Alcián.
•Uso en la práctica médica:Se utiliza para la detección de
mucinas en el diagnóstico de mesoteliomas y otras
patologías que involucran el metabolismo de los
mucopolisacáridos.
•Cómo se ve:Las mucinas ácidas se tiñen de azul intenso
sobre un fondo pálido.

12. FIBRAS RETICULARES (TINCIÓN DE
PLATA)
Tiempo:El procedimiento puede tomar más de una hora, ya que implica pasos de
oxidación, sensibilización e impregnación con plata.
Procedimiento:Se utilizan sales de plata para impregnar las fibras reticulares.
Después de la impregnación, la plata se reduce a plata metálica, que es visible.
Lo que tiñe:Fibras reticulares(colágeno tipo III). Estas fibras forman el andamiaje de
sostén de muchos órganos como el hígado, el bazo y los ganglios linfáticos.
Uso en la práctica médica:Es fundamental en la patología hepática para evaluar el
grado de fibrosis y cirrosis, ya que muestra el colapso de la arquitectura del hígado.
También se usa para analizar la arquitectura en los ganglios linfáticos.
Cómo se ve:Las fibras reticulares se tiñen de negro o marrón oscuro, formando una
red fina y delicada que resalta la estructura del tejido.
Una red fina de fibras de colágeno tipo
III teñidas de negro, resaltando la
arquitectura del tejido.

13. ROJO CONGO
•Tiempo:Unos 30 minutos. El protocolo puede variar si se
usa calor o microondas para acelerar la tinción.
•Procedimiento:Es un colorante que se une a las
estructuras de beta-plegadas que caracterizan a los
depósitos de amiloide. Se utiliza luz polarizada para
confirmar el resultado.
•Lo que tiñe:Amiloide.
•Uso en la práctica médica:Diagnóstico de amiloidosis,
una enfermedad causada por la acumulación anormal
de proteínas de amiloide en diferentes órganos.
•Cómo se ve:El amiloide se tiñe de color rojo anaranjado
con luz normal. Lo más importante es su característica
birrefringencia verde manzanacuando se observa bajo
un microscopio con luz polarizada.
Depósitos de amiloide teñidos de rojo anaranjado. Bajo luz polarizada, estos
depósitos mostrarían birrefringencia verde manzana.

14. AZUL DE TOLUIDINA
•Tiempo:Es una tinción muy rápida,
generalmente toma solo unos minutos
(alrededor de 15 segundos a 1 minuto).
•Procedimiento:Se aplica una solución de azul
de toluidina sobre el tejido. Es una tinción de
metacromasia.
•Lo que tiñe:Estructuras ricas en grupos aniónicos
(ácidos), como el ADN, el ARN y ciertos gránulos
de mucopolisacáridos.
•Uso en la práctica médica:Es muy útil para
identificar mastocitosporque los gránulos de
heparina en su citoplasma son metacromáticos
(cambian el color del tinte). También se usa en
citología para teñir frotis y en neurohistología.
•Cómo se ve:Las estructuras que contienen
material metacromático, como los gránulos de
los mastocitos, se tiñen de rojo o púrpura intenso,
mientras que el resto del tejido se tiñe de azul.
Gránulos de mastocitos teñidos de
púrpura o rojo intenso (metacromasia)
sobre un fondo azul.

15. OTRAS TINCIONES ESPECIALES
RELEVANTES
Tricrómico de Masson:Tiñe
colágeno (azul o verde),
músculo (rojo) y núcleos (negro).
Se utiliza para evaluar fibrosis en
órganos como el hígado y el
riñón.
Azul de Perls (azul de Prusia):
Detecta hierrono hemo
(hemosiderina). Se usa para
diagnosticar la hemocromatosis
y para evaluar el hierro en la
médula ósea.
Tinción de elastina (Verhoeff-
van Gieson):Tiñe las fibras
elásticas de negroy el colágeno
de rojo. Es crucial para el
diagnóstico de enfermedades
vasculares y pulmonares que
afectan a las fibras elásticas.
Colágeno (fibrosis) teñido de
azul, mientras que el
citoplasma y el músculo se
tiñen de rojo.
Acumulaciones de hierro
(hemosiderina) teñidas de
azul brillante.
Fibras elásticas teñidas de negro,
rodeadas de colágeno teñido de
rojo y tejido muscular de amarillo.

