TECNICA HISTOLOGICA. INTRODUCCION, IMPORTANCIA, PROCEDIMIENTO.

TECNICA HISTOLOGICA. INTRODUCCION, IMPORTANCIA, PROCEDIMIENTO.

1. LA TECNICA HISTOLOGICA DANIEL BAGATOLI TECNICO PARAMEDICO 2020

2. LA TECNICA HISTOLOGICA CONCEPTO : Es la ciencia que estudia los tejidos. HISTOLOGIA TEJIDO CELULAS BREVE RESEÑA HISTÓRICA : 1819 . MAYER: (1787-1865) acuñó la palabra  HISTOLOGÍA. 1864 . KLEBS: Inclusión en la Parafina. 1866 . HISS: Micrótomo “Era de la Histología con la utilización del Micrótomo”. SIGLO XX: Desarrollo de la ANATOMIA MICROSCOPICA.

3. LA TECNICA HISTOLOGICA

4. LA TECNICA HISTOLOGICA

5. LA TECNICA HISTOLOGICA

6. LA TECNICA HISTOLOGICA

7. La Técnica Histológica es una serie de procedimientos al que se somete a un tejido orgánico para ser observado al microscopio óptico. Se aplica a tejidos muertos . APLICACIONES : Principalmente en la MEDICINA y la BIOLOGIA. Analiza tejidos para Dg. Histopatológico preciso, que no se logra con la Biopsia. Se utiliza para ver los causales de muerte. Y para el estudio comparado de tejidos animales (Biología). LA TECNICA HISTOLOGICA

8. INMEDIATO (BIOPSIA QUIRURGICA) - IN VIVO . TECNICAS : FROTIS SANGUINEO POR PUNCION (sangre y líquidos corporales). POR ASPIRACION (Quistes) POR RASPADO - Área amigdalar HISOPOS DE DACRON (Mucosa Bucal) Saliva de la mucosa oral. ABSORCION (Papel de filtro). 7. Por CONGELACION (N 2 líquido a 195°C, durante la congelación se sumerge en SACAROSA AL 30%. Evita en cristalización. IMPRONTA CITOLOGICA. POR ESCISION (Sacabocados o punch en piel a nivel superficial). POR INCISION POR ENDOSCOPIA 2. MEDIATO (NECROPSIA O POST MORTEM) LA TECNICA HISTOLOGICA Métodos de estudio :

9. TECNICA HISTOLOGICA DE RUTINA. PASOS : Obtención de la muestra Fijación Deshidratación Diafanización o aclaramiento Inclusión Formación del Taco Obtención de cortes Hidratación Tinción Deshidratación Montaje definitivo.

10. TECNICA HISTOLOGICA DE RUTINA. 1. OBTENCION DE LA MUESTRA : Del individuo recién muerto. Para evitar la autólisis . Tamaño de la muestra entre 2 a 3 cm de largo. Anotación de datos en la planilla correspondiente. Colocar el material en cápsulas de PETRI. Rotulación pertinente de la muestra. 2) FIJACION DE LA MUESTRA Se trata a la muestra con sustancias químicas como el FORMOL o el LIQUIDO DE BOUIN (ácido pícrico mas formol al 49%). CUALIDADES DE UN BUEN FIJADOR: Actúa con rapidez. Alto poder de penetración. Conservar la estructura del Tejido. Aumenta la dureza del tejido No producir retracción del Tejido.

11. FIJADOR : Es una sustancia que mantiene a la célula lo más parecida a cuando estaba viva. PRECAUCIONES : Relación Vt / Vf = 10 a 20 veces. No debe flotar ni depositarse en el fondo. De 6 a 24 hs de fijación. Los fijadores actúan como oxidantes. TECNICA HISTOLOGICA DE RUTINA. TIPOS DE FIJADOR : FISICOS : DESECACION CONGELACION QUIMICOS : SIMPLES. COMPUESTOS (Mezclas de líquidos). LIQUIDO DE FLEMING (Osmio – Cromo – Acido Acético). LIQUIDO DE ZENKER (Bicromato y Ácido Acético). LIQUIDO DE BOUIN (Ácido Pícrico y Formol al 40%).

12. 3. DESHIDRATACION : Es el proceso que se utiliza para sacar el H2O del interior de las células, porque nuestro organismo está compuesto por un 70% de ella. Se utiliza Alcohol Etílico en grado creciente (en forma gradual) 70/75/80/85/90/95/100% Nunca directamente al 100% 4. DIAFANIZACION O ACLARAMIENTO : Es el proceso en el cuál se saca la grasa de la muestra. Se utiliza BENZOL o XILOL. Se disuelve la grasa. TECNICA HISTOLOGICA DE RUTINA.

