Procesamiento de tejidos y microtomia [Autoguardado].pptx

histotecnologia

1. Histotecnologia Dra. Maritza Ramos García. Médico residente de patología

2. Contenido 1. Fijación 2. Procesamiento de tejidos Deshidratación Aclaramiento Infiltración 3. Métodos de inclusión 4. Microtomia

3. Fijación Este proceso preserva los tejidos deteniendo la autólisis. El más utilizado para la fijación es la formalina al 10%. Los fijadores pueden ser: Líquidos (alcohol, acetona, formalina, ácido acético.) Sólidos (cloruro de mercurio, tetroxido de osmonio ) PROPHET, E., Mills, B., Arrington , J., & Sobón, L. (1995).  Métodos histotecnológicos . Instituto de Patología de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos de América. Washington DC. Registro de Patología de los Estados Unidos de América (ARP) e Instituto de Patología de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos de América (AFIP).

4. Procesamiento de tejidos Son pasos secuenciales designados para remover toda el agua que se pueda extraer de los tejidos y reemplazarla con un medio que se solidifique para así permitir el corte de los tejidos. PROPHET, E., Mills, B., Arrington , J., & Sobón, L. (1995).  Métodos histotecnológicos . Instituto de Patología de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos de América. Washington DC. Registro de Patología de los Estados Unidos de América (ARP) e Instituto de Patología de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos de América (AFIP).

5. Deshidratación Remover el agua libre del tejido. Agentes para deshidratar como acetona y alcohol etanol. La deshidratación es de manera ascendente y en el tiempo adecuado para su saturación. PROPHET, E., Mills, B., Arrington , J., & Sobón, L. (1995).  Métodos histotecnológicos . Instituto de Patología de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos de América. Washington DC. Registro de Patología de los Estados Unidos de América (ARP) e Instituto de Patología de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos de América (AFIP).

6. Deshidratación Acción de los deshidratantes: Disuelven los lípidos Remueven el agua libre, hace un cambio sencillo entre el tejido. Pasado el tiempo adecuado causa encogimiento, endurecimiento y resequedad del tejido. PROPHET, E., Mills, B., Arrington , J., & Sobón, L. (1995).  Métodos histotecnológicos . Instituto de Patología de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos de América. Washington DC. Registro de Patología de los Estados Unidos de América (ARP) e Instituto de Patología de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos de América (AFIP).

7. Aclaramiento Se utiliza el xilol, ya que la parafina no es miscible con los alcoholes para la infiltración. Xilol es el solvente más usado para aclarar. PROPHET, E., Mills, B., Arrington , J., & Sobón, L. (1995).  Métodos histotecnológicos . Instituto de Patología de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos de América. Washington DC. Registro de Patología de los Estados Unidos de América (ARP) e Instituto de Patología de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos de América (AFIP).

8. Aclaramiento Remueve el deshidratante para que la parafina se infiltre en el tejido. Remueve los lípidos. El exceso del tiempo de aclarado, degenera las moléculas del tejido. PROPHET, E., Mills, B., Arrington , J., & Sobón, L. (1995).  Métodos histotecnológicos . Instituto de Patología de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos de América. Washington DC. Registro de Patología de los Estados Unidos de América (ARP) e Instituto de Patología de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos de América (AFIP).

9. Procesamiento de biopsias pequeñas ESQUEMA CORTO Tiempo total de Procesamiento: 3-4 horas. Tiempo mínimo de fijación 3 horas. Enjuague muy brevemente en agua corriente. Si es necesario, colocar alcohol al 80% Alcohol 95%, 3 cambios…….. De 15-20 min cada uno Alcohol absoluto, 3 cambios……… 15 minutos cada uno Partes iguales de alcohol absoluto y Xileno……. 15 minutos. Xileno, 2 cambios………… 15 minutos cada uno. Parafina, 3 cambio……….. 15 minutos cada uno. Parafina, al vacío………. De 15-20 minutos. Incluya. PROPHET, E., Mills, B., Arrington , J., & Sobón, L. (1995).  Métodos histotecnológicos . Instituto de Patología de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos de América. Washington DC. Registro de Patología de los Estados Unidos de América (ARP) e Instituto de Patología de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos de América (AFIP).

10. Procesamiento para especímenes de rutina ESQUEMA NOCTURNO De 14 a 16 horas Alcohol al 80%....................... 1 hora Alcohol 95%, 3 cambios…….. De 1hora cada uno Alcohol absoluto, 3 cambios……… 1 hora cada uno. Xileno, 3 cambios………… 1 hora cada uno. Parafina, 3 cambio……….. 1 hora cada uno. Parafina, al vacío………. De 1 hora Incluya. PROPHET, E., Mills, B., Arrington , J., & Sobón, L. (1995).  Métodos histotecnológicos . Instituto de Patología de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos de América. Washington DC. Registro de Patología de los Estados Unidos de América (ARP) e Instituto de Patología de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos de América (AFIP).