16. INMUNOHISTOQUÍMICA
E
INMUNOFLUORESCENCIA

17. INMUNOHISTOQUÍMICA
(IHC)
•La inmunohistoquímica es un método bioquímico que
puede determinar la presencia y el nivel de ciertas proteínas
celulares. La inmunohistoquímicamide la expresión
proteicapor medio deanticuerposetiquetados o marcados
que se adhieren a las proteínas de interés. Elanticuerpose
puede mezclar con los componentes celulares de un tumor,
y después de cierto tiempo, la mezcla se enjuaga para aislar
a los anticuerpos que se unieron. La presencia de estos
anticuerpos se puede detectar fácilmente con un
microscopio, ya que su apariencia se distingue de otras
moléculas. Las muestras con más proteínas se unen con más
fuerza al anticuerpo, por lo que el cambio de color se
intensifica. Por ende, esta metodología logra determinar la
ausencia o presencia de laproteínaademás de
sucantidadrelativa. Los resultados de la prueba se basan el
número o la proporción de células teñidas.

18. INMUNOCITOQUÍMICOS
•La especificidad de la reacción entre el antígeno
y el anticuerpo es el fundamento de la
inmunocitoquímica. Los anticuerpos, también
denominados inmunoglobulinas, son
glucoproteínas producidas por células específicas
del sistema inmunitario como respuesta a una
proteína extraña o antígeno. En el laboratorio, los
anticuerpos pueden purificarse de la sangre y
conjugarse (asociarse) con un colorante
fluorescente. La fluoresceína, el colorante más
utilizado, absorbe la luz ultravioleta y emite luz
verde. Los anticuerpos conjugados con
fluoresceína pueden emplearse en cortes de
tejidos congelados o ligeramente fijados en un
portaobjetos de vidrio para localizar un antígeno
en células y tejidos. La reacción del anticuerpo
con el antígeno puede entonces observarse y
fotografiarse con un microscopio de
fluorescencia o un microscopio confocal que
produce una reconstrucción tridimensional de los
tejidos examinados

19. INMUNOFLUORESCENCIA
DIRECTA:
•Para localizar un antígeno diana en
células y tejidos, se utilizan métodos
inmunocitoquímicosdirectos e
indirectos.
•La técnica de inmunocitoquímica más
antigua utilizada para identificar la
distribución de un antígeno dentro de
las células y los tejidos se conoce como
inmunofluorescencia directa. Esta
técnica emplea un anticuerpo primario
marcado con fluorocromo (ya sea
policlonal o monoclonal) que reacciona
con el antígeno dentro de la muestra
(imagen). es ideal por la baja intensidad
de la emisión de la señal. Debido a la
sensibilidad subóptima, los métodos
indirectos están reemplazando cada
vez más a los métodos de
inmunofluorescencia directa.
El Penfigoide de membranas mucosas
(PMM) corresponde a un tipo de
enfermedad ampollosa autoinmune,
la que se caracteriza por presentar
una alteración en la adhesión de las
estructuras cutáneas.
Salazar, Rafael & Grau, Arturo. (2016). Penfigoide de
Membranas Mucosas Ocular: A Propósito de un Caso
Clínico.. ARS MEDICA Revista de Ciencias Médicas.
40. 10.11565/arsmed.v40i1.32.

20. INMUNOFLUORESCENCIA
INDIRECTA
•La inmunofluorescencia indirecta proporciona una
sensibilidad mucho mayor que los métodos directos
y a menudo recibe el nombre de “técnica del
emparedado” o “de la capa doble”. El método
indirecto implica dos procesos. Primero, los
anticuerpos primarios específicos reaccionan con el
antigeno de interés. En segundo lugar, los
anticuerpos secundarios, que están marcados con
fluorocromo, reaccionan con los anticuerpos
primarios. La visualización de estructuras marcadas
dentro del tejido es la misma en ambos métodos y
requiere el microscopio de fluorescencia.

21. BIBLIOGRAFÍA:
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https://www.nsh.org/resources/standard-operating-procedures
https://www.thermofisher.com/es/es/home/life-science/protein-biology/protein-
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Carson, F. L., & Hladik, C. (2009).Histotechnology: A Self-Instructional Text. American
Society for Clinical Pathology Press.
Conn, H. J. (1992).Biological stains: a handbook of the use of dyes in biology and
medicine. Williams & Wilkins.
Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., & Zeller, W. W. (2008).Histology Protocols.
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Lillie, R. D. (1976).H.J. Conn's biological stains: The classic handbook for the use of
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