Rflp

1. RFLP Restriction Fragment Lenght Polymorphism Juiz de Fora, 09 de dez embro de 2011. UNIVERSIDADE PRESIDENTE ANTÔNIO CARLOS

2. Grupo Bárbara Tuâne; Carlos Eduardo Cardoso; Marina Cognalato; Poliane Lopes.

3. Introdução A técnica de RFLP foi descrita inicialmete por Botstein em 1980; RFLP é um dos muitos tipos de marcadores moleculares, e são capazes de detectar variações em sequências de DNA de 4 a 8 pares de base, reconhecidas por enzimas de restrição, capazes de clivar DNA por reconhecimento de sequências.

4. Marcadores Genéticos Qualquer característica morfológica ou molecular que diferencia indivíduos, e que seja facilmente detectável é um potencial marcador genético.

5. Marcadores Genéticos Morfológicos Bioquímicos DNA Marcadores moleculares

6. Marcadores Dominantes

7. Marcadores Codominantes

8. RFLP São fragmentos de DNA obtidos de enzimas de restrição, separados por eletroforese e visualizados por meio de hibridizações com sondas marcadas com radioatividade ou fluorescência.

9. Etapas para aquisição de RFLP’s Extração do DNA; Digestão com endonucleases de restrição (cortam a molécula de DNA através do reconhecimento de sequências nucleotídicas específicas); Eletroforese; Transferência dos fragmentos para uma membrana de nitrocelulose; Hibridização dos fragmentos com sondas marcadas; Visualização dos polimorfismos através de auto-radiografia.

10. Base Genéticas dos Marcadores RFLP’s O polimorfismo observado na técnica de RFLP ocorre porque o DNA de indivíduos geneticamente distintos difere na sequência de nucleotídeos ao longo da fita.

11. Interpretação

12. Autoradiografia de uma membrana de hibridização revelando marcadores RFLP. Indivíduos homozigotos para o alelo A1(3,5,6,7,8,9) e homozigotos para os alelos A2(1,2,4).

13. Vantagens e Desvantagens Reprodutível; Marcadores co-dominantes; Simples. Trabalhoso; Caro; Uso de sondas radioativa.

14. Aplicações Mapeamento do Genoma; Genotipagem; Ciência forense; Teste de paternidade; Detecção de doenças hereditárias, etc.

15. Análise do RFLP para a Fibrose Cística

16. PCR-RFLP (AFLP- Amplified Fragment Length Polymorphisms) Isolamento de DNA suficiente para a análise RFLP é demorado e trabalhoso. No entanto, a PCR pode ser usado para amplificar pequenas quantidades de DNA, geralmente em 2-3 horas, para os níveis exigidos para a análise de RFLP. Portanto,mais amostras podem ser analisadas em um curto tempo.

17. Artigo: Identification of a criminal by DNA typing in a rape case in Rio de Janeiro, Brazil. A identificação humana por DNA é uma ferramenta poderosa para casos de paternidade, assim como investigação criminal pela tipagem de evidências biológicas coletadas em cenas de crime e identificação de restos mortais.  

18. OBJETIVO:  Identificação de criminoso em caso de estupro com quatro suspeitos.   PARTICIPANTES:  Sangue de quatro suspeitos e vítima e pele do feto.   PROCEDIMENTOS:  Reação em cadeia da polimerase (PCR) e polimorfismo de tamanho de fragmentos de restrição (RFLP).    

19. RESULTADOS:  Três suspeitos foram excluídos e um suspeito foi incluído como pai biológico do feto. Um teste complementar com 3  loci  VNTR também foi realizado. O suspeito foi incluído como pai biológico apresentando Índice de Paternidade de 412.860 (probabilidade de paternidade: 99,9997%).  

20. Conclusão O desenvolvimento de técnicas baseadas na hibridização de sequências de DNA abriu novas opções para o estudo de variações . A descoberta de enzimas de restrição, a possibilidade de transferência de fragmentos de DNA para membranas e o desenvolvimento de novos métodos de marcação radioativa e luminescente para fins de hibridização de fragmentos de DNA determinaram o emprego eficiente de RFLP em análise genética.

21. Bibliografia Artigo: GOES, Andréa Carla de Souza et al . Identification of a criminal by DNA typing in a rape case in Rio de Janeiro, Brazil.  Sao Paulo Med. J. ,  São Paulo,  v. 120,  n. 3, maio  2002 .   Disponível em <http://www.scielo.br/scielo> Livro: “Marcadores Genéticos Moleculares” – Fábio Gelape Faleiro (2007); Livro: “Introdução ao Uso de Marcadores Moleculares em Análise Genética” – Márcio Elias Ferreira & Dário Grattapaglia (1996); Livro: “Marcadores Moleculares em Plantas” – Sandra Milach (1998); Site: http://www.e-escola.pt/biologia ; Site: http://www.ncbi.nlm.nih.gov ; Site: http://www.sciencedirect.com/

22. Obrigado!