11. Procesamiento de biopsias grandes ESQUEMA DE PROCESAMIENTO MANUAL 24 HORAS Alcohol al 80%....................... 1 hora Alcohol 95%, 3 cambios…….. De 2 horas cada uno Alcohol absoluto……… hasta la mañana siguiente. Alcohol absoluto, 2cambios……… 1 hora cada uno. Xileno, 3 cambios………… 1 hora cada uno. Parafina, 2 cambio……….. 2 hora cada uno. Solifique en……………..Parafina Derrita ………………….a la mañana siguiente Parafina, al vacío………. De 2 horas Incluya. PROPHET, E., Mills, B., Arrington , J., & Sobón, L. (1995).  Métodos histotecnológicos . Instituto de Patología de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos de América. Washington DC. Registro de Patología de los Estados Unidos de América (ARP) e Instituto de Patología de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos de América (AFIP).

12. Orientación del espécimen PROPHET, E., Mills, B., Arrington , J., & Sobón, L. (1995).  Métodos histotecnológicos . Instituto de Patología de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos de América. Washington DC. Registro de Patología de los Estados Unidos de América (ARP) e Instituto de Patología de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos de América (AFIP).

13. Orientación del espécimen PROPHET, E., Mills, B., Arrington , J., & Sobón, L. (1995).  Métodos histotecnológicos . Instituto de Patología de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos de América. Washington DC. Registro de Patología de los Estados Unidos de América (ARP) e Instituto de Patología de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos de América (AFIP).

14. Inclusión El proceso de rodear un tejido con una sustancia firme como la cera para poder obtener secciones bien delgadas. La parafina es el método de inclusión más común. PROPHET, E., Mills, B., Arrington , J., & Sobón, L. (1995).  Métodos histotecnológicos . Instituto de Patología de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos de América. Washington DC. Registro de Patología de los Estados Unidos de América (ARP) e Instituto de Patología de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos de América (AFIP).

15. Inclusión Parafina con punto de ebullición del 58-60 °C, es la más eficaz. La parafina ideal es la que se expande y se contrae con facilidad, para que el tejido se expanda cuando sea expuesta al baño maría 42-44 °C PROPHET, E., Mills, B., Arrington , J., & Sobón, L. (1995).  Métodos histotecnológicos . Instituto de Patología de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos de América. Washington DC. Registro de Patología de los Estados Unidos de América (ARP) e Instituto de Patología de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos de América (AFIP).

16. Equipos para inclusión Moldes de inclusión Moldes plásticos Moldes de descarte Piezas en L Centros de inclusión PROPHET, E., Mills, B., Arrington , J., & Sobón, L. (1995).  Métodos histotecnológicos . Instituto de Patología de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos de América. Washington DC. Registro de Patología de los Estados Unidos de América (ARP) e Instituto de Patología de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos de América (AFIP).

17. Proceso técnico de inclusión en parafina Calentar las pinzas para prevenir que la parafina se adhiera a ellas. Abrir la cajilla para examinar la muestra del tejido. Seleccionar un molde adecuado y llenarlo de parafina. Recalentar las pinzas y coloque el tejido en el fondo del bloque. Transferir el molde del plato caliente al plato frío. Se va a formar una capa solida en el fondo del bloque que servirá para la posición del tejido PROPHET, E., Mills, B., Arrington , J., & Sobón, L. (1995).  Métodos histotecnológicos . Instituto de Patología de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos de América. Washington DC. Registro de Patología de los Estados Unidos de América (ARP) e Instituto de Patología de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos de América (AFIP).

18. Celoidina Forma purificada de nitrocelulosa, que se obtiene tratando celulosa con ácido sulfúrico y nítrico. Anteriormente se utilizaba celoidina ya que proveía apoyo a especímenes de tejido duro como útero o hueso, y para especímenes frágiles como ojos. PROPHET, E., Mills, B., Arrington , J., & Sobón, L. (1995).  Métodos histotecnológicos . Instituto de Patología de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos de América. Washington DC. Registro de Patología de los Estados Unidos de América (ARP) e Instituto de Patología de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos de América (AFIP).

19. Microtomo Proceso que se realiza para el corte de parafina. Se usan dos clases de microtomos para cortar secciones delgadas: El rotatorio y el deslizante. PROPHET, E., Mills, B., Arrington , J., & Sobón, L. (1995).  Métodos histotecnológicos . Instituto de Patología de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos de América. Washington DC. Registro de Patología de los Estados Unidos de América (ARP) e Instituto de Patología de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos de América (AFIP).

20. Microtomo Características del corte: 6-8 micrones es el grosor adecuado. Color el bloque perpendicularmente a la cuchilla. Colocar algodón húmedo sobre la superficie del bloque 30 seg . A 1 min. Realizar baño de flotación. Una vez realizadas las secciones, se sella la superficie expuesta con parafina. PROPHET, E., Mills, B., Arrington , J., & Sobón, L. (1995).  Métodos histotecnológicos . Instituto de Patología de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos de América. Washington DC. Registro de Patología de los Estados Unidos de América (ARP) e Instituto de Patología de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos de América (AFIP).

21. Problemas al corte PROPHET, E., Mills, B., Arrington , J., & Sobón, L. (1995).  Métodos histotecnológicos . Instituto de Patología de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos de América. Washington DC. Registro de Patología de los Estados Unidos de América (ARP) e Instituto de Patología de las Fuerzas Armadas de los Estados Unidos de América (AFIP).