Les plasmides groupe 02

1. Thème : Les plasmides

2. Plan de travail: Introduction Définition des plasmides Les types des plasmides Autre propriétés Les plasmides comme vecteurs Comment on obtient les plasmides ? Mode d’insertion des plasmides La selection des bactéries transformé Application des plasmides Conclusion Référence

3. Introduction En 1952 JOSHUA LEDBERG découvert les plasmides lorsque leur études des salmonelle dans notre exposer en va voire les types ; des propriétés en plus les plasmides comme des vecteurs de clonage .

4. I -1 DEFINITION DES PLASMIDES : Les plasmides: sont des petites molécules circulaires d’ADN double brin qui existe indépendamment du chromosome , elles sont capables de se répliquer de manière autonome . Les plasmides ont relativement peu de gène généralement moins de 30 leur information génétique n’est pas nécessaire à l’hôte et les cellules(Prescott et al;2010). Les plasmides transmissibles de façon stable à la descendance(primerose et al;2004). les plasmides ne sont pas circulaire toujours . Par exemple, les plasmides de Streptomyces sp et Bor relia burgdorferi sont linéaires et sont protégés de l’attaque des nucléases par une association covalente avec une protéine (Str eptomyces) ou par la formation d’une structure en épingle à cheveux (Bourrelai)( primorce et al;2004).

5. Les types des plasmides 1- des plasmides de fertilité: Plasmide porteur des gènes de la conjugaison Bactérienne transforme sa cellule hôte ou cellule donneuse , ex plasmide F E coli. (Prescott et al ; 2010 ). c'est a dire qu’ont un rôle dans la formation d’un couple de cellules ( Michael Met John Martinko ;2007 ).

6. 2- plasmide de résistance : Des plasmides R qui portent des gènes codants une résistance aux antibiotiques sulfamides, streptomycine et à la spectinomycine et ç la tétracycline ex: R100 ( Michael Met John Martinko ;2007 )

7. 3 - les plasmide de virulence : les plasmide de virulence rendent les bactéries plus pathogènes . Exemple Ti: plasmides inducteur de tumeur trouvé chez la bactérie agrobacteium tumefaciens .(Prescott et al ;2010).

8. 4-plasmide métabolique : Qui porte des gènes cordant pour des enzymes qui dégradent des substances telles que composée aromatique ,glucides… (Prescott et al 2010 ). 5- plasmide col : col contiennent des gènes de synthèse de bactériocines connues sous le nom de colicine . Les bactériocines son des protéines bactériennes qui détruisent d’autres bactéries (Prescott et al;2010) .

9. II- autre propriétés : F Les plasmides sont des ADN CCC (Covalent Ly Cl osed Circles ), mais si un des deux brins est ouvert, ils sont des ADN OC (Open Circle ). ( Primorse et al 2004). Forme I : forme relachéeOC Open Circle orme II : Forme normale surenrouléeCCC Covalent Close Circle Fig1: les formes des plasmides. www.sante.univ-nantes.fr/ med / ticem /.../1444.pdf

10. L’incompatibilité des plasmide: Certains plasmides ne cohabitent pas durablement dans la même bactérie (F’gal et F’lac), culture en milieux non sélectifs . Elimination de l’un des plasmides => compétition (www.sante.univ-nantes.fr/med/ticem/.../1444.pdf)

11. III –Les plasmides comme vecteurs: - un vecteur faut contiens : origine de réplication Un marqueurs permette la sélection Une région permette d’inséré fragment d’ADN exogènes. Fig2 :vecteur plasmidiques (Lodish et al,2005)

12. III-1 comment on obtient les plasmides? La plus utiliser => lyse alcaline Lyse : altération des enveloppes bactériennes Alcaline : dénaturation ADN après => La neutralisation : L'ADN chromosomique étant très long n'arrive pas à se rapparier L'ADN plasmidique plus court arrive à se reformer à l‘état initiale Ultracentrifugation à l’équilibre de densité: CsCl + bromure d’ethidium ( http ://bioinfo2010.wordpress.com /). Fig3: lextraction des plasmides apartire gradien de CsCl (Prescott et al;2010) .

13. III 2-Mode d’insertion des plasmides : 1- préparation du plasmide et l’insert par la coupure de même enzyme de restriction. Fig4: préparation l’insert et plasmide . ftp.a.moi.chez-alice.fr/Ecole/.../Outils1.pdf

14. 2- utilisation de phosphatase alcaline : Pour éviter la recirculation Fig5 réparation par phosphatase alcaline. ftp.a.moi.chez-alice.fr/Ecole/.../Outils1.pdf

15. 3 – L’insertion du l’insert dans plasmide Fig6: mode d’insertion des plasmides http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Recombinant_DNA.JPG

16. III-3 Commet les plasmides introduit ou cellule bactérienne? Les plasmides peut inséré a laide d’une choc thermique ou électrique Fig7: l’utilisation de choc électrique pour l’introduction les vecteur plasmidique. mon.ftp.a.moi.chez-alice.fr/Ecole/.../Outils1.pdf

17. III-4 la sélection des bactéries transformés: Le taux de transformation des bactéries est généralement très faible. Si on utilise un gène de résistance dans plasmide on obtient une sélection séparer les bactéries comportant des plasmides et les bactéries sans plasmides car ces dernières sont tuées. cette méthode permet pas de distinguer les bactéries avec plasmides intacts des bactéries avec plasmides recombinants. On utilise pour cela une résistance à un second antibiotique , ou plasmide a un gène code (LacZ) pour un protéine β galactosidase.

18. - L’utilisation de changement de phénotype Fig8: la double sélection mon.ftp.a.moi.chez-alice.fr/Ecole/.../Outils1.pdf

19. Autre exemple: plasmide contient gène de Lac z

20. VI-Application des plasmides: En agriculture. En médicine: -Production des hormones e t des protéines : -insuline → traitement de diabète. -Interférons α β, δ agent antiviraux , anti-tumoraux et anti-inflammatoires. -Streptokinase → anticoagulant (Prescott et la ; 2010).

21. CONCLUSION Les plasmides sont utilisées par les bactéries comme moyen d’adaptation mais i l y a un grand développement d’utilisation des plasmides permettre de développer plusieurs sciences et défend plusieurs maladies.

22. Référence : _MICHAEL T.MADIGANT et JOHN M. MARTTNKO 2007 Brock Biologie des micro – organismes 11 e Ed PEARSON France , 1047P. _PRESCOTT , HARLEY , KLEIN , WILLEY , SHERWOOD et WOOLVERTON 2010 Microbiologie 3eEd De Boeck Paris . 1088 P. _S. PRIMROSE , TWYMAN et R. OLD 2004 GENIE GèNETIQUE 6eEd De Boeck Pris . 400 P . _ WILLIAM , S.KLUG , MICHAEL , R. CUMMINGS et CHARLOTTE , A. SPENCER , 2006 Genetique 8eEd PEARSON Paris .704 P http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Recombinant_DNA.JPG .ftp.a.moi.chez-alice.fr/Ecole /.../Outils1.pdf www.sante.univ-nantes.fr/med/ticem/.../1444.pdf