PRUEBAS PRETRANSFUSIONALES Y DE COMPATIBILIDAD 2.pptx

PRUEBAS PRE TRANSFUSIONALES, BANCO DE SANGRE Y MEDICINA TRANSFUSIONAL.

1. PRUEBAS PRETRANSFUSIONALES y COMPATIBILIDAD D ra . Mariana Z egarra Burgos Esp. Hematolog í a,inmunohematología y Medicina Transfusional

2. Compatibilidad Son el conjunto de procedimientos que deben llevarse a cabo antes de entregar la sangre para transfusión. Las pruebas de compatibilidad garantizan la ausencia de anticuerpos séricos en el paciente, que pueden reaccionar con los glóbulos rojos del donante. Las pruebas de compatibilidad son fundamentales porque podrían producirse reacciones transfusionales debidas a que existen otros sistemas de grupo sanguíneo.

3. Compatibilidad cruzada mayor y menor Compatibilidad cruzada mayor : compatibilidad cruzada entre el suero del paciente (receptor) y los eritrocitos del donante. Compatibilidad cruzada menor: se analizan los glóbulos rojos del paciente (receptor) con suero del donante para detectar anticuerpos séricos relevantes.

4. Pruebas pretransfusionales Las pruebas prestransfusionales se describen a continuación: Preparación de suspensión de glóbulos rojos al 5% Determinación de grupo sanguíneo en tubo Determinación de factor Rh débil (Du) Prueba salina Determinación de prueba cruzada mayor (PAI) en tubo, Prueba de antiglobulina indirecta o Coombs indirecto, titulación de la prueba de antiglobulina indirecta. Prueba de antiglobulina directa (PAD) o Coombs directo, titulación de la prueba de antiglobulina directa.

5. Pruebas pretransfusionales Prueba de hemólisis Preparación de pool Prueba inversa Prueba cruzada mayor (PAI) con albúmina al 22% en tubo. Prueba cruzada mayor (PAI) con solución LISS 0.03 M en tubo

6. Pruebas pretransfusionales Preparación de glóbulos rojos recubiertos de IgG para prueba de antiglobulina. Preparación de células sensibilizadas

7. Preparación de glóbulos rojos al 5% Centrifugar la muestra para separar el suero de los glóbulos rojos, pasar el suero o plasma a otro tubo limpio y rotulado. Colocar 1 a 2gotas de glóbulos rojos en otro tubo en ensayo. Agregar solución salina (suero fisiológico 0,9%) de 1 a 3 ml para realizar los lavados. Centrifugar durante 1 minuto Realizar el lavado de 3 a 4 veces. Luego realizar suspensión de los glóbulos rojos al 5% (50ul G.R.Lav /950ul S.S.) Realizar la determinación de grupo sanguíneo y pruebas pretransfusionales.

8. Determinación de grupo sanguíneo en tubo Preparar una suspensión de hematíes al 5% con S.S. Depositar en un tubo 1gota del reactivo(anti-A, anti-B,anti-D , anti AB y Rhesus control. Añadir una gota de suspensión de hematíes al 5% Mezclar y centrifugar a 3200-3400 rpm durante 1 minuto Observar Interpretación: Positivo: presencia de aglutinación Negativo: ausencia de aglutinación

9. Determinación de grupo Rh D débil (Du) Agregar dos gotas de anti-D mas 1 gota de suspensión de G.R. al 5% en estudio. Incubar a 37°c durante 30 minutos. Examinar en busca de aglutinación. Si se observa aglutinación, registrar la muestra como D positiva. Si no se observa aglutinación , lavar los glóbulos rojos 4 veces. añadir 2 gotas de antiglobulina (AHG) y centrifugar a 3200-3400 rpm por 1 minuto. Leer la reacción: si es positiva ,efectuar la PAD Si es negativa, los resultados de Du son correctos y el paciente o donante debe considerarse Rh Positivo (Du).

