TÉCNICAS INMUNODIAGNÓSTICAS BIOQUÍMICA.pdf

Técnicas inmunodiagnosticas

1. TÉCNICAS
INMUNODIAGNÓSTICAS
DR. JOSÉ ISMAEL SERRANO NOGALES

2. TéCNICASINMUNOLÓGICAS BASADAS EN
REACCIONES DE PRECIPITACIÓN
INMUNODIFUSIÓN RADIAL
La técnica se basa en la difusión de la muestra conteniendo el antígeno a medir.
En una matriz semisólida de agar en la que se encuentra disuelto el Ac
específico.
La muestra biológica se introduce en los orificios cilíndricos excavados en el agar
y a medida que el antígeno difunde en forma radial, se alcanza la relación Ag-
Ac que permite la formación precipitados visibles

3. TéCNICASINMUNOLÓGICAS BASADAS EN
REACCIONES DE PRECIPITACIÓN
INMUNOELECTROFORESIS
La inmunoelectroforesis es una técnica cualitativa que permite la identificación de diferentes
componentes proteicos presentes en distintas muestras biológicas.
La muestra se somete a una separación electroforética.
Terminada la electroforesis, las proteínas interaccionan con los Acsespecíficos aplicados en el agar
en un canal paralelo al eje de migración.
Luego de un período de difusión de los Acs, se observan arcos de precipitación cuya forma y
posición dependen de las características inmunoquímicas y de la concentración de cada proteína

4. TéCNICASINMUNOLÓGICAS BASADAS EN
REACCIONES DE AGLUTINACIÓN
AGLUTINACIÓN DIRECTA
En esencia, los anticuerpos presentes en una muestra se unen a los antígenos en la
superficie de estas partículas, provocando que se aglutinen, es decir, se agrupen
visiblemente.
Preparación de las partículas, mezcla con la muestra, reacción antígeno anticuerpos y
aglutinación.

5. TéCNICASINMUNOLÓGICAS BASADAS EN
REACCIONES DE AGLUTINACIÓN
AGLUTINACIÓN INDIRECTA
Utiliza partículas inertes sensibilizadas con antígenos para detectar anticuerpos en una
muestra. Estos antígenos, unidos a las partículas, interactúan con los anticuerpos presentes en
el suero o líquido biológico de la muestra, provocando la aglutinación.
Sensibilización, reacción Ag-Ac y Aglutinación.

6. TéCNICASINMUNOLÓGICAS BASADAS EN
REACCIONES DE AGLUTINACIÓN

7. TéCNICASINMUNOLÓGICAS -Ensayo de
Inmunoadsorción Ligado a Enzimas (Elisa)
El ELISA se basa e el uso de antígenos o anticuerpos marcados con una enzima, de forma que
los conjugados resultantes tengan actividad tanto inmunológica como enzimática. Al estar uno
de los componentes (antígeno o anticuerpo) marcado con una enzima e insolubilizado sobre
un soporte (inmunoadsorbente) la reacción antígeno-anticuerpo quedará inmovilizada y, por
tanto, será fácilmente revelada mediante la adición de un substrato especifico que al actuar la
enzima producirá un color observable a simple vista o cuantificable mediante el uso de un
espectrofotómetro o un colorímetro.

8. ELISA DIRECTO
En un ELISA directo, el antígeno se une al fondo del pocillo de la microplaca y, a continuación,
se añade un anticuerpo específico del antígeno, conjugado a su vez a una enzima u otra
molécula que permita su detección.

9. ELISA INDIRECTO
En un ELISA indirecto, el antígeno se une al fondo del pocillo de la microplaca y
posteriormente se añade un anticuerpo específico del antígeno. A continuación se une
al primer anticuerpo un anticuerpo secundario conjugado con una enzima u otra
molécula de detección.

10. ELISA COMPETITIVO
En un ELISA competitivo se une al fondo del pocillo de la microplaca un antígeno de
referencia. Se añade a los pocillos la muestra más el anticuerpo y si existe un antígeno
presente en la muestra, compite con el antígeno de referencia por la unión al anticuerpo. El
material no unido se elimina con los lavados. Cuanto más antígeno hay en la muestra, menos
anticuerpo termina unido al fondo de los pocillos a través del antígeno de referencia y, por
tanto, menos señal.

11. ELISA TIPO SÁNDWICH
En el ELISA tipo sándwich se usan dos anticuerpos específicos de dos epítopos diferentes
presentes en el antígeno diana. El anticuerpo de captura se une al fondo del pocillo de la
microplaca uniéndose a uno de los epítopos del antígeno. El anticuerpo de detección se une
a un epítopo diferente del antígeno y está conjugado a una enzima que permite su
detección. (Si el anticuerpo de detección no está conjugado, entonces se necesita un
anticuerpo de detección secundario conjugado con una enzima).

12. ELISA

13. QUIMIOLUMINISCENCIA
La quimioluminiscencia es un fenómeno en el que una reacción química libera energía
en forma de luz visible. Se produce cuando una reacción exoenergética genera una
especie electrónicamente excitada que, al regresar a su estado fundamental, emite
fotones. Este proceso puede ser catalizado por la sangre humana, como se sugiere en
un estudio sobre la quimioluminiscencia inducida por el agente de Fenton y el luminol.

14. EQUIPO DE QUIMIOLUMINISCENCIA

15. CITOMETRÍA
La Citometría de flujo se basa en medir características de cada elemento particulado en
suspensión (principalmente celular), cuando se le incide un rayo de luz. La técnica
necesita de un equipamiento sofisticado y relativamente complejo que combina un
sistema lumínico (rayo de luz de tipo láser y combinación de espejos, filtros y cristales que
llevan la señal luminosa hasta receptores fotomultiplicadores), un sistema fluídico (las
células en suspensión e individualizadas, es decir, sin que se agrupen, se llevan por un
circuito líquido a una cámara de flujo en la que se define un flujo laminar por el que una
célula se sitúa de manera precisa y estable frente al rayo lumínico) y un sistema
electrónico/informático (recoge, maneja y permite representar y cuantificar todos los
parámetros recogidos) para la evaluación de los distintos parámetros lumínicos

16. CITOMETRÍA DE FLUJO