Tanerella forsythia

Apoyo para alumnos de microbiología oral.
Propiedad de Sylvana Chávez

1. Facultad de Odontología Unidad de Aprendizaje: Microbiología Oral Tema: Tannerela Forsythia Sylvana Chávez

2. NOMBRE DEL MICROORGANISMO GÉNERO ESPECIE Bacteria: Bacteroides forsythus , formalmente conocida como Tanerella forsythia Tanerella forsythia MORFOLOGÍA Bacilos TINCIÓN Gram -

3. HÁBITAT Agar TF o caldo TF que contienen  tetraciclina al 5 mg/mL Cavidad oral, principalmente cuando se presenta la enfermedad periodontal . Anaeróbica ATMÓSFERA DE CRECIMIENTO MEDIO DE CULTIVO

4. MECANISMOS DE TRANSMISIÓN La transmisión endógena se produce por aspiración, derramamiento a partir del intestino o lesión de superficies mucosas por traumatismo, cirugía o quimioterapia. FACTORES DE VIRULENCIA Proteasas, lipasas y colagenasas Cápsula Pili ß- lactamasa

5. Absceso Periodontal : Colección de pus localizada en el tejido periodontal . Pude ser Agudo - Crónico. Absceso Periodontal Agudo: Dolor, Edema, Enrojecimiento, Tejido Brillante en la encía marginal en encía insertada, Pérdida de puntilleo del tejido. Absceso Periodontal Crónico: Luego del proceso agudo, podría establecerse un dolor pulsante, y podría regresar a l a fase aguda y alternarse con la fase crónica. Causando daño en los tejidos periodontales circundantes. CUADROS CLÍNICOS

6. MÉTODOS DIAGNÓSTICOS El dentista o el periodoncista están capacitados para juzgar el color y la forma de las encías, para determinar la presencia de dientes flojos, y para utilizar instrumentos pequeños que se introducen cuidadosamente debajo de las encías para conocer la profundidad de las bolsas periodontales. A esta clase de examen se le llama sondeo periodontal y tiene que formar parte de todo examen dental. Disminuir el dolor Control de la infección Drenaje de la colección de pus localizada Se pueden recomendar enjuagues de agua tibia Utilización de antisépticos en solución o en gel Clorhexidina PLAN DE TRATAMIENTO PREVENCIÓN Cepillado dental, acudir al dentista al menos dos veces al año, si se presentan síntomas, acudir más seguido.

7. Artículo: Tannerella forsythia -inducida en pérdida de hueso alveolar en ratones involucra la proteína de Leucina BspA repetida R. Sharma   una  ,  * S. Inagaki   un K. Honma   2 C. Sfintescu   un PJ Baker   3 RT Evans   1 1  Departamento de Biología Oral, Escuela de Medicina Dental de la Universidad Estatal de Nueva York, 3435 Main Street , Buffalo , NY 14214, EE.UU.; 2  Departamento de Microbiología, Centro de Ciencias de la Salud Oral, Universidad Dental de Tokio, Chiba 261-8502, Japón, y 3  Departamento de Biología, Bates College , Lewiston, ME 04240, EE.UU.;

8. Tannerella forsythia  (antes  forsythus Bacteroides )  es uno de los patógenos periodontales recientemente implicado en el desarrollo de la enfermedad periodontal . La superficie celular asociada, así como la proteína secretada, rica en leucina repetida (BSPA) de esta bacteria se ha sugerido que juegan un papel en la adhesión bacteriana, y también en la inflamación, al desencadenar la liberación de citocinas pro-inflamatorias de los monocitos y quimiocinas de los osteoblastos, lo que lleva a la reabsorción ósea y la inflamación. En este estudio, hemos tratado de determinar el potencial patogénico de  T.   Forsythia  y el papel i n vivo  de la proteína en la patogénesis BSPA en el modelo de ratón de la infección-la pérdida de hueso alveolar inducido. Los resultados mostraron la pérdida de hueso alveolar en los ratones infectados con el T.  cepa de tipo salvaje  forsitia ,  mientras que el mutante BSPA se vio afectada. En conclusión, la evidencia se presenta en apoyo de  T.forsitia  como un organismo importante que participa en la inducción de la pérdida de hueso alveolar, y la proteína BSPA es un importante factor de virulencia de esta bacteria.

