Laboratorio no. 4 recuento bacteriano

1. RECUENTO BACTERIANO Dra. Natalia Izurieta Cergneux PRÁCTICA No. 4 – LABORATORIO DE BACTERIOLOGIA Y MICOLOGIA

2. GENERALIDADES Replicación bacteriana: fisión binaria o bipartición. De una célula madre se originan dos células hijas idénticas. Crecimiento ordenado de todos los constituyentes y estructuras celulares. Aumento exponencial en el número de células.

3. TIPOS DE CRECIMIENTO CRECIMIENTO INDIVIDUAL La bacteria alcanza un tamaño y peso fijo. Constituye el paso previo a la división celular. CRECIMIENTO POBLACIONAL Es el incremento en el número de células como consecuencia del crecimiento y división celular.

4. RECUENTO BACTERIANO

5. CONTEO DE CÉLULAS VIABLES La célula viable es aquella capaz de dividirse y formar una colonia en el medio de cultivo. Se basa en que cada colonia surge de una simple célula. Cada colonia contiene una sola especie bacteriana. ALIMENTO CAJA PETRI MICROSCOPIO

6. CONTEO DE CÉLULAS VIABLES El número de bacterias viables por muestra se expresa en: U NIDADES F ORMADORAS DE C OLONIAS (UFC) Representa cada colonia contada y su número total representa el número total de bacterias viables en la muestra.

7. CONTEO DE CÉLULAS VIABLES MÉTODO DE EXTENDIDO EN PLACA Es el método de elección para anaerobios facultativos y cultivo de microaerófilos.

8. CONTEO DE CÉLULAS VIABLES MÉTODO DE VERTIDO EN PLACA. Esta técnica se usa generalmente para bacterias aerobias obligatorias.

9. CONTEO DE CÉLULAS VIABLES Útil para la técnica de vertido en placa o extensión en placa. Se siembran volúmenes conocidos de cada dilución Luego se incuba a 35 – 37 C durante 24 – 48 horas.

10. TÉCNICAS DE RECUENTO Finalizado el tiempo de incubación, se realiza el recuento. Se toman en cuenta únicamente aquellas cajas Petri que tengan entre 30 y 300 colonias. Este número de colonias es estadísticamente representativo. Aquellas placas que tengan más de 300 colonias se reportan como “INCONTABLES”.

11. TÉCNICAS DE RECUENTO Para el recuento bacteriano se puede usar cuentacolonias .

12. RECUENTO CON CUENTACOLONIAS Puede ser contada toda la placa o por cuadrantes. Cuando la carga bacteriana es alta, se toma en cuenta un cuadrante con carga alta, un cuadrante con carga media y un cuadrante con carga baja. Se realiza la sumatoria de los tres cuadrantes y se saca el promedio. Finalmente el promedio se multiplica por 65 No. Colonias = (CA + CM + CB /3) * 65

13. CA = 32 CM = 19 CB = 10 Sumatoria Σ = 61 Promedio 61/3 = 20.33 Factor = 20.33*65 = 1322

14. OBTENCIÓN DE RESULTADOS Terminado el conteo por cualquier método, se debe aplicar la siguiente fórmula para obtener el No. de UFC/ ml o UFC/g. UFC/ml ó UFC/g = No. de colonias por placa X el factor de dilución * ml de la muestra sembrada *Factor de dilución: inversa de la dilución.

15. EJEMPLOS EJEMPLO 1 No. de colonias: 280 Dilución: 10 -3 Volumen de siembra: 1 ml UFC/ ml = 280 X 1000 /1 UFC/ ml= 280.000 EJEMPLO 2 No. de colonias: 56 Dilución: 10 -4 Volumen de siembra: 0.2 ml UFC/ ml = 56 X 10000 /0.2 UFC/ ml= 2 800.000

16. Cuando se realiza más de una dilución para cada uno de los parámetros se garantiza los resultados obtenidos. Este método disminuye el margen de error y abaliza la calidad de las pruebas. Para obtener los resultados por duplicado se aplica la siguiente fórmula: UFC / ml parámetro = UFC / ml dilución A + UFC / ml dilución B 2

17. EJEMPLOS Ejemplo 1 Dilución A: 5 600.0000 Dilución B: 6 000.000 Resultado : 5 600.000 + 6 000.000 / 2 = 5 800.000 UFC / ml FLORA TOTAL Ejemplo 2 Dilución A: 1 245.647 Dilución B: 2 340.500 Resultado: 1 245.647 + 2 340.500 / 2 = 1 793.074 UFC / ml FLORA COLIFORME