Tecnica de uso de la parafina

1. TECNICAS DE USO DE LA PARAFINA

2. OBTENCIÓN DE MUESTRAS FIJACIÓN DESHIDRATACIÓN Y ACLARAMIENTO INCLUSIÓN CORTE TINCIÓN DE LOS CORTES MONTAJE OBSERVACIÓN PASOS DE LA TÉCNICA HISTOLÓGICA

3. OBTENCIÓN DE MUESTRAS Todas las muestras de tejido, ya sea obtenidas de materiales quirúrgicos, necropsias, biopsias deben ser procesadas adecuadamente para obtener buenos cortes histológicos.

4. Se debe obtener toda la información posible del material a procesar. OBTENCIÓN DE MUESTRAS

5. En caso de ser necesario se debe realizar un examen y descripción preliminar de los materiales y su adecuación para un correcto procesamiento. OBTENCIÓN DE MUESTRAS

6. OBTENCIÓN DE MUESTRAS

7. FIJACIÓN Tratamiento del tejido con sustancias químicas que no solo retardan las alteraciones hísticas posteriores a la muerte, sino que conservan la configuración normal del tejido.

8. Fijador: Sustancia que detiene en forma rápida los procesos de autólisis y que, al mismo tiempo, conserva los tejidos, en lo posible, en el estado en que se encontraban en la vida. FIJACIÓN

9. Desecación: Extendidos, líquidos de punciones. Calor seco: Bacteriología. Calor húmedo: Microquímica , Zoología. Frío: No es una verdadera fijación. Detiene los procesos de autólisis y necrosis, pero cuando deja de actuar los mismos se reanudan. TIPOS DE FIJADORES Físicos: FIJACIÓN

10. Aldehídos (no precipitan proteínas y no contrae estructuras) . Mercuriales (precipitan proteínas y tóxico por sus vapores). Alcoholes (precipitan proteínas) . Agentes oxidantes (precipitan proteínas y tóxico por sus vapores). Picratos (precipitan proteínas). Químicos: TIPOS DE FIJADORES FIJACIÓN

11. Aldehídos (formaldehido/ glutaraldehido ): Son los más utilizados. Los tejidos son fijados por uniones cruzadas en las proteínas, al reaccionar con los grupos amino. La Formalina (formaldehido al 40%), se utiliza normalmente al 10%, en una solución bufferada . TIPOS DE FIJADORES Químicos: FIJACIÓN

12. FIJACIÓN

13. Un defecto de fijación no puede ser subsanado. Es inútil hacer un estudio histológico de un material mal fijado. No debe olvidarse que: FIJACIÓN

14. DESHIDRATACIÓN Se obtiene por medio de un reactivo anhidro pero ávido de agua: Alcohol Etílico. Alcohol Isopropílico . Alcohol Butílico. Acetona

15. ACLARADO Se debe embeber la pieza con una sustancia miscible con el alcohol y la parafina: Xileno. Tolueno. Benceno.

16. INCLUSIÓN La parafina penetra en los vasos, en los espacios intercelulares y también en el interior de las células embebiendo el tejido y haciendo más fácil la obtención de cortes con el micrótomo.

17. Procesador Automático

18. Procesador Automático

19. Obtención del bloque de parafina de forma regular, para ser cortado con el micrótomo. CONFECCIÓN DEL TACO

20. CONFECCIÓN DEL TACO

21. CORTE Micrótomo Rotativo. Micrótomo de Deslizamiento. Micrótomo de Congelación. Crióstato .

22. Micrótomo Rotativo.

23. Micrótomo Rotativo.

24. Micrótomo Rotativo.

25. Crióstato

26. Crióstato

27. EXTENSIÓN Utilizar portaobjetos limpios y preparados con el adhesivo adecuado. Se realiza en agua tibia (38oC). Precaución: el preparado debe quedar bien extendido y sin pliegues. Rotular.

28. Luego de escurrir el exceso de agua llevar a estufa (60 °C) no más de dos horas. EXTENSIÓN

29. TINCIÓN DE LOS CORTES Los colorantes pueden agruparse en tres clases principales: Colorantes que diferencian los componentes básicos y ácidos de la célula (hematoxilina y eosina). Colorantes especializados que distinguen los componentes fibrosos de la matriz extracelular. Sales metálicas que se precipitan en los tejidos y forman depósitos de metales en ellos.

30. Colorantes empleados con mayor frecuencia en histología:

31. TINCIÓN DE LOS CORTES La reacción de los grupos aniónicos con un colorante básico se denomina BASOFILIA (que tiene afinidad por lo básico) La reacción de los grupos catiónicos con un colorante ácido se denomina EOSINOFILIA (que tiene afinidad por lo ácido)

32. Coloración con Hematoxilina Coloración con Eosina Coloración Hematoxilina-Eosina OBSERVACIÓN

33. Basófilo (azul) Acidófilo (rosado)