9. Materiales y métodos Las cepas bacterianas y condiciones de cultivo La inoculación de ratones rBspA Purificación y la Inmunización La detección por PCR para evaluar la infección Respuesta de anticuerpos Respuesta proliferativa de linfocitos Las mediciones del hueso alveolar SDS-PAGE y Western Blot   Estadísticas

10. Cepas bacterianas y condiciones de cultivo T. forsythia ( forsythus B.  ATCC 43037) fue cultivada en caldo o en la TF-TF placas de agar (1,5% de agar en el caldo de TF) en condiciones anaeróbicas como se describió previamente   Un T .   forsitia  mutante (BFM571) defectos en la expresión de la proteína BSPA se cultivó en placas de agar o caldo que contiene tetraciclina al 5 mg / mL.

11. Inoculación de ratones Los ratones fueron infectados por sonda con 10  9   ufc / ml de bacterias vivas  (T. forsythia de tipo salvaje Tf43037, o la cepa mutante BFM571) en 100 L de PBS con 2% de carboximetilcelulosa (CMC) tres veces en intervalos de 48 horas. Los ratones de control (simulado por el VIH) recibieron antibióticos. antes del tratamiento y la sonda CMC sin las bacterias.

12. rBspA Purificación y la Inmunización Los animales fueron inmunizados con la longitud completa de proteínas recombinantes BSPA ( rBspA ), preparado de acuerdo a nuestro procedimiento descrito anteriormente para rBsp70, un derivado truncado expresa la rica en leucina la repetición de dominio de BSPA.

13. La detección por PCR para evaluar la infección Muestras de placa subgingival se obtuvieron de los molares de cada ratón por medio de puntas de papel estéril. En pocas palabras, puntas de papel se colocaron debajo de la encía durante 5 segundos y luego fue trasladado en 1 ml  T.  crecimiento a medio  forsitia  suplementado con 100 mg / ml de gentamicina , y agitó durante 10 segundos. Tras una semana de incubación, el medio se giró a 12.000 x  g  durante 10 minutos, y el total del ADN genómico se aisló bacterias con el uso de la genómica Puregene kit de aislamiento del ADN

14. Respuesta de anticuerpos Cuarenta y dos días después de la última infección, los ratones fueron asesinados, y el suero fue recolectado y almacenado a -70 ° C para la evaluación de las respuestas de IgG específica. Las cantidades de IgG o IgA se determinaron por el ratón IgG o IgA kits de ELISA de cuantificación. 

15. Respuesta proliferativa de linfocitos El índice de estimulación proliferativa (SI) se calculó como el nivel medio de la captación de timidina radiactiva por los cultivos incubados con el estimulante, menos el nivel medio de la absorción por la cultura de control respectivo, sin estimulantes, dividido por la captación de control.

16. Las mediciones del hueso alveolar La pérdida de hueso horizontal alrededor de los molares superiores se evaluó mediante un método morfométrico . Hervidos, huesos de carne de un día para otro se sumergieron en agua oxigenada al 3%, pulsado durante 1 minuto en lejía, y se tiñeron con azul de metileno al 1%. La distancia desde la unión cemento-esmalte a la cresta ósea alveolar (denominado CEJ: ABC) se midió en forma ciega por al menos dos individuos, utilizando un microscopio de disección calibrado (x30), en 14 sitios bucal  por ratón .

17. SDS-PAGE y Western Blot La reactividad específica de IgG e IgA de los ratones con la proteína rBspA se evaluó mediante inmunotransferencia como se describió previamente. La proteína rBspA con electronvoltios a una membrana de nitrocelulosa se utilizó como antígeno.

