Linea celular COS

Origen de la linea celular COS y su relación con el vector SV 40

1. LINEA CELULAR: COS1/COS7 . C himpanzee O rigin S con genes de sv-40 (Simian Virus 40 ) COS, abreviación para CV-1 The COS-7 Linea celular obtenida del riñon del mono verde africano (1980),   Cercopithecus aethiops .

2. LINEA CELULAR: COS1 CV-1 se comportan como los fibroblastos , y se obtuvieron originalmente en 1960 por inmortalizar  CV-1  células del riñón del mono verde africano usando un   virus (SV40) que produce el antígeno T grande, este gen pero no se replica correctamente . La línea COS-7, desarrollada en 1980 a partir de la línea de CV-1 a través de la transformación con un virus de simio (SV40 ), un virus que codifica el antígeno T tipo salvaje . Abreviaci ó n de CV-1 en Origin con genes SV40.

3. SV 40 ( SimianVirus 40) Se cree que el SV40 suprime las propiedades transcripcionales de los genes supresores de tumores a trav é s del antigeno T grande . El antigeno T grande est á involucrado en los procesos neopl á sicos y ejerce su efecto mediante la desregulaci ó n del supresor del crecimiento tumoral p53. El gen p53 mutado contribuye a la proliferaci ó n celular incontrolada .

4. Supresor tumoral p53   Es una proteína codificada por genes homólogos   en diversos organismos, tales como  TP53  (seres humanos) y  Trp53  (ratones ). p53 es responsable de iniciar la apoptosis o la detención del ciclo celular cuando una célula es dañada. Un gen mutado p53 puede contribuir a la proliferación celular descontrolada, lo que deriva en un  tumor .   Como tal, p53 ha sido descrito como " el guardián del  genoma“ debido a su papel en la conservación de la estabilidad mediante la prevención de las mutaciones del genoma.    P or lo tanto  TP53  se clasifica como un gen supresor de tumores.  

5. Aplicaciones Las c é lulas COS son ampliamente utilizadas para la producci ó n de prote í nas recombinantes , tales como : * Glicoprote í na B de HSV-1. *Cadena B de resina . * Fosfatasa alcalina placentaria . * Trombomobulina *CD7 *Factor de Willebrand . *B- Glucuronidasa humana . * Dihidropterina reductasa humana . * Interleucina 5. * Interfer ó n B1.

6. Transferencia de mioblastos usada para tratar la Distrofia Muscular de Duchenne. ¿Qué es la Distrofia muscular de Duchenne (DMD)? Es una miopatía de origen genético  con un patrón de herencia de tipo recesivo  ligado al cromosoma X, esta enfermedad produce destrucción de las células del musculo estriado. S e produce por mutaciones en la distrofina , proteína encargada de conectar los filamentos de actina con la matriz extracelular. Al producirse la mutación, la célula muscular degenera, porque ya no hay contacto entre la matriz y la lámina basal de la célula. En consecuencia van desapareciendo fibras musculares y apareciendo tejido adiposo.

7. Transferencia de mioblastos usada para tratar la Distrofia Muscular de Duchenne (DMD). ¿Qué son los mioblastos? Son “stem cells” de el musculo esquelético. Los mioblastos se fusionan para formar fibras musculares multinucleadas. Los mioblastos que no se fusionan son llamados células satélites que toman parte en la regeneración celular.

8. Dos ADNc biblioteca ( A y B ) fueron construidos en los cuales la reversotranscriptasa fue directamente a comenzar la síntesis de las primeras cadenas de ADN en dos puntos del ARN mensajero de la distrofina. Estos puntos se especificaron por suplantar dos primers que hibridaban por la mitad (biblioteca A) o con el extremo 3' (biblioteca B) del ARN mensajero.  Estos clones fueron solapados en 18 Kb. y se ligaron a una porción de un sitio de restricción para dar un ADNc completo. ¿Cómo se prepara el ADNc completo de la distrofina?

9. El ADNc completo se clonó en un vector SV40 y se transfectó por electroporación en células COS. Usando anticuerpos para la distrofina demostraron que se producía una molécula correcta de distrofina en las células COS , y estudios inmunofluorescentes demostraron que se localizaba en la membrana celular * La  transfección  consiste en la introducción de material genético externo en células eucariotas mediante plásmidos,  vectores víricos . ¿Cómo se ocuparían las células COS en terapia génica?

10. TE AMO