PR 1-PUNTO ISOELECTRICO DE CASEINA - RESOLUCIÓN.pdf

DETERMINACION DEL PUNTO ISOELECTRICO DE LA CASEINA

1. PRÁCTICA N°01
Aplicación de las buenas prácticas ambientales durante el
desarrollo del curso
PUNTO ISOELECTRICO DE LA CASEINA
Editor:
Dr. MARCO SALAZAR CASTILLO
Coordinador
ESCUELA PROFESIONAL INGENIERÍA AMBIENTAL
CURSO: BIOQUÍMICA AMBIENTAL
SEMANA LECTIVA N°01

2. BUENAS PRÁCTICAS AMBIENTALES
DirectivaN°002-UNT/Rectorado-DRSU-2018→Incorporaciónenlossílabosdelasrecomendacionesen
lasbuenasprácticasambientales.cc
Asumirelcompromisode
mantenerlimpiosy
ordenadoslosambientesde
clases,losmismosque
seránsupervisadoscon
visitasinopinadasacargode
estadirección.

3. PRÁCTICA:
Determinación del punto Isoeléctrico
de la caseína

4. TodaslasproteínastienenunacarganetadependiendodelpHdelmedioenelqueseencuentrenyde
losaminoácidosquelacomponen,asícomodelascargasdecualquierligandoqueseencuentreunidoa
laproteínadeformacovalente(irreversible).
PUNTO ISOELÉCTRICO
Medioácido:laproteínatendría
unacarganetapositiva,debidoa
quelosgruposCOOHdelos
aminoácidos aspárticoy
glutámicoestaríanensuforma
neutraperolosgruposaminode
Argininaylysinaestarían
protonados(-NH3+).
Mediobásico:laproteína
estaría cargada
negativamente,yaqueen
estecasolosgrupos
carboxilo estarían
desprotonados(COO-)ylos
gruposaminoestaríanensu
formaneutra(NH2).
LaproteínatienenunpH
característicoalcualsu
carganetaescero.
Punto Isoeléctrico (pI).

5. Lacaseínaesunafosfoproteína,está
químicamenteunidaaunasustanciaquecontiene
ácidofosfórico.
Enlacaseína,lamayoríadelosgruposfosfato
estánunidosporlosgruposhidroxilodelos
aminoácidosserinaytreonina.
La caseína está formada por alpha(s1), alpha(s2)-
caseína, ß-caseína, y kappa-caseína formando
una micela o unidad soluble.
Esta micela está estabilizada por la kappa caseína
mientras que las alfa y beta son fosfoproteínas
que precipitan en presencia de iones calcio.

6. MATERIALES
OBJETIVOS
❑Determinarelpuntoisoeléctricodelacaseína.
❑DeterminarelpHdelasdistintassoluciones,aplicandola
ecuacióndeHenderson-Hasselbach
▪Solución de ácido acético 1N
▪Solución de caseína al 1 % (en acetato de sodio 0,1 N)
▪Tubos de ensayo
▪Pipetas de 5 mLy 10 mL
▪Gradilla para tubos
▪Agua destilada

7. COMPONENTES Y PROCESO
TUBOS
1 2 3 4 56 7 8 9
Agua destilada (mL) 6.85.05.05.05.05.05.05.05.0
Sol. ácido acético 1 N (mL) 3.2------------------------
Mezclar por inversión.
Medir 5 mLde mezcla del tubo 1 y trasvasarlo al tubo 2. Mezclar por inversión.
Medir 5 mLde mezcla del tubo 2 y trasnferirloal tubo 3. Mezclar por inversión.
Continuar del mismo modo hasta completar la serie de 9 tubos.
En el tubo 9, una vez efectuada la mezcla, medir 5 mLde mezcla y eliminar.
Sol. caseína 1% 1.01.01.01.01.01.01.01.01.0
Mezclar al instante por inversión.
PROCEDIMIENTO
1)SISTEMAPARADETERMINARELpIDELACASEÍNA:

8. 6.8 mL AD
3.2 mL Ac. acético 1N





1.0 mL caseina en acetato de sodio 0,1N
1 2 3 5 6 4 7 8 9
5 mL
5 mL 5 mL
5 mL
5 mL 5 mL 5 mL 5 mL
5 mL I.PROCEDIMIENTO
A)SISTEMAPARADETERMINAR ELpIDELACASEÍNA:
Observar si hay cambios, a los cero y sesenta minutos

10. �??????=4,7+??????�??????
1
8
TUBO 2
pH = 3,8
�??????=4,7+??????�??????
1
4
TUBO 3
pH = 4,1
�??????=4,7+??????�??????
1
2
TUBO 4
pH = 4,4
�??????=4,7+??????�??????
1
1
TUBO 5
pH = 4,7
�??????=4,7+??????�??????
1
0,5
TUBO 2
pH = 5,0
�??????=4,7+??????�??????
1
0,25
TUBO 3
pH = 5,3
�??????=4,7+??????�??????
1
0,125
TUBO 4
pH = 5,6
�??????=4,7+??????�??????
1
0,0625
TUBO 5
pH = 5,9