13. 5). INCLUSION : Para M.O. se utiliza Parafina. Para M.E. se utiliza Resina Plástica. PASOS : Viene en forma sólida o en bloque. Se coloca en un Vaso de precipitado Estufa a 60°C. Disolución de la parafina. La parafina ocupa el lugar del agua. Estufa (Renovación de parafina cada dos hs .). MANTIENE LA FORMA DE LA MUESTRA. 6). CONFECCION DEL TACO : PASOS : Saco la parafina de la estufa. Formación del Taco. Se vuelca en un molde (Barra de Leuckart ). Solidificación. Rotulación del molde. Inclusión de la muestra en la para- fina semifluida (se acomoda la muestra con una pinza de acuerdo al corte que voy a mirar, longitu - dinal o transversal). Desmoldo con una espátula ca - liente , formo el taco, que tiene un aspecto de pirámide truncada de base mas ancha. Luego se pega a un taco de madera. TECNICA HISTOLOGICA DE RUTINA.

14. 7) OBTENCION DE CORTES : Para realizar el corte se utiliza el Micrótomo. TIPOS : DE DESLIZAMIENTO (cuchilla móvil). MINOT (Cuchilla fija). Taco prendido y muestra libre. Se desplaza la muestra para el corte. CRIOSTATOS , Se utiliza en la Sala Operatoria. ULTRAMICROTOMO, se lo utiliza para el M.E. MICROTOMO DE CONGELACION O CRIOSTATO Tiene la ventaja de obtener cortes muy rápidos. 8) HIDRATACION : Al CORTE se lo coloca sobre el PORTAOBJETOS (se lo pega con Albúmina de Meyer). DESPARAFINAR: Con Xilol que diluye la parafina. HIDRATACION: En alcohol de grados decrecientes 100/90/80/70/65° TECNICA HISTOLOGICA DE RUTINA.

15. 9) COLORACION : Se la utiliza para distinguir las estructuras de las células. Se utilizan colorantes, porque tiene mayor poder de penetración. COLORACION DE RUTINA : Se utiliza la coloración de Hematoxilina/Eosina (H/E), para observar el núcleo y el citoplasma. CLASIFICACION DE LOS COLORANTES : NATURALES : ANIMAL …..CARMIN VEGETAL …HEMATOXILINA ARTIFICIALES : ANILINA EOSINA La Eosina (colorante ácido) actúa tiñendo el citoplasma celular de color rosado. La Hematoxilina (colorante básico) actúa tiñendo de oscuro el núcleo celular. La coloración de GIEMSA, es neutra y da un color diferente al citoplasma y al núcleo. TECNICA HISTOLOGICA DE RUTINA.

16. Métodos de coloración : De rutina: H/E. Coloraciones especiales Coloraciones Histoquímicas. Pasos : Coloración c/ Hematoxilina Lavado con agua. Viraje de color. Coloración c/ Eosina. Lavado con agua. Viraje de color. Observación de lo hecho. OK. Montaje del Preparado. COLORACIONES ESPECIALES . GIEMSA , para Frotis sanguíneo. Tricrómica de Masson , para las fibras colágenas les da color azul. Coloración de GRAM, Coloración que tiñe de azul a las bacterias (GRAM +) o de rosado (GRAM -) . TECNICA HISTOLOGICA DE RUTINA.

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19. COLORACIONES HISTOQUIMICAS : Se las utilizan porque muestran moléculas que no se distinguen con H/E. FUELGEN : Para ADN. Trata al tejido con HCl diluido, luego se agrega el reactivo de Schiff . PAS : Acido peryódico de Schiff . Se utiliza para observar las células caliciformes. Tiñe a los mucopolisacáridos . SUDAN III : Tiñe células adiposas de rojo escarlata. SUDAN IV : Tiñe a los lípidos de color negro. TECNICA HISTOLOGICA.

20. 10) DESHIDRATACION Y ACLARAMIENTO DEL MATERIAL COLOREADO : Alcoholes decrecientes. 11) MONTAJE FINAL : Colocación del cubreobjeto sobre el portaobjeto. Se toma el portaobjeto con los dedos índice y pulgar por los lados, para evitar que la grasa de la mano contamine la muestra. TECNICA HISTOLOGICA.

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24. PASOS DEL MONTAJE FINAL : Una gota de Albúmina de Meyer o Bálsamo de Canadá. Adherencia al cubreobjeto . Colación lenta e impedir que se forme burbujas de aire. Colocación en Estufa. Secado del porta y cubreobjeto (Muestra) TECNICA HISTOLOGICA PARA MICROSCOPIA ELECTRÓNICA . Cortes de espesor de 1mm. Fijación con Glutaraldehido o tetróxido de Osmio. Deshidratación. Inclusión en resina epoxi. Cortar con Ultramicrótomo (cuchilla de diamante o de vidrio) Recepción de los cortes en agua. Luego se coloca en la rejilla de cobre recubierta. CENTRIFUGACION DIFERENCIAL : Esta técnica se utiliza para obtener y observar fracciones puras de un determinado componente celular (Mitocondrias, núcleos, citoesqueleto , etc ) TECNICA HISTOLOGICA.

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