Luận văn y học Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật PCR trong chẩn đoán viêm âm đạo.docx

Luận văn y học Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật PCR trong chẩn đoán viêm âm đạo, cổ tử cung do Chlamydia trachomatis tại Bệnh viện Đại học Y Thái Bình.Hiện nay, một trong các vấn đề nóng bỏng về chăm sóc sức khỏe sinh sản mà các nước trên thế giới đang đối mặt là bệnh lây truyền qua đường tình dục. Viêm đường sinh dục do Chlamydia trachomatis được coi là bệnh lây truyền qua đường tình dục đứng đầu trên thế giới. Nhiễm Chlamydia trachomatis thường gây viêm niệu đạo, viêm cổ tử cung. Tuy nhiên nếu không điều tri ̣có thể dâñ đến các biến chƣ́ ng như viêm phần phụ, đau vùng chậu mãn tính, thai ngoài tử cung, vô sinh do tổn thương ống dẫn trứng, viêm mào tinh đòi hỏi phải chăm sóc y tế với phí tổn cao. https://luanvanyhoc.com/nghien-cuu-ung-dung-ky-thuat-pcr-trong-chan-doan-viem-am-dao-co-tu-cung-do-chlamydia-trachomatis/

1. LUANVANYHOC.COM TẢI TÀI LIỆU Y HỌC, TÌM TÀI LIỆU Y HỌC TRONG
NƯỚC VÀ QUỐC TẾ THEO YÊU CẦU LIÊN HỆ ZALO [phone]
Luận văn y học Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật PCR trong chẩn đoán viêm âm
đạo, cổ tử cung do Chlamydia trachomatis tại Bệnh viện Đại học Y Thái
Bình.Hiện nay, một trong các vấn đề nóng bỏng về chăm sóc sức khỏe sinh sản mà
các nước trên thế giới đang đối mặt là bệnh lây truyền qua đường tình dục. Viêm
đường sinh dục do Chlamydia trachomatis được coi là bệnh lây truyền qua đường tình
dục đứng đầu trên thế giới. Nhiễm Chlamydia trachomatis thường gây viêm niệu đạo,
viêm cổ tử cung. Tuy nhiên n
ếu không điều tri ̣có thể dâñ đến các biến ch ng nhưƣ́
viêm phần phụ, đau vùng chậu mãn tính, thai ngoài tử cung, vô sinh do tổn thương
ống dẫn trứng, viêm mào tinh đòi hỏi phải chăm sóc y tế với phí tổn cao.
MÃ TÀI LIỆU CAOHOC.2021.00229
Giá :
Liên Hệ 0927.007.596
Tổ chức Y tế thế giới ước tính hàng năm có khoảng 90 triệu ca nhiễm Chlamydia
trachomatis được phát hiện mới [34]. Bệnh do Chlamydia trachomatis hay gặp ở
những người trẻ tuổi, trong độ tuổi sinh đẻ.
Các nghiên cứu mới đây cho thấy, tỷ lệ mắc bệnh này đang tăng lên. Tại Châu Âu từ
năm 1996-2003, số bệnh nhân nhiễm Chlamydia trachomatis đã tăng gấp đôi, tại Hoa
Kỳ con số này cũng tăng 14% trong giai đoạn 2000-2005 [15, 18]. Ở Việt Nam trong
khoảng vài năm gần đây vấn đề nhiễm khuẩn do Chlamydia trachomatis mới được
chú ý. Một vài nghiên cứu đưa ra tỷ lệ khoảng 30% các trường
hợp đến khám phụ khoa có tiết dịch đường âm đạo bất thường là do Chlamydia
trachomatis. Nguy hi
ểm nhất của nhiễm Chlamydia trachomatis qua đường sinh dục là
có tới 75% nữ giới và 50% nam giới mắc bệnh mà không có triệu chứng, người
bệnhhoàn toàn không biết mình nhiễm vi khuẩn [2,9].
Đ
ể chẩn đoán nhiễm Chlamydia trachomatis người ta thường dùng xét nghiệm nuôi
cấy- tiêu chuẩn vàng đ
ể chẩn đoán xác định nhiễm Chlamydia trachomatis. Tuy nhiên
xét nghiệm này có hạn chế là phải bảo đảm vi khuẩn còn sống trong quá trình vận
chuy
ển đến phòng xét nghiệm, thời gian xét nghiệm dài.
Khuếch đại acid nucleic (nucleic acid amplification tests – NAATs) là kỹ thuật sinh
học phân tử đã được ứng dụng rộng rãi trong y học đ
ể phát hiện sự tồn tại của các vi
sinh vật trong các mẫu bệnh phẩm. Phản ứng chuỗi trùng hợp (Polymerase Chain
Reaction– PCR) là một NAATs có độ nhạy và độ đặc hiệu rất cao, nhiều nghiên cứu
đã xem PCR là một tiêu chuẩn vàng đ
ể khảo sát giá trị của các xét nghiệm chẩn đoán2
khác. Đối với bệnh nhiễm Chlamydia trachomatis, xét nghiệm này cho phép xác định