11. B)VALORACION DELpIDELACASEÍNA:
•EfectodelavariacióndelpHdelmediosobrelasolubilidaddelacaseína:
Seobservasiexistencambiosenelaspectofísicodelasmezclasenlos
diferentestubos,evaluandolapresenciaonodeenturbamientoy/o
precipitado,yaseademanerainmediata(alinstantedemezclar)odespués
de45minutos,considerandolossiguientescriterios:
Nocambia =T(Transparente)
Enturbiamiento =O(Opalescente)
Precipitado =P(Precipitado)

12. COMPONENTES (mL) Y PROCESO
TUBOS
1 2 3 4 5 6 7 8 9
Enturbiamiento al instante de
mezclar
T T O O O O T T T
Enturbiamiento o precipitado a
los 30 minutos
T O OPOPTPPPTO T T T
pH en cada tubo
Observeeltuboendondehipotéticamentesedaríalamáximaprecipitacióny,porende,
lamínimasolubilidaddelacaseína.EseltubodondeelvalordepHdelsistemade
reacciónesmuypróximoalpIdelacaseína.InterpretedichosresultadoseindiqueelpI
aproximadodelacaseínaycompareconelpIteórico.

13. 1 2 3 4 5 6 7 8 9
T T T O O T T T T
T O OP OPT PPPT O T T T
3,5 3,8 4,1 4,4 4,7 5,0 5,3 5,6 5,9
Tiempo
Cero minutos
60 minutos
pH
RESULTADOS
Leyenda:
T= Sin cambios, TRANSPARENTE
O = Opalescencia
P = Precipitado

14. Lacaseínaesunagregadodemacromoléculasdeproteinasyminerales,
juntoconlasalbuminasyglobulinas,conformanlafracciónproteicadelos
sólidosdelalecheenlamayoríadelosmamíferos.
Laκappacaseínaeslaúnicacaseínasolubleenpresenciadeionesde
calcio,tambiénpresentapocosgruposfosfato(5)yunaltocontenidode
carbohidratosdispuestosenunasolacaradesusuperficie(Solubilidad).
Lasproteínaspuedensufrircambiosestructuralespordiferentesfactores,
comotemperatura,cambiosdepH,altapresiónhidrostática,entreotros.
DISCUSIÓN

15. DISCUSIÓN
Enlaleche,elpHes6,6aproximadamente:Lacaseína
estácargadanegativamenteysolubilizadacomosal
cálcica.
La propiedad característica de la caseína
es su baja solubilidad a pH 4,6.
Alañadirácidoalaleche,lacarganegativadelasuperficiedelamicelaseneutraliza(losgruposfosfatose
protonan)ylaproteínaneutraprecipita.
CuandoelpHdisminuyea4,6,lascaseínassecoagulan.
ATemperaturasbajas(<6°C)→agregadosfinosquepermanecen
suspendidos.
Atemperaturasmásaltas(30°C–40°C)→agregadosgrandes
queprecipitanfácilmente.
Enelenelpuntoisoeléctrico(pI),se
encuentraneqporuilibriolascargas
positivasynegativasloquela
proteínapresentasumáxima
posibilidadparaserprecipitadaal
disminuirsusolubilidadyfacilitarsu
agregación.

16. CONCLUSIÓN
UniversidadPablodeOlavide.Extraccióndelacaseinaydeterminacióndelpuntoisoeléctrico.Recuperadode:
https://www.upo.es/depa/webdex/quimfis/docencia/biotec_FQbiomol/Practica3FQB.pdf
Guevara-GarayL.,Cuartas-CastañoD.,Llano-NaranjoF.(2014).Kappacaseínadelaleche:aspectos
bioquímicos,moleculares,productivosynutricionales.Rev.Méd.Risaralda;20(1):29-33.Recuperadode:
http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0122-06672014000100007
Zimmermann-SteinK.,Ruiz-EspinozaH.(2010).Estructurayfuncionalidaddeproteínaslacteas:Efectode
modificacionesinducidaspormediosfísicos,químicosyenzimáticos.TemasSelectosdeIngenieríade
Alimentos;4–2:24-37.Recuperadode:https://www.udlap.mx/WP/tsia/files/No4-Vol-2/TSIA-4(2)-
Zimmermann-Stein-et-al-2010.pdf
-Sedeterminóelpuntoisoeléctricodelacaseína,elcuales………………… ..
BIBLIOGRAFÍA

17. CUESTIONARIO
1.ExpliqueeldiseñoexperimentalparadeterminarelpIdelacaseína:¿Cuáleselpropósitodecada
tubo?.
2.SabiendoquelasolubilidaddeunaproteínaesmínimaenelpI,¿entrequélímitesdepHse
encuentraelpIdelacaseína?.
3.Porquélaconcentracióndelasal,[sal],eneltubo1esiguala1mLdeacetatodesodio0.1N?
4.Porquélaconcentracióndelácido,[ácido],eneltubo1esiguala1.6mLdeácidoacético1Nóa16
mLdeácidoacético0.1N?
5.Porquélaconcentracióndelácidoenlostubos2y3esiguala8y4mLdeácidoacético0.1N,
respectivamente?
6.CalcularelpHdecadatuboosistemadereacción.
7.Definalossiguientestérminos:Transparente,enturbiamiento,opalescente,opaco,translúcido,
precipitado.
8.Definapuntoisoeléctricodeunaproteína.
9.¿Elpuntoisoeléctricodeunaproteínaseráelmismoqueeldesusaminoácidosconstituyentes?
10.ElaboreyexpliqueenprotocolodedeterminacióndelpIdelaovoalvumina.