Polimorfismo

Polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción (RFLP)

1. Polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción (RFLP) y polimorfismos MARTIN SOTO HUMBERTO LAU UNIVERSIDAD CUAUHTEMOC MEDICINA 2 º SEMESTRE BIOLOGIA MOLECULAR

2. HISTORIA En 1985, Sir Alec Jeffreys descubrió los “polimorfismos de longitud de fragmentos de restricción (RFLP) por sus siglas del inglés  Restriction Fragment Length Polymorphism )

3. Que son los RFLPS El ADN de distintos individuos rara vez tienen la misma disposicion de sitios de restriccion y de distancias entre estos sitios. Por lo tanto se dice que la poblacion es polimorfa (con muchas formas) con respecto a los sitios de restriccion Estas diferencias se conocen con la denominacion : Polimorfismo de longitud de fragmento por enzimas de restriccion (RFLPS) Los RFLPS se refieren a secuencias específicas de nucleótidos en el ADN que son reconocidas y cortadas por las enzimas de restricción

4. Que es una enzima de restriccion o endonucleasa Es aquella que puede reconocer una secuencia característica de nucleótidos dentro de una molécula de ADN y cortar el ADN en ese punto en concreto, llamado sitio o diana de restricción. Los sitios de restricción cuentan con entre 4 y 12 pares de bases, con las que son reconocidos.

5. Polimorfismo

6. Historia la palabra polimorfismo viene del griego y significa con muchas formas, gracias a Landsteiner se inició la comprensión del polimorfismo de las proteínas que sería luego trascrito al polimorfismo genético. La última definición de Cavalli-Sforza y Bodmer (1971) es la que se usa actualmente: «El polimorfismo genético es la presencia en la misma población de dos o más alelos en un locus, con una frecuencia apreciable», donde la frecuencia mínima generalmente es el 1%

7. se reveló la existencia de aproximadamente 10 millones de polimorfismos de nucleótido sencillo La mayoría de los polimorfismos no tiene efecto sobre el fenotipo cuando están en regiones no codificantes pueden afectar nuestro fenotipo como la estatura, el color del cabello o el color de los ojos etc.. y algunos están son responsables de enfermedades congénitas

8. POLIMORFISMOS DE NUCLEÓTIDO SENCILLO (SNP) La gran mayoría de los SNP’s tienen dos alelos los cuales están representados por una sustitución de base por otra. este tipo de alelos se clasifican en alelo principal o “silvestre” y alelo raro o mutante.

9. Actualmente, en el “ dbSNP ” (base publica de datos de PNS, dbSNP’s por sus siglas en ingles) se han catalogado más de 9 millones de variantes en la secuencia de ADN.7,8 Se describe que los SNP’s se presentan uno cada 200 pares de bases en el genoma humano.

10. Los SNP’s pueden estar presentes en regiones codificantes y provocar un cambio en un aminoácido; a este tipo de SNP’s les conoce como “no sinónimos”. y afectan directamente la función de la proteína.

11. Pueden estar localizados en la región promotora del gen. Influenciando la actividad transcripcional del gen (modulando la unión de factores de transcripción) En intrones (modulando la estabilidad de la proteína) En sitios de “ splicing ” (sitios donde ocurre la eliminación de intrones y unión de exones) En regiones intragénicas.

12. Según su localización en el genoma, los SNP’s se clasifican en: iSNP : si están localizados en regiones intrónicas . cSNP : en regiones codificantes (exones). rSNP : en regiones reguladoras. gSNP : localizados en regiones intergenómicas .

13. POLIMORFISMOS DE SECUENCIAS REPETIDAS tiene una mayor aplicación en el diagnóstico genético y son conocidos como : VNTR- minisatélites VNTR-microsatélites o STR (del inglés, short tandem repeats). En ambos casos se van a presentan un número variable de repeticiones en tándem

14. Los microsatélites : son loci que corresponden a secuencias de ADN de unas pocas decenas de nucleótidos repetidas en tándem y su repetición varia de cromosoma a cromosoma . una singularidad de este, está en que cada loci puede presentar muchos alelos distintos

15. No van a estar distribuidos por todo el genoma y solo pueden ser utilizados en el diagnostico de un numero muy reducido de enfermedades . Están distribuidos de forma casi homogénea por todo el genoma. Presentan un número elevado de alelos y con frecuencias similares entre sí.

16. Los VNTR-microsatélites : son por excelencia los polimorfismos anónimos utilizados en el diagn ó stico genético. Corresponden a la repetición en tándem de secuencias de entre 2 y 5 nucleótidos.

17. SECUENCIAS REPETIDAS EN TANDEM

18. Utilidad El estudio de los polimorfismos tiene muchas aplicaciones en medicina, investigaciones biológicas y procesos jurídicos. como marcadores de ciertas enfermedades.

19. pueden utilizarse en mapeos genéticos (En este proceso el investigador está en búsqueda de polimorfismos que son heredados junto con la enfermedad, tratando de delimitar estos polimorfismos en regiones más y más pequeñas del cromosoma . Así́ , la región del cromosoma implicada en la enfermedad puede ser progresivamente delimitada, y el gen responsable finalmente puede ser localizado)

20. Fundamento de la técnica Los fragmentos de adn debes de tener un tamaño medio de unas 400 pares de bases. El primer paso es amplificar por PCR la region del gen de interes que queremos estudiar. El producto de la PCR se desnaturaliza calentandolo a 94°c y se enfria rapidamente en hielo

21. El cambio de temperatura debe ser brusco para que las moléculas de cadena simple no vuelvan a hibridar entre sí. y el cambio en alguna de las bases en la secuencia puede cambiar completamente su conformación. Finalmente, los fragmentos reasociados se someten a electroforesis no desnaturalizante en gel de acrilamida, pudiéndose detectar tanto en geles de poliacrilamida como mediante electroforesis capilar con control de la temperatura.

22. cuando no hay mutación en el gel se detectarán únicamente las bandas correspondientes al homodúplex (este va a estar formado por la reasociación parcial de dos hebras de ADN complementarias que se han vuelto a unir durante la electroforesis) haciendo que las cadenas monocatenarias se junten y formen un conformación tridimensional concreta.

23. Bibliografía http://www.medigraphic.com/pdfs/iner/in-2007/in073h.pdf http://centrodeartigo.com/articulos-para-saber-mas/article_41423.html http://sisbib.unmsm.edu.pe/bvrevistas/dermatologia/v09_sup1/tecnicas_2.htm