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Virologia

1. Vías de Inoculación en Huevos
Embrionados
Facultad de Ciencias Veterinarias
Docente: Ana María Cuéllar G.
Virología e Inmunología Veterinaria SAP 102

2. Introducción:
Se han utilizado huevos fecundados para cultivar
virus durante más de15 años. El cultivo de virus
gripal en huevo embrionadofue empleado
porprimera vez por Burneten 1935, demostrando
que el embrión de pollo es un medio muy sensible
para el aislamiento de estos virus, siendo además
un medio estéril y poco costoso

3. Ha sido posible cultivar virus de diversos grupos en
varias cavidades del huevo fecundado, o en el propio
embrión en desarrollo. También se emplearon huevos
de pato y de ganso para cultivar ciertos virus, pues
estos animales tienen un periodo de incubación mas
prolongado que el pollo; pero como regla, sigue
usándose huevo de gallina de 6 a 8 días de
incubación aproximadamente (a veces se usa huevos
de mas tiempo de incubación).

4. •Los virus sólo pueden reproducirse en
determinadas partes del embrión; por
consiguiente, se deben inyectar en la región
apropiada, P. ej. los mixoviruscrecen bien en la
membrana corioalantoidea, en tanto que el virus
de la parotiditis prefiere la cavidad alantoidea.

5. •El método exacto de inoculación y la edad del
embrión que se emplea, dependen del virus
problema. P. ej. para aislar en forma primaria el
virus de la influenza a partir de material recogido
de la garganta, suele inocularse este en la cavidad
amniótica de embriones de 7 a 8 días; pero el
virus se duplica fácilmente en la membrana
alantoidea de embriones de 12 a 13 días, después
de varias resiembras (“adaptación”) en el amnios.

6. •Actualmente el método preferido para cultivar
virus de influenza aviar es la inoculación en
huevos embrionadoslibres de patógenos
específicos (SPF) o huevos negativos a
anticuerpos específicos (SAN).

7. Objetivo de la práctica:
Conocer y aplicar correctamente los
métodos adecuados para realizar
inoculaciones de virus en embriones de
pollos

8. Membrana Corioalantoidea:
Se emplean embriones de 10 –12 días y la
cantidad de inóculo es de 0.1 –0.5 ml. Apropiada
especialmente para el aislamiento y cultivo de
virus variólicos; virus de laringotraqueitisaviar y de
la enfermedad de Beyer(Pseudorrabia); que
provocan focos o pústulas fácilmente visibles.

9. Cavidad Alantoidea:
Se emplean embriones de 9 –12 días y la
cantidad de inoculo es de 0.1 –0.2 ml. Entre los
virus que desarrollan en el endodermo alantoideo
tenemos: peste, Newcastle, virus de la bronquitis
infecciosa, encefalitis equina occidental y oriental
Venezuela, parotiditis. Ventaja: simplicidad de la
inoculación y toma de muestra

10. Cavidad Amniótica:
Se emplean embriones de 7 –15 días y la
cantidad de inóculo es de 0.1 –0.2 ml. la edad de
los mismos depende fundamentalmente del tipo
de virus o del estudio que se realiza.

11. Saco Vitelino:
Se emplean embriones de 5 –8 días de
incubación y la cantidad de inóculo es de 0.2 –1
ml. Vía es sumamente adecuada para el
aislamiento y cultivo de los virus de enfermedades
venéreas, neumonía y rickettsias. El vitelo es
empleado para la preparación de vacunas y como
antígeno para reacciones serológicas

12. Vía Intravenosa:
La membrana corialantoideaestá irrigada por
vasos sanguíneos, es susceptible de inoculación
para casos especiales, virus que ocasionan
cambios hematológicos; por ejemplo, virus de la
Leucemia. Son empleados embriones de 10 -15
días y la cantidad de inóculo es de 0.02 -0.05 ml.

13. Vía Intracerebral(embrión):
Se emplea embriones de 8 –14 días,
específicamente para virus que producen
alteraciones cerebrales: la rabia, herpes, etc;
0.01 –0.02 ml.

14. Materiales:
Material Biológico:
Virus de New Castlecepa “La Sota” a virus vivo.
Huevos embrionadosde gallina de 9 a 11.
Material de Laboratorio:
Ovoscopio.
Tijera Quirúrgica.
Agua Destilada.
Azul de Metileno.
Agujas Hipodérmicas.
Placas Petri amplias.

15. Procedimiento:
Inoculación:
Observar en el ovoscopiosi el huevo es fértil o infértil.
Determinar la edad del embrión.
Localizar la cámara de aire y marcarla.
Marcar el embrión.
Colocar los huevos fértiles en un porta huevos

16. Limpiar la cáscara (con una torunda de alcohol yodado, sobre
todo, la parte donde se va a inocular y luego, limpiar con
alcohol).
Agujerear el cascarón con un taladro (dependiendo de donde
se vaya a inocular).
Inoculamos el virus.
Tapamos el agujero con parafina (o cera de vela).
Luego llevamos a estufa (controlar temperatura y humedad
adecuada)
Controlar, observar dos veces al día, para percatarse si están
vivos o muertos.

17. 1Saco aéreo 2 Cavid Anniótica
3Cáscara 4 Cavid alantoidea
5Albumina 6 Saco vitelino
7Membrana corioalantoidea