18. Estadísticas Las diferencias entre grupos se analizaron mediante la prueba  t de Student , y las vías de análisis de varianza con un grupo de comparaciones múltiples se realizaron con la prueba de Tukey . Un valor de p menor de 0,05 fue considerado estadísticamente significativo.

19. Resultados Se determinó la respuesta de anticuerpos séricos contra la bacteria y la proteína BSPA, para confirmar la infección y determinar si  T.   forsitia provocó una respuesta inmune. Tanto el tipo salvaje (Grupo B) y el BFM571 BSPA-mutante (Grupo C) las tensiones que provocan niveles significativos de-toda-la célula anticuerpos específicos anti-después de la infección oral, en comparación con los controles infectados- Sham . Sólo la naturaleza de tipo  T.   forsitia  tensión inducida por anticuerpos anti-BSPA, y, como se esperaba, los animales infectados con el mutante BSPA no producen anticuerpos anti-BSPA, lo que confirma que los animales estaban infectados con éxito con la de tipo salvaje y las cepas mutantes, respectivamente, y que la respuesta anti-BSPA sólo se observó en los animales infectados con la cepa de tipo salvaje.vacunación subcutánea con la proteína de suero rBspA indujo una fuerte respuesta rBspA IgG anti-. 

20. Discusión El posible papel en la patogénesis de la BSPA también se confirma a partir de los resultados que muestra la protección de  T.   forsitia  inducida por la pérdida de hueso alveolar mediante la inmunización rBspA , que dio lugar a BSPA específicos en suero e IgA anticuerpos IgG . Se encontraron porcentajes similares de ratones a ser positiva para  T.   forsitia  por PCR al ser infectados por tanto la de tipo salvaje o la cepa mutante, el apoyo a la idea de que la proteína BSPA no podría ser crucial en la adherencia.Por otra parte, en cada grupo de ratones, ni los niveles de anticuerpos, ni los niveles de hueso fueron significativamente diferentes en los ratones infectados de los que  T.   forsitia  fue detectado por PCR, en comparación con los ratones infectados de los que no lo era.  Además, T .   forsitia  fue recuperado de los ratones que fueron protegidos de la  T.forsitia  inducida por la pérdida de hueso alveolar después de la vacunación rBspA .

21. Conclusión BSPA podría ser un factor de virulencia importante especialmente implicados en la inflamación mediante la activación de la liberación de citoquinas resorción ósea, la IL-β y TNF-α, y / o la activación de quimiocinas participan en el reclutamiento de neutrófilos , lo que lleva a la reabsorción ósea y la inflamación. Además, la proteína BSPA puede promover  a través de  su osteólisis otros (aún por identificar) las funciones de virulencia, especialmente ya que las proteínas que pertenecen a la rica en leucina la repetición de la familia tienen diversas funciones. 

22. Referencias Arakawa S, T Nakajima, Ishikura H, S Ichinose, Ishikawa I, N Tsuchida  (2000).  Novela que induce la apoptosis en la actividad forsythus Bacteroides :  un estudio comparativo con los tres serotipos de  Actinobacillus actinomycetemcomitans .   Infect Immun  68 4611 -4615. Baker PJ, Evans RT, DC Roopenian  (1994).  La infección oral con  Porphyromonas gingivalis  y la pérdida de hueso alveolar inducida en inmunocompetentes y ratones inmunodeficientes severa combinada:.  Arch. Biol. oral  39 1035 -1040. PS Bird, Shakibaie F, E Gemmell , B Polak , Seymour GJ(2001).  Respuesta inmune frente a  forsythus Bacteroides  en un modelo murino .  Oral Microbiol Immunol  16 311 -315. PH Braham , Moncla BJ (1992). Rápida presuntiva de identificación y caracterización de  forsythus Bacteroides :.   J Clin Microbiol  30 649 -654. 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