Lowry

metodo de lowry

1. Lowry-1 (Farmacia) 

VALORACION DE PROTEÍNAS POR EL MÉTODO DE LOWRY  
 
1.- FUNDAMENTO TEÓRICO  
 
  El  método  de  Lowry  (1951)  es  un  método  colorimétrico  de  valoración  cuantitativa  de  las 
proteínas.  A  la  muestra  se  añade  un  reactivo  que  forma  un  complejo  coloreado  con  las  proteínas, 
siendo  la  intensidad  de  color  proporcional  a  la  concentración  de  proteínas,  según  la  ley  de 
Lambert-Beer A= 
e.l.c 
  Este método consta de dos etapas: 
   1)  Los  iones  Cu
2+
,  en  medio  alcalino,  se  unen  a  las  proteínas  formando  complejos  con  los 
átomos  de  nitrógeno  de  los  enlaces  peptídicos.  Estos  complejos  Cu
2+
-proteína  tienen  un  color  azul 
claro.  Además,  provocan  el  desdoblamiento  de  la  estructura  tridimensional  de  la  proteína, 
exponiéndose los residuos fenólicos de tirosina que van a participar en la segunda etapa de la reacción. 
El Cu
2+
 se mantiene en solución alcalina en forma de su complejo con tartrato. 
  2)  La  reducción,  también  en  medio  básico,  del  reactivo  de  Folin-Ciocalteau,  por  los  grupos 
fenólicos de los residuos de tirosina, presentes en la mayoría de las proteínas, actuando el cobre como 
catalizador. El principal constituyente del reactivo de Folin-Ciocalteau es el ácido fosfomolibdotúngstico, 
de color amarillo, que al ser reducido por los grupos fenolicos da lugar a un complejo de color azul 
intenso. 
   
                   Reacción entre la proteína y los reactivos 
 
BIBLIOGRAFÍA 
O.H. Lowry, N.J. Rosebrough, A.L. Farr y R.J. Randall. J. Biol. Chem. 193: 265-275 (1951) 
  

2. Lowry-2 (Farmacia) 

2.- MATERIALES Y REACTIVOS 
Materiales 
.- Tubos de ensayo 
-.- Tubos Falcon (50 mL) 
.- Pipetas 
.- Colorímetro 
.- Cubetas de colorímetro 
.- Agitadores de tubos 
Reactivos 
- Reactivo A:   Na2CO3 al 2%, NaOH 0,1 M 
- Reactivo B
1:  CuSO4 × 5H2O al 1% 
- Reactivo B
2:  tartrato sódico-potásico al 2% 
- Reactivo C: Se prepara, mezclando los reactivos: A, B
1 y B2, en  proporciones 50:0,5:0,5 (en volumen) 
- Reactivo Folin-Ciocalteau: reactivo comercial diluido a 1/4 
- Solución patrón de albúmina de suero bovino (BSA) (2 mg/mL) 
- Muestra problema 
 
3.- PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL 
  Para determinar la concentración de proteínas de la muestra problema se construye una curva 
patrón o de calibrado a partir de una solución patrón (BSA) (2 mg/mL). La concentración que tienen 
las muestras problema se determina por interpolación de los valores de absorbancia en la curva patrón. 
El  tubo  0,  que  sólo  contiene  agua  destilada  y  los  reactivos,  sirve  de blanco  para  el  ajuste  del 
colorímetro a cero de absorbancia. 
  Pasos a seguir: 
a) Numerar del 0 al 6, tubos de plástico de 10 mL 
b) Pipetear las cantidades de agua, solución patrón de albúmina y solución problema señaladas en la 
tabla. 
c) Preparar el reactivo C, a partir de A, B
1 y B2 
d) Pipetear a todos los tubos el reactivo C. Mezclar el contenido de cada tubo y dejarlo reposar 15 
minutos en oscuridad (dentro de la taquilla). 
e)  A  continuación  añadir  a  todos  los  tubos  el  reactivo  de  Folin  (diluido  1/4),  mezclando  bien  por 
agitación. Dejar reposar 30 minutos en la oscuridad para que así se desarrolle completamente la 
reacción coloreada. 
 f)  Leer  las  absorbancias  en  el  colorímetro  a  580  nm.  Previamente  el  aparato  se  ajusta  a 
Absorbancia=0  con  el  blanco  (tubo  nº  0);  de  esa  forma  sólo  se  mide  el  color  producido  por  las 
proteínas, puesto que se resta el color debido a los  reactivos. Anotar la medida de absorbancia en la 
tabla. 
 
Tubo  Agua    Patrón 
(2 
mg/mL) 
problema  Reactivo C  Folin diluido  Abs.580nm  [proteínas]     
mg/mL 
0  1,0 mL  --  --  5 mL  0,5 mL     
1  0,9 mL  0,1 mL  --  5 mL  0,5 mL     
2  0,8 mL  0,2 mL  --  5 mL  0,5 mL     
3  0,7 mL  0,3 mL  --  5 mL  0,5 mL     
4  0,6 mL  0,4 mL  --  5 mL  0,5 mL     
5  0,7 mL  --  0,3 mL  5 mL  0,5 mL     
6  0,5 mL  --  0,5 mL  5 mL  0,5 mL     

3. Lowry-3 (Farmacia) 

 
4.- TRATAMIENTO Y DISCUSIÓN DE LOS RESULTADOS  
 
4.1.- Determinar la concentración de proteínas de la curva patrón (tubos 1 a 4), expresada en mg/mL, 
y anotar el resultado en la tabla. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
4.2.- Curva patrón: Representar, en papel milimetrado, la absorbancia frente a la concentración de 
proteínas de los tubos 1 a 4. 
 
 
4.3.- Determinar la concentración de proteínas de los tubos 5 y 6, expresada en mg/mL. 
 
 
 
 
 
4.4.- Determinar la concentración de proteínas en la muestra problema, expresada en mg/mL. 
 
 
 
 
 
 
5.- CUESTIONES 
 
5.1.-  ¿Cómo  debería  ser  la  concentración  de  proteínas  de  los  tubos  5  y  6?.  ¿Igual  o  diferente? 
Comentarlo. 
 
 
 
 
 
5.2.-  La  relación  entre  absorbancias  y  concentración  de  proteínas  ¿se  mantiene  lineal  aunque  se 
incremente mucho la concentración? Haga un comentario al respecto. 
 
 
 
 
 
5.3.- Observaciones a la práctica.