Técnica de Sudan III y PAM (Azul de metileno)

Técnica para concentrar parásitos, PAM (Azul de metileno) Y SUDAN III

1. UNIVERSIDA DR. ANDRES BELLO MATERIA: DIAGNOSTICO PARASITOLOGICO.   DOCENTE : LIC. CECILIA MORALES.   TEMA : METODO DE SUDAN III Y PAM . NOMBRE FRANCIA TAMARA NAJARRO L Ó PEZ.

2. AZUL DE METILENO (PAM) .

3. El azul de metileno se sintetizó originalmente en 1876 como un tinte a base de anilina  para la industria textil (Berneth, 2008), pero científicos como Robert Koch y Paul Ehrlich se dieron cuenta rápidamente de su potencial para usarlo como tinción en microscopía. La observación de la tinción selectiva e inactivación de especies microbianas condujo a hacer pruebas con tintes a base de anilina contra enfermedades tropicales. El azul de metileno fue el primer compuesto de este tipo que se administró a humanos, y se demostró que era efectivo en el tratamiento de la malaria. El azul de metileno también fue el primer compuesto sintético usado como antiséptico en la terapia clínica, y el primer colorante antiséptico que se usó terapéuticamente. De hecho, el uso del azul de metileno y sus derivados fue generalizado antes del advenimiento de las sulfonamidas y la  penicilina HISTORIA.

4. Es la búsqueda de leucocitos polimorfonucleares y mononucleares en una muestra líquida coloreada con azul metileno lo que permite identificar si se trata de un proceso viral o bacteriano . PROPOSITO.

5. 5gr. de heces frescas y líquidas, instruir al paciente sobre la forma de colectar la muestra. MUESTRA REQUERIDA.

6. - Lámina portaobjeto. - Aplicadores de madera. - Aceite de inmersión. - Papel filtro. - Embudo. - Bandeja o soporte de coloración. - Colorante de azul metileno 0.1%. - Guantes descartables. - Marcador de vidrio. - Papel toalla. - Fósforos. - Papel lente. MATERIALES Y REACTIVOS.

7. - Contador diferencial de células . - Microscopio. - Mechero . EQUIPO.

8. - Filtrar el colorante antes de utilizar. - Identificar el portaobjeto a utilizar. - Realizar el extendido de muestra en las dos terceras partes de la lámina. - Dejar secar a temperatura ambiente. - Fijar al calor pasándolo rápidamente sobre la llama de un mechero tres veces en forma horizontal. - Cubrir la lámina con azul de metileno de 30 a 60 segundos. - Eliminar el azúl de metileno tomando el portaobjeto por el extremo numerado inclinándolo hacia delante, y lavar dejando caer una corriente de agua a baja presión sobre la parte en que no hay extendido, la que escurrirá suavemente sobre la película. - Dejar secar a temperatura ambiente. - Observar al microscopio con objetivo de inmersión 100x. - Contar 100 células blancas o leucocitos diferenciando los polimorfonucleares de los mononucleares. PROCEDIMIENTO.

9. - Extendidos gruesos. - Fijación con excesivo calor. - Láminas sucias o grasosas. - Arrastrar la prepración con un lavado brusco FUENTES DE ERROR.

10. Reportar el porcentaje de leucocitos encontrados con el predominio del que tenga mayor porcentaje. Polimorfonucleares ................................... por ciento. Mononucleares .................................. por ciento. Interpretación: Predominio de polimorfonucleares se asume que existe un proceso infeccioso de origen bacteriano. Predominio de Mononucleares se asume que el proceso infeccioso es de origen viral. FORMA DE REPORTE.

11. SUDAN III .

12. El  Sudán III  es un tinte diazol del tipo lisocromo  Utilizado para el reconocimiento de lípidos, porque es insoluble en agua y en cambio es soluble en las grasas . Se basa en el método de Drummey para la detección cualitativa de grasas neutras (triglicéridos). Es una técnica utilizada generalmente para demostrar la presencia de triglicéridos u otros lípidos y lipoproteínas mediante una tinción.   Cuando se efectúa el procedimiento de búsqueda de lípidos: tiñe las grasas de color rojo-anaranjado SUDAN III

13. Cuando se efectúa el procedimiento de búsqueda de lípidos: tiñe las grasas de color rojo-anaranjado

14. La tincion de heces con Sudan III es una prueba cualitativa, sencilla, rápida y muy económica para la detección de esteatorrea. Cuando se efectúa adecuadamente presenta unasensibilidad del 80% - 90% para detectar la presencia de esteatorrea clínicamente significativa. En las heces de las personas normales es posible observar siempre una pequeña cantidad de grasa, que es de origen endógeno, formada por las bacterias y las células epiteliales exfoliadas. VENTAJAS

15. La cantidad de grasa en la dieta puede afectar el resultado de esta prueba; personas normales que ingieren alimentos ricos en grasas pueden tener una cantidad elevada de grasa neutra en esta prueba ; Esta es una prueba de tamizado bastante confiable para descartar esteatorrea en la mayoría de casos; sin embargo, puede ocurrir un resultado negativo en una persona con malabsorción si está ingiriendo muy poca grasa en su dieta DESVENTAJAS

16. Heces fresca , congelada o refrigerada en recipiente apropiado. Lamina laminilla y Palillo de madera. Reactivo , sudan III MUETRAS .

17. En la lamina portaobjetos agregar 2 gotas de sudan III. Tomamos con un palillo de madera o aplicador una pequena muestra de heces y se mezcla. C olocamos una laminilla cubreobjetos . Se observa al microscopio. PROCEDIMIENTO .

18. MICROSCOPICAMENTE.

19. En niños y adultos la presencia de 5 gotas o mas por campo microscopico de 40x se concider patologico . INTERPRETACION DE RESULTADOS.

20. Manual de procedimientos tecnicos de laboratorio clinico del primer nivel de atencion, (2007) de agosto ,pp 13-14. BIBLIOGRÁFIA.