10. PRUEBA SALINA Centrifugar la muestra del paciente (Receptor) Realizar una suspensión al 5% de glóbulos rojos de la tubuladura de la bolsa (Donante). Agregar una gota de la suspensión 5% de glóbulos rojos en otro tubo de ensayo + 2gotas de suero o plasma del receptor. Centrifugar a 3200 – 3400 rpm durante 1 minuto Realizar la lectura Interpretación: La aglutinación indica positivo (incompatible) La no aglutinación indica negativo (compatible)

11. PRUEBA SALINA Esta prueba es considerada como la prueba de emergencia para poder observar si hay compatibilidad de grupo ABO, es decir que nos ayuda a ver si está bien el grupo sanguíneo del Donante-Receptor en caso de una incompatibilidad (aglutinación) nos indica que existe un error en grupo sanguíneo del Donante-Receptor.

12. Prueba de antiglobulina directa (PAD) o prueba de Coombs Directo En el PAI se realiza la búsqueda de glóbulos rojos recubiertos con inmunoglobulinas y/o complemento (IgG y C3d). El Coombs directo se realiza a pacientes en los momentos de una reacción hemolítica y en el diagnóstico de anemias hemolíticas autoinmunes, hemólisis inducidas por drogas, y enfermedad hemolítica del recién nacido (EHRN).

13. Coombs directo (PAD) Lave tres veces los hematíes del paciente con solución salina. Haga una suspensión de hematíes lavados 5% Añada en un tubo debidamente rotulado dos gotas de la suspensión. Añada dos gotas de suero de Coombs poliespecífico (AHG). Centrifugue 1 minuto a 3200-3400 rpm. Observar: La aglutinación indica positivo La no aglutinación indica negativo

14. Prueba de antiglobulina Indirecta (PAI) o prueba de Coombs Indirecto El Coombs indirecto determina la presencia de anticuerpos irregulares en el suero del receptor. El Coombs indirecto se realiza a pacientes politransfundidos, embarazadas, multíparas. La compatibilidad entre la sangre del donante y el receptor a transfundir se conoce como Coombs cruzado. El Coombs cruzado es una variante del Coombs indirecto y se realiza a pacientes con antecedentes de reacción post transfusional hemolítica y a multíparas para escoger sangre compatible.

15. Prueba de antiglobulina Indirecta (PAI) o prueba de Coombs Indirecto Centrifugue la muestra de sangre10 min a 3200 rpm para obtener el suero y decántelo en un tubo debidamente identificado.(Receptor) Prepare una suspensión al 5% con la mezcla de hematíes O y en el caso de Coombs cruzado utilice una muestra de la sangre a transfundir para preparar la suspensión. Agregar 2 gotas del suero del paciente y 1 gota de la suspensión de G.R. al 5%. Mezclar y centrifugar Examinar si se forma hemólisis y/o aglutinación. En su presencia la sangre es incompatible. Si en esta etapa (centrifugación rápida) no se observa hemólisis ni aglutinación, mezclar e incubar a 37°c durante 30-60 minutos. Centrifugar y examinar si existe hemólisis y/o aglutinación, en su presencia la sangre es incompatible.

16. Prueba de antiglobulina Indirecta (PAI) o prueba de Coombs Indirecto Si no se observa hemólisis, ni aglutinación, lavar los glóbulos rojos 3-4 veces con S.S. decantar el lavado final. Agitar le tubo y agregar 2 gotas de AHG y mezclar. centrifugar a 3200-3400 rpm por 1 minuto. Retirar los tubos y leer La aglutinación constituye un resultado positivo (incompatible) La no aglutinación constituye un resultado negativo (compatible)

17. Preparación de glóbulos rojos recubiertos de IgG para prueba de antiglobulina Se utiliza glóbulos rojos del grupo O Factor Rh D positivo un volumen de 0,5 ml. Se lava con solución salina 3 a 4 veces. Se agrega 0,5 ml de anti-D a los glóbulos rojos lavados. Incubar a 37 °c durante 30-60 minutos Lavar los G.R. de 3 a 4 veces y resuspender al 5% son S.S. Agregar 2 gotas de AHG A 1 gota de la suspensión al 5%, mezclar y centrifugar. La reacción debe ser +++, si es demasiado potente o débil los G.R. no son apropiados para controlar la antiglobulina. La preparación de células sensibilizadas nos sirve para ver la actividad del suero de Coombs , el reactivo de Rhesus control y como control de calidad de las pruebas del PAI.

18. GRACIAS POR SU ATENCION…