2. LUANVANYHOC.COM TẢI TÀI LIỆU Y HỌC, TÌM TÀI LIỆU Y HỌC TRONG
NƯỚC VÀ QUỐC TẾ THEO YÊU CẦU LIÊN HỆ ZALO [phone]
sự tồn tại của vi khuẩn trong dịch âm đạo, tử cung của bệnh nhân. Với mong muốn
đóng góp vào công tác chăm sóc sức khỏe nói chung và công tác chăm sóc sức khỏe
sinh sản nói riêng, chúng tôi thực hiện đề tài “Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật PCR
trong chẩn đoán viêm âm đạo, cổ tử cung do Chlamydia trachomatis tại Bệnh
viện Đại học Y Thái Bình ” với mục tiêu:
– Chuẩn hóa được quy trình kỹ thuật thực hiện phản ứng PCR phát hiện vi khuẩn
Chlamydia trachomatis.
– Xác đin
̣ h được tỷ lê ̣nhiêm̃ Chlamydia trachomatis ở bệnh nhân viêm âm đạo, cổ tử
cung
MỤC LỤC
MỞ
ĐẦU……………………………………………………………………………………
…………………….1
CHƯƠNG 1: TỔNG
QUAN……………………………………………………………………………..3
1.1. Vi khuẩn Chlamydia
trachomatis………………………………………………………………..3
1.2. Các xét nghiệm chẩn đoán vi khuẩn Chlamydia trachomatis
………………………….6
1.2.1. Nuôi cấy
…………………………………………………………………………………………
…..6
1.2.2. Kỹ thuật miễn dịch gắn enzyme (enzyme immunoassays – EIAs)
……………..7
1.2.3. Kỹ thuật kháng th
ể huỳnh quang trực tiếp (direct fluorescent antibody –
DFA)..8
1.2.4. Kỹ thuật khuếch đại acid nucleic (nucleic acid amplification tests – NAATs)….
8
1.3. Các nghiên cứu về Chlamydia trachomatis trên thế giới và trong
nước………….10
1.3.1. Các nghiên cứu trên thế giới
………………………………………………………………..10
1.3.2. Các nghiên cứu trong nước
………………………………………………………………….18
CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
…………………..23
2.1. Đ
ỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU
…………………………………………………………………..23
2.1.1. Đối tươn
̣ g nghiên c u ƣ́
…………………………………………………………………………23

3. LUANVANYHOC.COM TẢI TÀI LIỆU Y HỌC, TÌM TÀI LIỆU Y HỌC TRONG
NƯỚC VÀ QUỐC TẾ THEO YÊU CẦU LIÊN HỆ ZALO [phone]
2.1.2. Thời gian nghiên cứu.
…………………………………………………………………………23
2.1.3. Địa đi
ểm nghiên
cứu…………………………………………………………………………..23
2.2. PHƯƠNG PH
Á P NGHIÊN C U Ƣ́
……………………………………………………………..23
2.2.1. Phương pháp chọn mẫu và cỡ mâ
ũ
……………………………………………………….23
2.2.2. Kỹ thuật xét nghiệm
……………………………………………………………………………24
2.2.2.1. Phương pháp lấy
mẫu…………………………………………………………………….24
2.2.2.2. Xử lý
mẫu…………………………………………………………………………………….2
4
2.2.2.3. Tách chiết ADN
……………………………………………………………………………25
2.2.2.4. Tối ưu hóa phản ứng
PCR………………………………………………………………25
2.2.2.5. Xác định độ nhạy của phản ứng PCR
………………………………………………29
2.2.2.6. Đánh giá độ đặc hiệu của phản ứng
…………………………………………………30
2.2.2.7. Xác đin
̣ h tỷ lê ̣nhiêm̃ Chlamydia trachomatis ở bệnh nhân viêm âm đạo ,
c
ổ t cung đến khám tại bệnh viện Đại học Y Thái Bình t ừ tháng 4 đến tháng 10ƣ̉
năm 2011
…………………………………………………………………………………………
………31
2.2.2.8. Điên
̣ di, phân tích kết quả
………………………………………………………………31
2.2.3. X l
ý số liêụ ƣ̉
………………………………………………………………………………………
3255
CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BÀN
LUẬN………………………………………………………..33
3.1. T
ối ưu hóa phản ng PCR phát hiêṇ Chlamydia ƣ́
trachomatis………………………..33
3.1.1. Nồng độ MgCl2
………………………………………………………………………………….33
3.1.2. Nồng độ mồi
……………………………………………………………………………………..35

