Inmunodifusión

1. Inmunodifusión Presentado por Jairo Suarez Isabel González Jeluy Jiménez

2. ¿Qué es la inmunodifusión? Es una técnica que se utiliza en el laboratorio para la identificación y cuantificación de cualquiera de las inmunoglobulinas . Su base se encuentra en la presencia de un precipitado visible , resultado de la combinación antígeno-anticuerpo en determinadas circunstancias.

3. Creada Jacques Oudin, ( Dreux 1908 - París 1985), “ Doctor en Medicina en 1946 escribió algunas notas y clásicos en el que se describen las soluciones de antígenos y anticuerpos de inmunodifusión en gel de agar ”   Recibió premio nobel en 1984 por las teorías en cuanto a la especificidad del desarrollo y control del sistema inmune y el descubrimiento del principio para la producción de anticuerpos monoclonales. En 1946, Oudin descubre la precipitación.

4. Modificada la teoría de Oudin dando lugar a la doble inmunodifusión. Örjan Ouchterlony, (Estocolmo 1914-2004) médico sueco Ouchterlony desarrollado en su tesis un nuevo método analítico para la inmunodifusión . Este método se llama a menudo el método de Ouchterlony y fue fundamental para el desarrollo de la inmunología durante décadas. El método se usa en todo el mundo.

5. utilidades diagnosticas  Este método fue utilizado de manera sistemática en inmunología clínica: Determinaciones de inmunoglobulina Determinaciones transferían. Proteína C reactiva. Proteína embrionaria (α- fetoproteína ) se asocia con ciertos tumores hepáticos.

6. Ig G Para tener en cuenta asociados con enfermedades hepáticas crónicas y mielomas . Ig G se asocian con malignidad e induce a una perdida de proteínas. se asocia a infecciones crónicas , enfermedades hepáticas y mielomas . Ig A Ig A Induce a una perdida de proteínas. Ig M Ig M Se asocia a hepatitis , mieloma , magroglobulinemia de waldenstrom’s . Deficiencia de anticuerpos .

7. Difusión simple monodimensional o también llamada inmunodifusion simple ( método de Oudin) En la mayoría de las técnicas de inmunodifusion se utiliza agarosa, la cual se prepara hirviendo lentamente los gránulos en el baño de agua. La mayoría de los tipos de agarosa se disuelven poco mas de 90ºC y gelifican a 45ºC. En el soporte de agarosa se coloca el antígeno y el anticuerpo (es necesario conocer uno de ellos para identificar el otro).

8. Ambos migran en todas las direcciones y cuando encuentran a su contrario presentan una banda de precipitación fácilmente observable Esta técnica constituye la base común de una gran variedad de técnicas que permite realizar desde un análisis cualitativo hasta una estimación cuantitativa de un antígeno.

9. Técnica que cuantifica de manera sencilla y económica inmunoglobulinas de isotipo G, M y A ó antígenos solubles (C3, C4, transferrina, proteína C reactiva) presentes en muestras biológicas. La técnica se basa en la difusión de la muestra conteniendo el antígeno a medir  (inmunoglobulinas ó antígenos solubles) en una matriz semisólida de agar en la que se encuentra disuelto el Ac específico. Inmunodifusión Radial

10. La muestra biológica se introduce en los orificios cilíndricos excavados en el agar y a medida que el antígeno difunde en forma radial, se alcanza la relación Ag-Ac que permite la formación precipitados visibles. Una vez finalizada la difusión se mide el radio (R) de los precipitados que es proporcional a la concentración de antígeno (C ).

11. La concentración de proteína en la muestra biológica ( Cx ) se calcula realizando una curva de calibración utilizando muestras patrones de concentración conocida La técnica se basa en la difusión de la muestra conteniendo el antígeno a medir  (inmunoglobulinas ó antígenos solubles) en una matriz semisólida de agar en la que se encuentra disuelto el Ac específico.

12. Difusión doble monodimensional o inmunodifusion doble tipo I ( método de Oakley Fulthorpe ) colocamos en la parte inferior del tubo un vol. de agar 1% fundido, mezclado con un vol. igual del antisuero. D ejamos solidificar y agregamos igual vol. de agar 0,5%, dejamos solidificar.

13. Por ultimo agregamos agar 1% donde se encuentra disuelto el Ag . Tanto el Ag. como el Ac. migrarán hacia la zona media de menor concentración, de manera que, otra vez, se formarán gradientes que harán que en determinado punto los reactivos estén en equivalencia y precipiten.

14. si la concentración de Ag. y Ac. están en relaciones óptimas (equivalentes) la banda se formará en un punto intermedio del tubo, mientras que si la cantidad de Ag. Esta en exceso necesitará recorrer una mayor distancia para alcanzar una dilución tal que se encuentre en equivalencia con el Ac. y así la banda se formará más cerca del fondo.

15.  Difusión doble bidimensional o inmunodifusion doble tipo II(método de Oüchterlony ) Constituye un método muy completo ya que permite obtener mas información que los anteriores. Consiste en colocar en una placa de Petri agar 1,5% al cual luego de solidificar se le realizan perforaciones en forma de pocillos a distancia conveniente y en dichas perforaciones se colocan pequeñas cantidades de Ag. y Ac.

16. En este caso los reactivos difunden en forma radial a partir del pocillo generando bandas de precipitación cuyas características dependerán de varios factores .

17. Mediante la técnica de Ouchterlony podemos determinar la existencia o no de determinantes comunes entre Ag. según las características de las bandas formadas. cuando las concentraciones colocadas en los pocillos estén cerca de la equivalencia la banda se formará a mitad de distancia entre ellos. Nos permite tener idea de los PM  de cada reactivo ya que al tratarse de una difusión radial, la concavidad de la banda estará hacia el lado del pocillo donde se halla colocado el reactivo de mayor PM,  y viceversa,  si ambos PM son semejantes la banda será recta.

18. la posibilidad de hacer varios pocillos en una placa permite obtener información sobre similitud de los Ag. reaccionantes . Las macromoléculas antigénicas tienen en su superficie zonas llamadas determinantes antigénicos y que son los sitios reconocidos por el Ac.

19. Para determinar la relación Ag/Ac (prueba CUALITATIVA), encontramos tres patrones básicos : 1. Identidad: Los dos Ag tienen los mismo epitopos reconocidos por el suero y se forma una banda de precipitación con forma de arco continuo.

20. 2. No Identidad : Los Ag son distintos y se forman bandas de precipitación independientes y no dan un arco continuo. Aparece una figura con forma de aspa.

21. 3. Identidad Parcial : L os dos Ag comparte un epitopo , pero uno de ellos tiene un epitopo extra que es reconocido por el suero y se forma un arco de precipitación al que le sale un espolón.

22. Mediante la técnica de Ouchterlony podemos determinar la existencia o no de determinantes comunes entre Ag. según las características de las bandas formadas.

23. bibliografía http://www.esacademic.com/dic.nsf/es_mediclopedia/40399/inmunodifusi%C3%B3n http://es.scribd.com/doc/7219379/Guia-de-Tecnicas Inmunologia diagnostico e interpretacion de pruebas de laboratorio http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/Inmunologia.htm Inmunologia una ciencia activa edicion 2 Manual depracticas de inmunologia , adriana garibay Escobar, edicion 2006