La coloration de gram

1. MrMrMrMr Boutouil Boutouil Boutouil Boutouil Salim Salim Salim Salim
Cours Cours Cours Cours dededede Bact Bact Bact Bact éééériologie riologie riologie riologie MMMMéééédicale dicale dicale dicale
Techniques Techniques Techniques Techniques dededede coloration coloration coloration coloration dededede Gram Gram Gram Gram
PrPrPrPr ééééparation paration paration paration dudududu FFFFrottis rottis rottis rottis
Le frottis pour la coloration de Gram est prépar é soit directement àpartir du
prélèvement du patient exemple un pus ou par application des micro-organismes à
partir d’une culture d’un milieu liquide ou solide. La préparation du frottis comprend
l'appli cation d'une certaine partie des germes sur une lame de verre propre. Il faut
émulsionn édans une goutte d'eau stérile ou une solution saline sur la lame. Un
applicateur en bois bâton stérile peut être utilis éou un l’anse de platine pour bien
étaler les bact éries sur la lame pour qu ’ils peuvent être facilement observer au
microscope. On sèche le frottis et le fixer par la chaleur soit directement par le bec
bezen ou en le pla çant sur une plaque plus chaud (60 °C) pendant au moins 10
minutes en évitant de faire brûler le frottis, ou en l'inondant de méthanol 95 %
pendant 1minute. Pour examiner les organismes cultiv ésen milieu liquide, un
échantillon aspir édu bouillon de culture est appliqu ésurune lame puis le mettre sur
une plaque chaud pour séchéeet fix éeavant la coloration. La préparation des frottis
varie en fonction du type d'échantillon en cours de traitement et sur les méthodes de
coloration utilis é.
Un frottis àpartir d'un écouvillon de pus Un frottis àpartir d'un milieu liquide

2. MrMrMrMr Boutouil Boutouil Boutouil Boutouil Salim Salim Salim Salim
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1. Couvrir la lame avec du cristal violet (violet) et laisser agir pendant 10
à30 secondes. Rincer lalame avec de l'eau du robinet, secouer tout exc ès.
2 Recouvrir la lame avec de l'iode pour augmenter l'affinit éde cristal
violet et lui permettre de rester sur la surface sans séchage deux fois tant
que le cristal violet (20 secondes d' iode pour 10 secondes de cristal
violet ,par exemple). Rincer àl'eau du robinet ,secouer tout exc ès.
3 Recouvrir la lame avec décolorant pendant 10 secondes et rincez
imm édiatement àl'eau du robinet. Répétez cette proc édure jusqu' àce que
la décoloration du colorant. Un Frottis plus épaisses nécessite une
décoloration plus prolong ée.Rincer avec de l'eau du robinet et secouer
l’exc édent.
4 Recouvrir la lame avec contre colorant la fushine de zhiel et laisser
sans séchage pendant 30 secondes. Rincer doucement avec de l'eau de
robinet, sécher avec des serviettes en papier ou du papier absorbant ou de
l'air sec. Pour frottis délicats, comme certains liquides organiques, séchage
àl'air est le meilleur proc édé.Examiner au microscope sous un objectif à
immersion à100 x.