4. LUANVANYHOC.COM TẢI TÀI LIỆU Y HỌC, TÌM TÀI LIỆU Y HỌC TRONG
NƯỚC VÀ QUỐC TẾ THEO YÊU CẦU LIÊN HỆ ZALO [phone]
3.1.3. Thời gian và nhiệt độ gắn mồi
……………………………………………………………..37
3.1.4. Số chu
kỳ………………………………………………………………………………………
…..40
3.2. Độ nhạy của kỹ thuật
PCR………………………………………………………………………..43
3.3. Độ đặc hiệu của kỹ thuật
PCR…………………………………………………………………..44
3.4. Kết quả xét nghiệm bằng kỹ thuật PCR
……………………………………………………..44
KẾT LUẬN
…………………………………………………………………………………………
…………49
TÀI LIỆU THAM
KHẢO……………………………………………………………………………….505
6
DANH MỤC BẢNG BIỂU, HÌNH VẼ
Hình 1.1. Cấu trúc hệ gen của vi khuẩn Chlamydia trachomatis………………………
3
Hình 1.2. Chu kỳ vòng đời của vi khuẩn
C.trachomatis………………………………..4
Hình 1.3. Tỷ lệ nhiễm C.trachomatis ở một số nước Châu Âu……………………10
Hình 3.1. Ảnh điện di kết quả tối ưu nồng độ MgCl2 với cặp mồi KL1/KL2…….34
Hình 3.2. Ảnh điện di kết quả tối ưu nồng độ MgCl2 với cặp mồi KL5/KL6…….35
Hình 3.3. Ảnh điện di kết quả tối ưu nồng độ mồi KL5/KL6……………………..36
Hình 3.4. Ảnh điện di kết quả tối ưu nồng độ mồi KL1/KL2……………………..36
Hình 3.5. Ảnh diện di kết quả tối ưu nhiệt độ gắn mồi KL1/KL2…………………38
Hình 3.6. Ảnh diện di kết quả tối ưu nhiệt độ gắn mồi KL5/KL6………………..38
Hình 3.7. Ảnh diện di kết quả tối ưu thời gian gắn mồi KL5/KL6……………….39
Hình 3.8. Ảnh diện di kết quả tối ưu thời gian gắn mồi KL1/KL2…………….….40
Hình 3.9. Ảnh diện di kết quả tối ưu chu kỳ phản ứng……………………………40
Hình 3.10. Ảnh diện di độ nhạy phản ứng PCR hai lần trên vi khuẩn C.
trachomatis……43
Hình 3.11. Kết quả xét nghiệm trên mẫu bệnh phẩm…………………………..…45
Bảng 3.1. Thành phần phản ứng PCR lần thứ nhất……………………………..…41
Bảng 3.2. Chu trình nhiệt của phản ứng PCR lần thứ nhất…………………….….42
Bảng 3.3. Thành phần phản ứng PCR lần 2…………………………………….…42
Bảng 3.4. Chu trình nhiệt của phản ứng PCR lần 2……………………………….43
Bảng 3.5. Kết quả xét nghiệm C.trachomatis…………………………………….45

5. LUANVANYHOC.COM TẢI TÀI LIỆU Y HỌC, TÌM TÀI LIỆU Y HỌC TRONG
NƯỚC VÀ QUỐC TẾ THEO YÊU CẦU LIÊN HỆ ZALO [phone]
Bảng 3.6. Tỷ lệ nhiễm C.trachomatis theo độ tuổi………………………………..46
Bảng 3.7. Tỷ lệ nhiễm C.trachomatis theo khu vực……………………………